免疫磁捕获-荧光定量PCR快速检测食品中沙门氏菌

建立了免疫磁珠分离（Immunomagnetic separation,IMS）联合荧光定量PCR（Real-time PCR）技术准确、快速检测食品中沙门氏菌（Salmonella spp）的方法。采用亲和纯化的羊抗沙门氏菌抗体与Dynabeads M-280磁珠制备沙门氏菌免疫磁珠,优化反应条件,建立免疫磁珠分离方法。同时根据沙门氏菌特异性ttr基因,建立Real-time PCR体系,并检测其特异性及敏感性。结果显示,沙门氏菌可产生荧光信号,而其他细菌均未见明显荧光信号。利用所建立的免疫磁捕获-荧光定量PCR（IMS-real-time PCR）方法可以检测初始含菌量最低为6.5CFU/25g的食品样品,全过程需时约8h。150份实际食品样品中,IMS-real-time PCR方法检出27份阳性样品,免疫磁珠联合XLT4平板培养法检出18份阳性样品,传统国标法检出14份阳性样品。      

免疫磁珠分离-实时荧光PCR快速检测虾中沙门氏菌

建立了免疫磁珠分离(Immunomagnetic separation,IMS)联合实时荧光PCR(real time PCR)快速、灵敏地检测虾中沙门氏菌的方法。用纳米磁珠与抗沙门氏菌多克隆抗体制备免疫磁珠,优化反应条件,建立IMS方法。同时针对沙门氏菌ttr基因合成探针和引物,构建real time PCR体系,选4株代表性的沙门氏菌检测其特异性和灵敏度。结果显示,免疫磁珠的最适添加量为100μL,免疫磁珠与样品菌液的最佳反应时间为30 min。建立的免疫磁珠分离-实时荧光PCR(IMS-real time PCR)方法特异性高,对于虾中沙门氏菌的检测限为鼠伤寒沙门氏菌5×10~1 CFU/25 g,猪霍乱沙门氏菌5×10~2 CFU/25 g,肠炎沙门氏菌和甲型副伤寒沙门氏菌1×10~2CFU/25 g,检测全程可在6 h内完成。对40份实际样品,IMS-real time PCR方法与国标法检测结果完全一致。建立的IMS-Real time PCR方法用时短、灵敏度高,为水产品中沙门氏菌的快速检测提供了技术支撑,对沙门氏菌引起的食源性疾病的预防和控制具有现实意义。     

荧光免疫层析法结合免疫磁珠分离技术快速检测单增李斯特菌

为建立单增李斯特菌简单快速、灵敏度高和特异性强的检测方法,本研究以抗单增李斯特菌单克隆抗体偶联磁珠制备免疫磁珠;以羧基荧光微球标记的抗单增李斯特菌多克隆抗体及鼠IgG为标记抗体,抗单增李斯特菌多克隆抗体和羊抗鼠二抗分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。将免疫磁珠分离与荧光免疫层析法相结合应用于单增李斯特菌的现场快速检测中。结果表明:荧光免疫层析试纸条对纯培养单增李斯特菌的检测限为4×105CFU/mL,联合检测方法10倍、100倍浓缩时,检测限分别为4×104CFU/mL和1×104CFU/mL。联合检测体系特异性较好,与实验室保存的10株细菌无交叉反应。人工污染样本检测限为1×104CFU/mL,同纯培养物相比检测灵敏度并没有降低。本方法的建立对于食品中单增李斯特菌的现场快速检测具有重要意义。     

免疫磁珠技术研究进展

该文介绍免疫磁珠结构特点、性质、及其在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化及分子生物学等方面应用,并概述免疫磁珠技术基本原理及其在黄曲霉毒素等检测中应用.     

免疫磁珠捕获-通用引物PCR快速检测食品中致病菌的研究

为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌.结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病菌的最低检测限可达10 cfu,检测致病菌的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现.采用本方法与国标方法分别对50种不同样品进行3种致病菌检测,结果显示两种方法的符合率达100%,特异性相当.与国标方法相比,本方法灵敏度更高,并具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,可以满足大批样品致病菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫等领域.     

免疫磁捕获-实时荧光PCR快速检测鸡肉中沙门氏菌

对免疫磁捕获-实时荧光PCR检测鸡肉中沙门氏菌进行了初步研究。主要包括免疫磁珠制备条件的选择及优化,通过实验最终确定了以6 mg/mL EDC和5 mg/mL NHS活化直径为700 nm的羧基聚苯乙烯磁性微球,与浓度为100μg/mL的沙门氏菌抗体在37℃振荡孵育1.5 h,制备得到抗沙门氏菌免疫磁珠,与市售沙门氏菌免疫磁珠试剂盒(Dynal产品)捕获效率相当。免疫磁捕获-实时荧光PCR检测方法检测限为104 CFU/mL左右,能在16 h内检测出鸡肉中104 CFU/mL的沙门氏菌,可用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

免疫磁珠检测食品中单增李斯特菌的研究

免疫磁珠技术因其具有操作简便、高效快速等特点,目前已被广泛地应用于食品的快速分离纯化和检测领域中。本研究建立了单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)的免疫磁珠(Immune magnetic beads)检测方法,实现对单增李斯特菌的快速检测。通过对单增李斯特菌免疫磁珠添加量、免疫磁珠与菌液最佳反应时间、免疫磁珠分离单增李斯特菌的敏感性试验、特异性试验的研究,确定了单增李斯特菌抗体添加量50μg/mL、免疫磁珠添加量100μL,免疫磁珠与菌液最佳作用时间为30min。结果表明免疫磁珠法可快速特异地检测出食品中单增李斯特菌,检测灵敏度底限为10-7,相应的细菌浓度为14cfu/mL。该方法反应灵敏度高,特异性强,大大节省了检测时间和费用,可用于食品中单增李斯特菌的快速检测。因此研究食品中单增李斯特菌快速、准确检测方法以预防和控制食品安全事件的发生,具有重要的现实意义。     

免疫磁珠技术分离检测熟制食品中的蜡样芽孢杆菌

目的 建立一种免疫磁珠技术分离富集熟制食品中的蜡样芽孢杆菌。方法 在一定量的蜡样芽孢杆菌体系中优化免疫磁珠与抗体用量以及最佳反应时间。在最佳实验条件下, 对免疫磁珠分离蜡样芽孢杆菌的敏感性和特异性进行实验, 并对实际熟制食品的蜡样芽孢杆菌进行分离。结果 最终确定了蜡样芽孢杆菌抗体添加量50 μg/mL、免疫磁珠添加量100 μL, 免疫磁珠与菌液最佳作用时间为15 min, 当菌液稀释度达到10?7, 免疫磁珠法仍然可以检出, 相应的细菌数为4 CFU/mL。结论 本实验制备的免疫磁珠技术灵敏性高, 特异性好, 节省了检测时间和费用, 适用于食品中的蜡样芽孢杆菌的检测。     

基于免疫磁珠前处理的荧光免疫层析法定量检测牦牛肉中金刚烷胺

研究旨在提供一种基于免疫磁珠分离、富集和净化前处理,检测牦牛肉中金刚烷胺残留的荧光免疫层析定量分析方法.通过对免疫磁珠偶联液、抗体偶联量、偶联时间、微球的抗体标记量、金刚烷胺抗原和羊抗鼠二抗包被浓度等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠前处理的时间分辨荧光免疫层析方法(TRIFA),并对其方法的灵敏度、准确度和精密度进行了...     

免疫磁珠捕获PCR快速检测单核细胞增生李斯特氏菌

利用免疫磁珠富集单核细胞增生李斯特氏菌,采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增进行快速检测。所制备的免疫磁珠选取在37 ℃条件下均匀振荡1 h为最佳包被条件,1 mg磁珠偶联抗体的最佳量为100 μg/mg,制备的免疫磁珠捕获率为45%。所建立的免疫磁珠捕获-PCR技术在样品细菌浓度达到104 CFU/mL即可被检出,其灵敏度是直接PCR检测限（105 CFU/mL）的10 倍,可为病原菌的富集和快速检测提供新方法。     

Use of PCR for Detecting Aspergillus flavus in Maize Treated by Gamma Radiation Process

The aim of this study was to verify the effects of gamma radiation process on the fungal DNA and the application of PCR in the detection of Aspergillus flavus in irradiated maize grains. The samples were inoculated with a toxigenic strain and incubated under controlled conditions of relative humidity, water activity, and temperature for 15 days. After incubation, the samples were treated with gamma radiation with doses of 5 and 10 kGy and individually analyzed. The use of PCR technique showed the presence of DNA bands of Aspergillus flavus in all irradiated samples that showed no fungal growth in agar medium.     

免疫磁性糊精微球的制备及快速分离检测单增李斯特菌

研究免疫磁性糊精微球的制备及在快速分离检测单增李斯特菌中的应用。将磁性糊精微球由环氧氯丙烷活化后,与抗体交联制得免疫磁性糊精微球,通过单因素和正交试验对合成条件进行优化。再利用合成好的免疫磁性糊精微球捕获单増李斯特菌,在外加磁场的作用下,富集免疫磁性糊精微球,提取细菌DNA,经过PCR扩增后,进行琼脂糖凝胶电泳。结果表明:活化反应的最佳条件,环氧氯丙烷用量0.4 mL/g,NaOH浓度2.0 mol/L,最佳反应时间5 h;制备免疫磁性糊精微球的最优合成条件:抗体质量浓度1.0 mg/mL,反应温度28℃,反应时间2.5 h;捕获单增李斯特菌时,免疫磁性糊精微球的最佳用量100μL、最佳捕获时间1 h。通过研究得出免疫磁性糊精微球可以快速捕获单增李斯特菌,并能扩增出特异性产物,检出限达到每mL菌液中10个单增李斯特菌。     

免疫磁分离技术在食源性致病菌快速检测中的研究进展

建立食源性致病菌快速高效的检测新方法和策略对控制食源性疾病的爆发至关重要。样品前处理是快速筛选病原体的关键步骤。常规食源性致病菌检测技术通常需要前增菌和选择性分离等预处理过程才能达到提高目标细菌浓度的目的,耗时长且灵敏度低。免疫磁分离技术（immunomagnetic separation,IMS）是一种能够在较短时间内从复杂食品样品中分离和浓缩目标病原菌的技术,已被应用于多种食源性致病菌的检测。本文综述了IMS在食源性致病菌检测中的应用,重点阐述了IMS作用原理、影响IMS效果的因素以及结合其他检测技术在食源性致病菌快速检测中的最新应用研究,以期为该技术更深层次的应用研究和我国食品安全快速检测技术的发展提供理论支持。     

实时荧光定量PCR技术在食品微生物检测和研究中的应用

实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧：艺讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,近年来该技术开始作为食品微生物的研究手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及其在食品微生物检测中的应用与研究进展,并探讨了它的技术发展和应用前景。     

TaqMan实时荧光PCR对沙门氏菌能力验证样品的快速检测与鉴定

本研究依据GB 4789.4-2016标准对沙门氏菌ACAS-PT526能力验证样品进行常规培养法检测,同时使用TaqMan实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术对预增菌培养物进行快速检测和鉴定。本研究首先以沙门氏菌特异性基因hut基因为靶基因,设计合成特异性引物和探针,提取各类食源性菌种的核酸DNA进行实时荧光PCR反应,仅沙门氏菌属出现阳性扩增,非沙门氏菌属、阴性对照和空白对照均无扩增信号,验证设计合成的引物探针具有较高的特异性。其次将能力验证样品和加标样品经预增菌、增菌、分离、纯化、生化试验和血清学鉴定,同时将预增菌培养物经实时荧光PCR测定后,18-D319和加标样品有显著的S型扩增曲线,Ct值分别为24.34和26.21,为沙门氏菌阳性,18-M906无显著荧光信号,Ct值>40.00,为沙门氏菌阴性。经API20E试剂条鉴定,18-D319为猪霍乱沙门菌亚利桑那亚种,鉴定百分率为99.90%,T值为0.97,18-M906为大肠埃希氏菌,鉴定百分率为99.80%,T值为0.94。实时荧光PCR检测结果与常规培养法检测结果一致,且更为简单快速,从预增菌到结果判定仅需12 h,结果准确度高,一批次可检测多个样品,可用于大量样品中沙门氏菌的快速筛查和对能力验证样品的检测验证。     

Highly sensitive PCR-based detection method specific for Aspergillus flavus in wheat flour

Aspergillus flavus is frequently found in food, producing a wide variety of toxins, aflatoxins being the most relevant in food safety. A specific PCR-based protocol for this species is described which allowed discrimination from other closely related species having different profiles of secondary metabolites from the Aspergillus Section Flavi, particularly A. parasiticus. The specific primers were designed on the multi-copy internal transcribed region of the rDNA unit (ITS1-5.8S-ITS2 rDNA) and were tested in a wide sample of related species and other fungal species commonly found in food. The PCR assay was coupled with a fungal enrichment and a DNA extraction method for wheat flour to enhance the sensitivity of the diagnostic protocol. The results indicated that the critical PCR amplification product was clearly observed for wheat flour contaminated by 10² spores after 16 h of incubation.