酒曲发酵产凝乳酶及其酶学特性研究北大核心CSCD

通过研究不同因素对酒曲发酵产凝乳酶的影响,确定适宜的产酶条件:酒曲添加量3%(质量分数),发酵时间4 d,培养基初始p H值为6.0,摇床转速120 r/min。利用乙醇分级沉淀对酒曲发酵液中的凝乳酶进行提取,得到体积分数为70%乙醇沉淀蛋白具有凝乳活力;进一步进行Sephadex G-75凝胶过滤得到纯化凝乳酶,并经SDS-PAGE电泳分析,确定酶的分子量为35.6 ku。对此纯化酶的酶学特性的研究表明,该酶的最适温度为40℃,p H值为5.4时酶活性最高,Ca2+,Zn2+,Mg2+和K+对酶活性具有促进作用,其中以Ca2+和Zn2+促进作用较强;Cu2+,Na+和Fe2+对酶活性有抑制作用,其中Cu2+的作用较为显著。该凝乳酶在干酪加工中具有潜在的应用前景。     

酒曲发酵产凝乳酶及其酶学特性研究

通过研究不同因素对酒曲发酵产凝乳酶的影响,确定适宜的产酶条件:酒曲添加量3%(质量分数),发酵时间4 d,培养基初始p H值为6.0,摇床转速120 r/min。利用乙醇分级沉淀对酒曲发酵液中的凝乳酶进行提取,得到体积分数为70%乙醇沉淀蛋白具有凝乳活力;进一步进行Sephadex G-75凝胶过滤得到纯化凝乳酶,并经SDS-PAGE电泳分析,确定酶的分子量为35.6 ku。对此纯化酶的酶学特性的研究表明,该酶的最适温度为40℃,p H值为5.4时酶活性最高,Ca2+,Zn2+,Mg2+和K+对酶活性具有促进作用,其中以Ca2+和Zn2+促进作用较强;Cu2+,Na+和Fe2+对酶活性有抑制作用,其中Cu2+的作用较为显著。该凝乳酶在干酪加工中具有潜在的应用前景。     

火龙果过氧化氢酶活性的研究

以火龙果中的过氧化氢酶（CAT）为研究对象,对其酶的活性变化及其特性的研究表明,火龙果中的过氧化氢酶的最适温度为30℃,最适pH为7.0。甲醇和乙醇对火龙果中过氧化氢酶活性的影响均表现为低浓度对该酶具有激活作用,高浓度转为抑制作用。金属离子Cu2+对该酶有不同程度的激活作用,而Mn2+和Na+则对该酶有一定程度的抑制作用。      

不同提取条件对苦荞粉中芦丁提取率的影响

研究了不同提取条件对苦养粉中芦丁提取率及芦丁降解的影响,设计正交试验,优化芦丁提取工艺条件,优化提取条件为:体积分数为50%的乙醇溶液,料液比(g:mL)1:10,60℃条件下提取1h,提取2次。采用薄层层析法(TLC),分析了低体积分数乙醇溶液中,芦丁在芦丁降解酶的作用下降解,有乙基-β-芸香糖苷的生成。因此,为保证芦丁的高效提取,乙醇体积分数应高于50%。     

节杆菌10137产β-呋喃果糖苷酶条件及酶学性质

研究表明,节杆菌10137产β 呋喃果糖苷酶的最佳条件为:温度为30℃,pH值7 5,接种体积分数为2%,装液体积为40mL.该条件下β 呋喃果糖苷酶的转移酶活为177.78U/mL,酶作用最适pH值为6.5,最适温度为30℃,在pH值为6.0～8.0和45℃以下稳定.Ag+和Cu2+对该酶有较强烈的抑制作用,EDTA和Mg2+对酶活也有一定影响.     

中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

酶法水解大豆异黄酮

利用Absidiasp R菌株 ,通过液体发酵 ,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖苷水解酶 ,该酶水解糖苷型大豆异黄酮的最适底物浓度为 7 5mg/mL ;最适反应时间为 1 5h ;该酶在温度为 2 0～5 0℃、pH为 4 0～ 7 0范围内相对稳定 ,最适酶解反应温度为 40℃ ,最适pH值为 5 0 ;金属离子对该酶活力的影响不显著 ,其中Co2 +、Zn2 +对该酶有激活作用 ,Ag+、Cu2 +对该酶有抑制作用 ,Fe3+浓度<5 0mmol/L时 ,对该酶有促进作用 ,当离子浓度 >5 0mmol/L时 ,则有抑制作用。利用实验获得的最适酶解条件反应 ,可使染料木苷生成染料木素的转化率达到 1 0 0 %。     

乙醇对角质酶性质的影响

研究了乙醇溶液对角质酶性质的影响,同时用圆二色光谱和荧光光谱法对经过硫酸铵沉淀、镍柱亲和层析等方法获得的电泳纯角质酶进行了构象研究。结果表明,在体积分数40%、30%和20%乙醇溶液中角质酶催化反应的最适温度分别为50、55和65℃;在37℃下,酶在体积分数20%～50%乙醇中具有较好的稳定性,体积分数30%和40%乙醇对角质酶具有激活作用;角质酶在体积分数30%和50%乙醇中催化反应的最适pH分别为9.5和9.0;在体积分数30%乙醇溶液中角质酶的pH稳定范围为6.5～10.5。角质酶在50℃的乙醇溶液中的失活动力学研究表明,角质酶的失活属于一级动力学反应(R2>0.98)。从角质酶构象的研究结果可以看出,在乙醇体系中角质酶的二级结构和三级结构都发生了相应的变化。     

嗜酸乳杆菌胆盐水解酶的分离纯化及酶学性质

对嗜酸乳杆菌La-XH1产生的胆盐水解酶进行分离纯化,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明：嗜酸乳杆菌La-XH1胆盐水解酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B柱层析后的酶比活力分别为47.82 U/mg和115.85 U/mg,纯化倍数分别为4.46 倍和10.82 倍,酶的回收率分别为59.89%和25.11%;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）电泳分析,该酶的分子质量约为43 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6.0,Fe3+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+对该酶有激活作用,其中Fe3+的激活作用最强,Na+、K+对该酶几乎无作用,而Cu2+、Ba2+对该酶有很强的抑制作用。     

氨基甲酸乙酯水解酶异源表达及酶学性质分析

将合成的来源于长孢洛德酵母菌（Lodderomyces elongisporus）属的氨基甲酸乙酯水解酶基因在大肠杆菌中实现异源表达,并进行纯化及其酶学性质研究。摇床培养后酶的比活力为4.52 U/mg,经过镍离子亲和层析柱纯化至显示单一条带后酶的比活力为9.86U/mg。酶学性质研究表明,氨基甲酸乙酯水解酶的最适反应温度为30℃;最适pH值为7.0;金属离子Mg2+对该水解酶的酶活有微弱的促进作用,而Cu2+以及Fe3+对酶的活性有强烈的抑制作用;对低含量的乙醇溶液与NaCl溶液有一定的耐受性;并且该水解酶可以对不同底物的酰胺类化合物进行有效降解,以氨基甲酸乙酯（ethyl carbamate,EC）为底物进行反应时测得水解酶的动力学参数Km值为6.64 mmol/L,最大反应速率Vmax值为8.24 μmol/min。     

植物乳杆菌漆酶的酶学性质及其对生物胺的降解作用

为研究乳酸菌来源的漆酶酶学性质及其在生物胺降解中的应用潜力,以来源于植物乳杆菌的漆酶编码基因为研究对象,对其进行异源表达及酶学性质的研究,测定其最适温度和pH值、金属离子及螯合剂对漆酶活性的影响、重组漆酶对不同体积分数的乙醇的耐受性以及重组酶对生物胺的降解作用。结果表明,重组漆酶最适温度为40℃,最适pH值为4.0;低浓度的Mg²⁺、Zn²⁺和Ca²⁺对重组漆酶活力具有不同程度的促进作用,其中Zn²⁺和Ca²⁺的促进作用最为明显;反之,高浓度的Mn²⁺、Fe²⁺和乙二胺四乙酸能够抑制重组漆酶活力至原本的15%甚至更低;2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)为底物时重组酶的米氏常数为2.49 mmol/L,最大反应速率为0.22 mmol/(L·min);重组漆酶对低体积分数乙醇具有很好的耐受性,在含有20%乙醇的体系中保存1 h后相对酶活力仍可达75%以上。生物胺降解实验表明,重组漆酶对酪胺和色胺的降解率达到了100%,对亚...     

甘薯叶过氧化物酶的分离纯化及其部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到过氧化物酶(POD)电泳纯制品。该酶比活力为91923.14U/mg,纯化倍数为255.69,回收率为1.59%。该酶分子量约为35kD,最适pH值为5.6,最适温度为60℃。该酶在20～50℃、pH4～8内稳定。以不同浓度H2O2为底物在pH7.2和25℃下测得该酶Km值为0.291mol/L。低浓度草酸、尿素、Li+、Na+、K+、Mg2+等对该酶有激活作用;SDS、KSCN、抗坏血酸(AsA)、Mn2+等对该酶有抑制作用;甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对POD均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇>乙醇>甲醇>乙二醇。实验表明,该酶稳定性较强。     

黄瓜过氧化物酶的分离纯化及酶学性质

新鲜的黄瓜经匀浆、抽提、硫酸铵沉淀、CM-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析后获得电泳纯的过氧化物酶。该酶的比活力、回收率及纯化倍数分别为64 177.67 U/mg、9.58%、61.93。该酶的分子质量为41.15 kD,亚基分子质量为40.21 kD。该酶的最适温度和最适pH值分别为60 ℃和6。在25～45 ℃及pH 5～9的范围内非常的稳定。在测定条件下测得该酶的Km值为53.79 mmol/L。硫氰化钾对该酶活力基本无影响。尿素、K+、Mn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+对该酶都具有激活作用且浓度至50 mmol/L时酶活力分别被激活至112%、127%、113%、128%、139%、199%、348%,然而十二烷基磺酸钠、抗坏血酸和草酸对该酶有强烈的抑制作用;Zn2+、甲醇、乙醇和异丙醇对该酶有一定的抑制作用。     

正交设计和响应面法优化荞麦中芦丁提取工艺的比较

为获得荞麦中芦丁提取的最佳工艺及对实验优化设计方法的选择提供指导,通过正交试验和响应面法分析了乙醇回流提取芦丁的工艺条件,以提取率为考察指标,研究了提取时间、提取温度、料液比和乙醇体积分数对提取效果的影响。结果表明:两种方法在分析各因素对芦丁提取率的影响上所得结果基本一致,即提取时间>乙醇体积分数>提取温度>料液比,正交试验确定的最佳工艺为:提取时间120 min、乙醇体积分数100%、提取温度90℃、料液比1∶30;响应面法确定的最佳工艺为:提取时间114 min、乙醇体积分数96%、提取温度86℃、料液比1∶32。通过二者确定的最佳条件进行验证试验,结果表明按照响应面法分析的最优工艺条件所得的提取率高于正交试验6.91%。因此,荞麦中芦丁提取的最优工艺以响应面法为准,该条件下荞麦中芦丁的提取率可达0.3452 mg/g。     

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

超声辅助提取红枣中芦丁的工艺研究

在超声辅助下提取红枣中的芦丁,以芦丁提取率为评价指标考察了超声提取温度、提取时间和料液比等因素对芦丁得率的影响。正交试验结果表明最佳提取工艺:用体积分数95%的乙醇为溶剂时,超声提取温度60℃,时间20 min,料液比1:20时,得率最高24.2%。     

米根霉产糖化酶发酵条件的研究

以R.SCLG 0319菌株的糖化酶催化活性为指标,研究了发酵时间、温度、装液量、初始pH值及相关金属离子等因素对该菌株发酵产糖化酶活力的影响.结果表明,R.SCLG 0319菌株摇瓶发酵产糖化酶40h为宜,最适发酵温度30℃,装液量100mL/250mL,培养基初始pH值6.0;菌株对低浓度乙醇作用呈现依赖性,培养基中6%vol酒精度时酶活力达到135 U/mL,可耐12%vol酒精度,在高浓度乙醇作用下酶活力迅速下降;Cu2+、Ca2+ 和Mg2+呈现激活效应,其中Mg2+的效应最明显,酶活力增强50%,Fe2+、Zn2+ 和Mn2+呈现出抑制效应,其中Fe2+的抑制作用最大,酶活力降低近80%.     

粗糙脉孢菌木聚糖酶酶学性质的研究

对粗糙脉孢菌木聚糖酶粗酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该木聚糖酶的最适反应温度50℃、pH值为5.8,温度低于50%、pH 4.6～7.4时该酶稳定性较好;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+对该酶的活性有促进作用,K+、Na+、Pb2+、Cu2+、Fe3+、Al3+对酶的活性有抑制作用;EDTA、SDS、DMSO对该酶活性的抑制作用较小;以木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为1.30g/L和1.35μmol/(min·mL).     

海洋肌酐水解酶菌株的筛选鉴定及其酶学性质研究

从渤海海泥中筛选出一株肌酐水解酶高产菌株S-09,经形态学、生理生化特征并结合16S rDNA系统发育分析,鉴定菌株为微小杆菌属(Exiguobacterium sp.)。对所产肌酐水解酶进行酶学性质研究表明,该酶的最适作用温度为30 ℃,热稳定性较差;最适作用pH值为7.5,碱性条件下,pH值稳定性较好;Co2+、Mn2+对酶的激活作用较强,Ag+、Hg2+对酶有显著的抑制作用。     

响应面法优化槐米中芦丁的溶剂热法提取工艺

对槐米中芦丁的溶剂热提取工艺进行了优化。以芦丁提取率为评价指标,通过单因素实验研究了乙醇体积分数、提取时间、提取温度以及液料比对芦丁提取率的影响,并结合星点试验设计和响应面分析法对溶剂热法提取工艺进行了优化。结果表明,芦丁的溶剂热法提取的最佳条件为乙醇体积分数61%,提取时间33 min,提取温度72℃,液料比100 mL/g。在此条件下,芦丁提取率为19.07±0.46%,与模型预测值18.93%相近,与乙醇回流法相比,该工艺具有提取率高、时间短、操作简便等优点,为芦丁的提取提供了一种新方法。