植物源食品DNA制备方法的比较研究

目的：探索可用作PCR方法检测和鉴定植物源转基因食品模板的DNA抽提方法。方法：分别用改良CTAB法、SDS法制备黄豆、玉米、土豆和番茄及其加工产品的DNA，PCR扩增叶绿体基因片段及黄豆、玉米的内参照基因lectin和zein10。结果：改良CTAB法所得DNA作为PCR扩增模板，叶绿体基因片段及lectin和zein10均呈阳性，SDS法所得DNA作为模板时，部分样品内参照基因lectin或zein10扩增阴性。结论：PCR方法检测转基因食品时，应用改良CTAB法制备DNA模板。     

PCR法检测大豆加工食品中的转基因成分

通过分子生物学手段,以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,建立了检测大豆加工食品中转基因成分的方法。实验分别采用CTAB法和试剂盒(Kit)法对大豆锅巴、豆浆、豆奶粉、豆腐、豆腐丝等五种大豆加工食品中的DNA进行了提取,用内标基因Lectin对此两种方法的提取效果进行了比较,并以提取的DNA为模板,利用不同的引物分别对目标基因35S和NOS进行了PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:Kit法的DNA提取效果优于改良CTAB法,上述五种大豆加工食品中均检测出35S启动子和NOS终止子,且均含有转基因成分。     

白砂糖DNA提取方法的比较

为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度在1.8左右,且通过实时荧光定量PCR能扩增出18Sr DNA基因的对应荧光信号。因此,改良CTAB法能够高效地提取白砂糖的DNA,可为后续的分子检测奠定基础。     

一种适用于大规模转基因作物PCR检测的简易DNA提取方法

近年来,转基因农作物的数量和种类大幅度增加,其安全性一直受到各国政府的重视和关注,转基因食品的检测也是各国贸易壁垒的一个重要方面.PCR技术作为—种快速、准确的核酸检验方法,广泛地应用于转基因农作物和食品的检测中.DNA样品的制备谜度和质量是PCR检测方法的限速步骤之一,本文改进了碱裂法提取植物DNA,并与SDS快速提取法及CTAB法作比较,用于不同长度片段的PCR扩增.结果显示:利用改进后的碱裂解法提取的DNA为模板可以稳定扩增出1000bp以内的片段,这是一种简易的适合于大规模转基因作物和食品PCR检测的DNA提取方法.     

转基因稻米加工食品的PCR检测技术研究

本文对转基因稻米及其加工食品进行了针对标记基因bar、CaMV35S启动子和Nos终止子DNA序列的PCR检测.结果表明,改良SDS法适于提取转基因稻米以及经过蒸煮、微波膨化加工后稻米食品中的DNA并能够满足PCR检测的需要.食品加工使稻米基因组DNA降解为较小的片段,但不影响PCR检测效果,PCR技术能够检测稻米加工食品中的转基因成分.     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

应用PCR方法检测转基因棉籽的研究

对5种转基因棉籽和3种非转基因棉籽,应用改良CTAB法和改良KIT法提取DNA模板,对35S、NOS、Bt等基因进行了检测研究,并确定了在检测Bt基因时的灵敏度。     

适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

马铃薯及其制品中转基因成分的多重PCR检测

采用CTAB法提取15个马铃薯及其制品样品中的总DNA,内源PATA基因的PCR扩增结果均为阳性,表明已提取到DNA。应用根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因(nos)终止子和大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(nptⅡ)基因的二重PCR对样品进行转基因成分检测,结果均为阴性。将马铃薯DNA和阳性质粒pBI121混合作为PCR的反应模板,建立了内源PATA基因、花椰菜花叶病毒(Cauliflowermosaicvirus,CaMV)35S启动子、nos终止子和nptⅡ基因之间的多重PCR检测方法。多重PCR方法具有节约试剂、节省时间等特点,在转基因产品检测上的应用值得推广。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量。方法用酚-氯仿法、改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量。结果改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带。结论改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法。     

白粿干模拟转基因样品前处理与荧光PCR检测体系的优化

为提高米制品中转基因成分实时荧光聚合酶链式反应检测的灵敏度与检出率,应用模拟转基因白粿干样 品,对影响检测结果的主要因素,包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在十六烷基三甲基溴化铵裂解缓冲液中 温育时间等因素进行优化。结果表明：提取的DNA量在样品颗粒细度与十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间的9 种 处理组合间都有极显著差异,其中最优条件为样品颗粒细度＞100 目、十六烷基三甲基溴化铵缓冲液温育时间＞8 h （过夜）。采用最优前处理组合,样品的主要转基因成分检出限从公认的转基因含量0.01%（m/m）降到0.001%（m/m）, 检测灵敏度提高10 倍,有效提高了米制品转基因成分检测结果的准确性。     

改良十六烷基三甲基溴化铵-磁珠核酸提取方法及在植物转基因检测中的应用

目的 建立一种快速、高效、便捷的植物基因组DNA提取方法并运用于植物转基因检测。方法 改良传统的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium ammonium bromide, CTAB)方法, 并结合磁珠吸附基因组DNA, 配合核酸自动提取系统提取水稻和加工米粉中的核酸, 荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)检测Bt63大米转基因成分, 并与另外4种提取方法的结果进行对比, 评价提取效果。结果 5种不同方法中CTAB-磁珠法提取的样品基因组DNA浓度和质量最佳, 荧光PCR检测低浓度Bt63转基因成分(0.01%)的Ct值最小, 检测结果最好。结论 该方法可高效快速地提取植物核酸, 在低含量的转基因成分检测中相比其他几种方法具有绝对优势。     

豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究

通过改进鼠肠道微生物基因组DNA提取方法以期更全面地反映鼠肠道茵群的真实情况.采用CTAB和SDS结合的方法裂解细胞,同时改进了传统的酚/氯仿抽提方法,提取全过程控制在2 h以内.通过紫外分光光度计,细菌通用引物PCR,总菌群实时定量PCR,变性梯度凝胶电泳(DGGE)对改进方法及两种试剂盒法提取DNA的结果进行比较,评价了所建立的高效提取方法.与试剂盒相比,改进的方法DNA得率较高,简便快速,成本低廉.同时后续的PCR鉴定及DGGE菌群多样性分析显示,改进的方法可以更好地揭示鼠肠道菌群分布和特性.     

Extraction Technique and Characteristics of Soluble Protein in Germinated Brown Rice

Effects of germination methods and extraction conditions on soluble protein yield in brown rice were investigated. Extraction temperature and solid to solvent ratio were significant factors. Highest soluble protein yields were obtained from germinated brown rice at 41.5°C for 2 h using a solid to solvent ratio of 1:10 at pH 8.5. This was about 20% higher than that from non-germinated brown rice. Characteristics of the extracted protein from germinated rice indicated an improved solubility, a lower isoeletric point, a reduction in high molecular weight components and an increase in small peptides compared to non-germinated rice.     

小麦表面微生物总DNA提取方法的比较与改进

对小麦表面微生物总DNA提取方法进行了探讨，从液氮冻融，裂解剂，蛋白酶K的加入，缓冲液等方面对SDS与SDS／CTAB两种方法加以改进。结果表明，改进后SDS法提取的DNA降解现象与纯度有很大改善，量也有所增加；SDS／CTAB法改进后浓度与提取率明显增加，纯度也较高。两种方法改进后提取的DNA分子量大小都集中在23kb左右，且不经纯化可直接扩增出16SrRNA基因。     

基于机器视觉的谷糙分界线检测方法

目的：精准识别谷糙分界线。方法：提出一种基于直线边缘检测的谷糙分界线识别方法。该方法对不同颜色特征的谷糙分离图像进行模型匹配，将不同匹配结果的图像采用对应的灰度化处理方式；并利用直线边缘检测算法对该边缘进行灰度波动变换、差分处理得到目标位置。结果：相较于传统的边缘检测方法，该方法将误差范围控制在5%以内，大幅提高了识别精度。结论：该方法的识别误差相对较小，适合用于谷糙分界线的识别应用。