荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPARγ、C-ski 表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from litchi,TFL)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的抑制作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、C-ski表达的影响,探究荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养HSC,分为空白对照组、荔枝核总黄酮浓度20 mg·L~(-1)组、40 mg·L~(-1)组、80 mg·L~(-1)组、160 mg·L~(-1)组、200 mg·L~(-1)组,分别干预48 h后,通过CCK-8法检测每组细胞的增殖情况。再设置为空白组、PPARγ天然配体前列腺素J2(15-d-PGJ2)对照组(5μmol·L~(-1))、15-d-PGJ(2 5μmol·L~(-1))+TFL(100μmol·L~(-1))对照组、TFL组(100μmol·L~(-1)),ELISA法检测每组细胞中Smad3/4的含量;qPCR法检测每组细胞中PPAR-γ、C-ski mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,在作用时间相同的情况下,随着TFL作用剂量的增加,药物对细胞增殖的抑制率增高(P<0.05);ELISA结果显示,TFL实验组中的Smad3/4含量明显降低(P<0.05);qPCR结果显示,TFL实验组中PPARγ、C-ski mRNA的表达量均明显增加(P<0.05)。结论:荔枝核总黄酮能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与抑制HSC-T6细胞中的Smad3/4含量,上调PPAR-γ及C-ski mRNA表达相关。     

白藜芦醇对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究白藜芦醇抑制人上皮性卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡的作用及机制。方法:将人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞随机分为5组,即正常对照组、白藜芦醇高剂量组(40 mg·L~(-1))、白藜芦醇中剂量组(20 mg·L~(-1))、白藜芦醇低剂量组(10 mg·L~(-1))和顺铂组(40 mg·L~(-1))。干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,MTT比色法检测各组细胞增值抑制率。通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、流式细胞术检测细胞凋亡并计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,Western blot法检测细胞caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,白藜芦醇高、中剂量组细胞出现变圆、脱壁、细胞间接触松散等状态,细胞抑制作用明显、增殖抑制率显著升高(P<0.01);白藜芦醇各剂量组细胞周期被阻滞于G2/M期,白藜芦醇高、中剂量组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),同时可明显下调Bcl-2 mRNA而上调Bax mRNA表达,显著提高Bax/Bcl-2值(P<0.05,P<0.01),上调caspase-3蛋白表达(P<0.01)。结论:白藜芦醇能够通过抑制增殖并促进凋亡对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与白藜芦醇调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

镉胁迫对鬼针草和狼尾草种子萌发及幼苗生长的影响

为探究重金属镉(Cd~(2+))胁迫对超积累植物种子萌发和幼苗生长的影响,采用水培法,研究了不同Cd~(2+)浓度(0、8、40 mg·L~(-1)和200 mg·L~(-1))对鬼针草和狼尾草种子萌发及幼苗生长的影响,并通过隶属函数法综合评价2种超积累植物对重金属镉的耐性.结果表明:镉胁迫下鬼针草和狼尾草种子的发芽率、发芽势和活力指数呈先升后降的趋势,鬼针草与狼尾草相比差异显著(P<0.05).Cd~(2+)浓度分别为8 mg·L~(-1)和40 mg·L~(-1)时鬼针草和狼尾草的幼苗根长分别达到最大值,Cd~(2+)浓度为200 mg·L~(-1)时,鬼针草和狼尾草幼苗的根长最低;鬼针草的芽长随Cd~(2+)浓度的增加呈先升后降的趋势,而狼尾草呈下降的趋势,Cd~(2+)浓度为40 mg·L~(-1)时鬼针草的芽长达到最大值.两种超积累植物对Cd~(2+)的耐受性强弱顺序为鬼针草>狼尾草,在进行重金属镉污染的土壤修复时可优先选择鬼针草.     

山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖、迁移的影响。方法:利用细胞培养技术对人乳腺癌T-47D细胞进行培养;利用MTT法比较不同浓度山慈菇水煎剂组和对照组对T-47D细胞生长增殖情况的影响;利用细胞划痕实验,检测不同浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞迁移的影响。结果:不同浓度的山慈菇水煎剂(50 g·L~(-1)、100 g·L~(-1)、200 g·L~(-1),400 g·L~(-1)、600 g·L~(-1)、800 g·L~(-1))对T-47D细胞的生长抑制率分别为-0.60%、-17.10%、-0.60%、65.08%、81.15%、82.80%,400~800 g·L~(-1)质量浓度山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D细胞的增殖有明显抑制作用;划痕实验结果显示200 g·L~(-1)、300g·L~(-1)山慈菇水煎剂作用24h和48h后,与对照组比较,乳腺癌T-47D细胞的划痕距离较大,划痕未见明显愈合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞生长增殖具有抑制作用,低浓度(<200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对T-47D细胞的生长增殖无影响,即无细胞毒性;高浓度(>200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D的增殖有明显的抑制作用;一定浓度的山慈菇水煎剂可以抑制T-47D细胞的迁移运动。     

藤梨根制剂对胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9和SDF-1表达的影响

目的:通过观察藤梨根制剂对胃癌细胞基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达的影响,探讨藤梨根制剂的抗胃癌机制。方法:分别采用0 g·L~(-1)、15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂处理胃癌SGC-7901细胞,分别处理12 h、24 h、48 h、72 h,采用噻唑蓝比色法(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)实验检测胃癌SGC-7901细胞增殖情况,采用Transwell实验及细胞划痕实验检测胃癌SGC-7901细胞侵袭、迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白表达水平。结果:MTT检测结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)、30 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);细胞划痕实验结果可见,15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显降低胃癌SGC-7901细胞迁移能力,且呈现一定剂量、时间依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,且呈现一定剂量依赖性(P<0.05);15 g·L~(-1)、20 g·L~(-1)、25 g·L~(-1)藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1 m RNA及蛋白水平表达,且呈现一定剂量依赖性。结论:藤梨根制剂可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,其作用机制可能为下调胃癌细胞MMP-2、MMP-9、SDF-1表达。     

鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠软骨终板细胞增殖和CollagenⅠ、CollagenⅡ、IL-6 mRNA表达的影响

目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL~(-1)β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞增殖和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,CollagenⅠ)、CollagenⅡ、白细胞介素(interleukin-6,IL-6) mRNA表达的影响。方法:选取健康SD大鼠(1个月龄),取其脊柱椎间盘软骨终板细胞,并培养至第3代软骨终板细胞进行实验。空白对照组不做任何处理,诱导组只加入10μg·L~(-1)的IL~(-1)β,给药组在培养基中加入10μg·L~(-1)的IL~(-1)β和不同质量浓度的鹿茸多肽(分别为10 mg·L~(-1)、30 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1))。用MTT比色法检测3个时间点(24 h、48 h、72 h)各组椎间盘软骨终板细胞的增殖情况; qP CR法检测CollagenⅠ、CollagenⅡ及IL-6 mRNA的表达。结果:MTT法检测结果:鹿茸多肽10 mg·L~(-1)组的软骨终板细胞增殖与诱导组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);鹿茸多肽30 mg·L~(-1)组和鹿茸多肽50 mg·L~(-1)组能促进软骨终板细胞的增殖,与诱导组比较,差异有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。qP CR检测结果:IL~(-1)β诱导组的CollagenⅡmRNA的表达降低,CollagenⅠ、CollagenⅡ、IL-6的mRNA的表达升高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0. 05);不同质量浓度的鹿茸多肽均能增强CollagenⅡmRNA的表达,降低CollagenⅠ和IL-6 mRNA的表达,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01),30 mg·L~(-1)、50 mg·L~(-1)鹿茸多肽效果更加显著(P <0. 01)。结论:一定浓度的鹿茸多肽能减轻IL~(-1)β对软骨终板细胞增殖的抑制,升高CollagenⅡmRNA的表达,降低CollaoenⅠ、IL-6 mRNA的表达,从而延缓椎间盘的退变。     

益气活血方对凝血酶诱导内皮细胞促血栓因子表达的影响

目的:观察益气活血方对凝血酶诱导内皮细胞表达促血栓因子纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)及组织因子(tissue factor,TF)的影响。方法:体外培养内皮细胞,在含有凝血酶(4 U·m L~(-1))的培养基中加入梯度质量浓度的益气活血方(0~5.0 g·L~(-1)),作用12 h后MTT法检测细胞活力,确定益气活血方对内皮细胞无毒性的最大浓度;之后将细胞分为4组进行实验,分别为空白对照组、凝血酶组、益气活血方低剂量组(0.25 g·L~(-1))、益气活血方高剂量组(1.25 g·L~(-1)),加入益气活血方预处理2 h后加入凝血酶刺激10 h,Western blot检测PAI-1、TF的表达量。结果:由MTT检测结果得到益气活血方对内皮细胞无毒性的最大浓度为1.25 g·L~(-1),并将此浓度作为益气活血方高剂量组。Western blot结果显示益气活血方低剂量组(0.25 g·L~(-1))、高剂量组(1.25 g·L-1)均可抑制凝血酶诱导的PAI-1、TF表达(P<0.05或0.01),且呈一定的量效关系。结论:益气活血方可有效抑制凝血酶诱导内皮细胞促血栓因子PAI-1、TF的表达,对内皮细胞有潜在保护作用。     

禹州漏芦活性部位的研究及其对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:筛选禹州漏芦保护肝损伤的有效部位,并分析其对四氯化碳(CCl4)引起的小鼠急性肝损伤的保护机制。方法:将110只昆明种小鼠随机分为11组,包括正常组,模型组,阳性组,水高剂量、低剂量组,正丁醇高剂量、低剂量组,乙酸乙醇高剂量、低剂量组,石油醚高剂量、低剂量组。分别每天给予不同剂量的药物:阳性药组(25 mg·kg~(-1)),石油醚高剂量、低剂量组(138.65、69.33 mg·kg~(-1)),乙酸乙醇高剂量、低剂量组(40、20 mg·kg~(-1)),正丁醇高剂量、低剂量组(119.95、59.98 mg·kg~(-1))及机制。方法:将110只昆明种小鼠随机分为11组,包括正常组,模型组,阳性组,(175.79、87.40 mg·kg~(-1)),正常组和模型组给予等体积的羧甲基纤维素钠溶液。7 d后,除正常组外各组小鼠腹腔注射0.2%CCl4花生油溶液制备急性肝损伤模型,16 h后取血检测血清中谷草转氨酶(aspertate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)活性;测定肝匀浆中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性及观察肝脏病理学变化,观察各组肝损伤。结果:模型组肝脏系数为5.3±2.3,ALT为(111.61±22.21)U·L~(-1),AST为(244.08±55.09)U·L~(-1),MDA为(15.53±10.01)nmol·mg~(-1),SOD为(56.03±26.66)U·mg~(-1),GSH-Px为(102.23±53.71)μmol·mg~(-1)。正丁醇高剂量、低剂量组肝脏系数分别为4.6±2.8、4.7±3.3,ALT分别为(66.95±28.01)U·L~(-1)、(81.83±29.54)U·L~(-1),AST分别为(135.29±89.05)U·L~(-1)、(163.39±77.83)U·L~(-1),MDA分别为(7.90±1.90)nmol·mg~(-1)、(9.25±3.31)nmol·mg~(-1),SOD分别为(94.30±29.22)U·mg~(-1)、(88.03±27.84)U·mg~(-1),GSH-Px分别为(208.22±71.63)μmol·mg~(-1)、(176.89±72.48)μmol·mg~(-1)。水高剂量、低剂量组肝脏系数分别为(4.6±3.4)、(4.7±4.9),ALT分别为(74.50±29.28)U·L~(-1)、(83.17±30.60)U·L~(-1),AST分别为(150.23±81.31)U·L~(-1)、(175.34±80.87)U·L~(-1),MDA分别为(8.49±4.45)nmol·mg~(-1)、(9.00±4.93)nmol·mg~(-1),SOD分别为(80.86±23.96)U·mg~(-1)、(78.03±20.20)U·mg~(-1),GSH-Px分别为(205.07±62.91)μmol·mg~(-1)、(162.21±46.46)μmol·mg~(-1)。正丁醇高剂量、低剂量组,水高剂量、低剂量组以上指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。光镜下可见,正丁醇高剂量、低剂量组,水高剂量、低剂量组均可明显缓解小鼠急性肝损伤。结论:禹州漏芦保护肝脏的药效学活性部位为正丁醇部位和水部位,其保护肝脏的作用机制与其抗脂质过氧化有关。     

短程硝化系统的启动研究

为匹配厌氧氨氧化工艺,本试验探索了短程硝化反应器的启动情况。试验结果表明,在保证温度为(35±1)℃,溶解氧阶段性调整,p H值为7.5~8.5,NH+4-N浓度为30~40 mg·L~(-1)的条件下~([1]),经过50天的运行调试,间歇曝气与连续曝气两组装置启动成功:NH_4L~+-N去除率分别达到92.90%和94.24%;NO_2~--N的积累率分别达到95.42%与92.25%,出水浓度分别可以达到2.63 mg·L~(-1)和2.06mg·L~(-1),并且在恢复到室温条件下依然能稳定运行。结合NH+-4-N去除率和NO_2~--N的积累率来看,间歇曝气要优于连续曝气。     

反硝化厌氧甲烷氧化与厌氧氨氧化耦合颗粒污泥脱氮效能

采用改进的升流式厌氧污泥床(UASB)反应器,在温度为30℃条件下,逐渐缩短HRT(水力停留时间)由9.6 d到0.9 d,经过160 d运行,成功培养出反硝化厌氧甲烷氧化与厌氧氨氧化耦合颗粒污泥,采用荧光原位杂交(FISH)分析、16S rRNA分析等方法研究颗粒结构和微生物组成特征。结果表明:耦合颗粒污泥的氨氮和亚硝酸盐的脱除速率分别为588.9和523 mg·L~(-1)·d~(-1),反硝化厌氧甲烷氧化活性达95.2 mg·L~(-1)·d~(-1),出水硝酸盐质量浓度小于40 mg·L~(-1),总氮去除率达92.5%;耦合颗粒污泥平均粒径为0.76 mm,与接种厌氧氨氧化颗粒污泥相比增加了1.46倍;反硝化厌氧甲烷氧化微生物主要位于耦合颗粒污泥外层,厌氧氨氧化菌位于耦合颗粒污泥内部;主要的厌氧氨氧化菌为Candidatus Brocadia,主要的反硝化厌氧甲烷氧化细菌为Candidatus Methylomirabilis,反硝化厌氧甲烷氧化古菌为Candidatus Methanoperedens。