工业产生β-胡萝卜素杜氏藻的分离及种属鉴定

杜氏藻(Dunaliella)是生产天然β-胡萝卜素的良好资源,受到世界各国的广泛关注.为了研究和改造其类胡萝卜素代谢途径,利用离心和抗生素筛选相结合的方法对7株生产β-胡萝卜素用的工业藻种进行了分离和纯化.rDNA凝胶电泳图显示,分离的7株藻种中,6株能扩增出0.9 kb～1.7 kb不等的单一条带,表明已分离到单一藻种.在此基础上测定了各藻种转录间隔区1(ITSI)序列,并建立了系统进化树.结果显示,其中3株属于D.viridis类,另3株为D.salina.同时对杜氏藻的生长、工业藻种的分离、D.viridis对生产β-胡萝卜素工业藻的污染及D.salina与D.bardawil分类等问题进行了讨论.     

NaNO3对两种杜氏藻生长及色素积累的影响

研究NaNO3对两种杜氏藻Dunaliella salina和Dunaliella parva生长速度、色素积累的影响和NaNO3的吸收规律。结果表明,NaNO3浓度为1.5 mmol/L时,D.salina生长最快,最高密度76.4×104cell/mL;对照组为16.3×104cell/mL;低氮有利于D.salinaβ-胡萝卜素积累,β-胡萝卜素最大值105 mg/g出现在0.5 mmol/L NaNO3样中,对照组为45 mg/g;较高的NaNO3有利于叶绿素a的合成;藻液pH开始3 d~5 d急剧上升,后在波动中下降。对D.parva来说,NaNO3浓度为2.5 mmol/L时生长最快,细胞最高密度为295×104cell/mL,对照组为15×104cell/mL;在实验范围内,NaNO3浓度越高,β-胡萝卜素含量越高,β-胡萝卜素最大值为37.5 mg/g,叶绿素最大值为65 mg/g;建立了两种杜氏藻对NaNO3利用的动力学方程。     

Fe对两株盐生杜氏藻(Dunaliella salina)生长和β-胡萝卜素积累的影响

研究了柠檬酸铁对两株盐生杜氏藻Dunaliella salina OUN04和D.salina OUN09生长和色素积累的影响,结果表明,D.salina OUN04生长最适的Fe浓度为0.05mmol/L,细胞密度达111.5×104cell/mL,0.25mmol/LFe组最低(70×104cell/mL);最大β-胡萝卜素含量(83.2mg/g)出现在0.25mmol/LFe浓度组中;Fe浓度为0.25mmol/L时有最大的叶绿素a含量(98.4mg/g);建立了杜氏藻对Fe吸收的动力学方程。D.salina OUN09生长最适的Fe浓度为0.05mmol/L(密度131×104cell/mL),最大β-胡萝卜素含量为130.2mg/g(0.05mmol/LFe组),对照组仅为70.4mg/g。     

培养条件对杜氏藻β-胡萝卜素含量的影响

为了优化杜氏藻的培养条件,对采自山西运城盐湖的杜氏藻(Dunaliella sp.)采用单因素和正交实验方法,研究了温度、盐度和氮、磷、铁元素对其细胞增殖和β-胡萝卜素积累的影响。结果显示杜氏藻的β-胡萝卜素含量与吸光度OD453nm之间存在良好的线性关系,利用吸光值表征杜氏藻β-胡萝卜素含量步骤简单,数据准确,适于高效快速对样品进行测定。杜氏藻在20~25℃,1.0~2.0mol/L Na Cl时,较有利于β-胡萝卜素积累。杜氏藻生长至对数期后,高浓度的氮源、磷源都不利于β-胡萝卜素的积累,而铁源在实验期间,对杜氏藻β-胡萝卜素的积累无影响。进一步优化,培养基中有利于β-胡萝卜素积累的Na NO3、KH2PO4和Fe C6H5O7的浓度最优组合为0.6200、0.0256、0.0010g/L。本实验得到了较适合杜氏藻积累β-胡萝卜素的培养基,为今后当地开发利用高产β-胡萝卜素藻株奠定了理论基础。     

3种营养物质对极端嗜盐绿色杜氏藻生长的影响

绿色杜氏藻（D．viridis）是一种单细胞的海洋微藻，由于其富含多种营养物质，具有极端嗜盐性及对环境极强的适应性而引起国内外研究的兴趣。讨论3种营养物质葡萄糖、蛋白胨、卤虫干粉发酵液对绿色杜氏藻生物量的影响，结果表明最适宜杜氏藻生长的3种营养物质的浓度范围是：葡萄糖为70～90g／L，干粉发酵液为0．1—0．8g／L，蛋白胨为4～8g／L。     

盐藻的紫外诱变及优势藻株的初步筛选

通过紫外诱变技术筛选具有优良性状的盐生杜氏藻（Dunaliella salina）株系,以期通过紫外诱变提高盐藻的生长速率、β-胡萝卜素含量、蛋白质和胞外多糖含量。紫外诱变后,筛选出4株与出发株相比具有生长优势的藻株,在培养一周后,4个株系的最终细胞密度分别达到1.32×10^6cell/ml、1.49×10^6cell/ml、1.63×10^6cell/ml、1.54×10^6cell/ml,比出发株的最终细胞密度1.12×10^6cell/ml分别提高了17.86%、33.04%、45.54%、37.50%。测定了这4个株系的β-胡萝卜素、蛋白质和胞外多糖含量,结果显示,有2株藻种的β-胡萝卜素含量有显著提高,β-萝卜素含量为9.81mg/L、10.21mg/L,与出发株（7.86mg/L）相比分别提高了24.8%和29.90%;胞外多糖含量有所增加,有3株藻种胞外多糖含量分别由出发株的43mg/L增加到51mg/L、45mg/L、47mg/L,增幅分别为18.60%、4.65%、9.30%;而盐藻的蛋白质含量经紫外线照射后,与出发株相比呈下降趋势。     

碳源对盐生杜氏藻(Dunaliella salina)生长及其β-胡萝卜素积累的影响

研究了NaHCO(30,3,6,9,12,15mmol/L)对盐生杜氏藻生长和β-胡萝卜素积累的影响,结果表明,12mmol/L的NaHCO3对杜氏藻(D.salina),生长最合适,细胞最高密度为84.6×104cell/mL,对照组仅为36.7×104cell/mL;在实验范围内,β-胡萝卜素含量随NaHCO3浓度的升高而增加,15mmol/L组有最高的β-胡萝卜素含量104.6mg/g,对照组仅为60.8mg/g;叶绿素a最大含量135mg/g也出现在15mmol/L组,对照组为97mg/g;接种6d内藻液pH值急剧上升,后几天在波动中下降;接种前五天NaHCO3消耗很快,5d～10d消耗较慢,建立了NaHCO3吸收的动力学方程;较高的NaHCO3有利于细胞蛋白质的合成。     

农业杀虫剂敌百虫对杜氏盐藻的毒性作用

本文以一种具有环境耐性的单细胞绿藻杜氏盐藻(Dunaliella salina)作为受试生物,检测杀虫剂敌百虫的毒性作用.实验中检测了敌百虫对盐藻细胞生长、β胡萝卜素水平及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性的影响.当敌百虫浓度小于0.050 g...     

杜氏盐藻β-胡萝卜素提取皂化工艺参数优化

以甲醇-丙酮(20∶80,V/V)为流动相,建立杜氏盐藻β-胡萝卜素HPLC-DAD检测方法。采用外标法定量,对杜氏盐藻β-胡萝卜素的提取皂化工艺参数进行优化。研究结果表明,所选6种溶剂中,95%乙醇的提取效果最好。对选取的杜氏盐藻粉皂化,使胡萝卜素的得率从0.350%提高到0.425%,提高了21.43%。优化提取的最佳工艺参数是:提取温度25℃、时间0.7 h、液固比200 m L/g。此条件下杜氏盐藻β-胡萝卜素得率为0.395%。皂化的最佳工艺参数是:皂化温度25℃、皂化时间2 h、KOH甲醇溶液质量浓度0.1 g/m L。采用此提取皂化工艺,杜氏盐藻β-胡萝卜素的最终得率为0.428%。     

极端嗜盐绿色杜氏藻培养技术的研究

极端嗜盐环境下生长的绿色杜氏藻(D．viridis)具有较为独特的生物特性，具有一定的应用价值和开发前景。文章着重研究了极端嗜盐绿色杜氏藻生长所需条件，内容包括培养液碳源、盐度、营养盐、pH值。并探讨了极端嗜盐绿色杜氏藻的人工培养技术。     

培养基初始pH值和照射光波长对杜氏藻中类胡萝卜素含量的影响

研究杜氏藻在实验室培养过程中初始pH值和照射光波长对其体内类胡萝卜素（β-胡萝卜素和叶黄素）积累的影响。在实验中,配制不同初始pH值的培养基,用其培养105 d,测定培养液中藻细胞数和β-胡萝卜素及叶黄素的含量。用pH 7的培养基,在白光（全波）、红光（630 nm）和蓝光（430 nm）照射下培养藻40 d,测定培养液中藻细胞数和β-胡萝卜素、叶黄素的含量。结果表明：1）杜氏藻本身具有调节环境pH值向中性发生变化的能力。培养105 d后,不同初始pH值范围的培养液（pH 10～13、pH 1～3和pH 4～9）中藻养殖密度依次增加。初始pH 4时,培养液中藻细胞数量可达1 851 个/mL,达到最大值;初始pH值范围为7～9时,培养液中β-胡萝卜素（0.489～0.561 mg/mL）和叶黄素（0.610～0.700 mg/mL）积累量较高;初始pH值范围为11～13时,单个细胞内β-胡萝卜素（0.603～0.730 ng）和叶黄素（0.897～0.979 ng）积累量较高。2）杜氏藻养殖密度在全波光、红光（630 nm）和蓝光（430 nm）条件下均可增加。红光和蓝光均可诱导单个细胞中β-胡萝卜素和叶黄素积累量增加,蓝光效果最佳,单个细胞中叶黄素含量达到0.524 ng,β-胡萝卜素含量达到0.589 ng。     

杜氏盐藻β-胡萝卜素超高压提取工艺优化

对杜氏盐藻β-胡萝卜素超高压辅助提取工艺参数进行优化研究,结果表明,6种溶剂中,无水乙醇的提取效果最好。在超高压辅助提取条件下,各溶剂的β-胡萝卜素得率排序为无水乙醇石油醚95%乙醇三氯甲烷乙腈乙酸乙酯;建立了超高压辅助提取杜氏盐藻β-胡萝卜素的数学模型,确定最佳工艺参数:液固比483m L/g,超高压压力346 MPa,保压时间13.7 min,结果β-胡萝卜素得率的预测值为1.07%。在优化条件下,β-胡萝卜素得率测定值为1.02%,说明提取模型的适应性良好。与常规的回流提取方法相比,超高压技术显著提高了杜氏盐藻β-胡萝卜素提取效率。     

盐藻养殖生产β—胡萝卜素新方式

本文介绍了盐藻养殖生产β－胡萝卜素的一种新方式－－两阶段养殖盐藻生产β－胡萝卜素，并比较了此种方式与单阶段养殖方试的优缺点，使用此种方式可提高β－胡萝卜素产量５０％     

营养元素对盐藻养殖及β-胡萝卜素产率的影响

盐生杜氏藻（Dunaliella Salina，简称盐藻）的养殖在世界范围内比较热，是因为它可以产生具有抗氧化作用的物质——β-胡萝卜素。盐藻体内β-胡萝卜素的积累受许多因素的影响，其中微量元素是一种重要因素。通过实验总结出了对盐藻生物量（9.1mg/L、100mg/L、82mg/L、28.8μg/L、1.12mg/L）和β-胡萝卜素产量（3.6mg/L、40mg/L、132mg/L、12μg/L、0.21mg/L）来说P、Mg、N、Zn、Fe等元素最佳添加量。     

极端嗜盐绿色杜氏藻培养技术的研究

极端嗜盐环境下生长的绿色杜氏藻(D.viridis)具有较为独特的生物特性,具有一定的应用价值和开发前景。文章着重研究了极端嗜盐绿色杜氏藻生长所需条件,内容包括培养液碳源、盐度、营养盐、pH值。并探讨了极端嗜盐绿色杜氏藻的人工培养技术。     

我国六个品系高盐微藻营养组成的研究

本文对六个品系的高盐微藻（五个克隆的杜氏藻，一个克隆的颤藻）的主要营养成分及氨基酸进行分析。五个品系杜氏藻的蛋白质含量从391％～48．9％。从新疆盐湖中分离的颤藻的蛋白质含量高达51．3％。我们还对蛋白质的营养价值，用必需氨基酸指数（EAAI）进行了评价，必需氨基酸指数从79．1到85.1，这表明高盐微藻的蛋白质有很好的营养价值。     

盐藻β—胡萝卜素生物技术的概况及展望

本文比较了几种盐藻β－胡萝卜素的生产工艺及生产管理状况，担子同适合我国发展胡萝卜素产业的建议，介绍了盐藻β－胡萝卜的市场及应用情况。     

盐藻中β—胡萝卜素的分离与测定——纸层析法

盐藻中含有多种营养物质，其中蛋白质、甘油、叶绿素及β－胡萝卜素具有开发价值，利用β－胡萝卜素极性最小，易溶于石油醚的特点，用丙酮－石油醚提取盐藻中的β－胡萝卜素，纸层析分离，分光光度法于４５０ｎｍ波长处测定，可定量测定出盐藻中的β－胡萝卜素含量。本文利用此法对多个盐藻样品进行了测定，精密度Ｓ＝０．００４２。回收率在８４．１％－１１２．０％之间。     

盐藻中β－胡萝卜素的分离与测定──纸层析法

盐藻中含有多种营养物质，其中蛋白质、甘油、叶绿素及β－胡萝卜素具有开发价值．利用β－胡萝卜素极性最小，易溶于石油醚的特点，用丙酮－石油醚提取盐藻中的β－胡罗卜素，纸层析分离，分光光度法于４５０ｎｍ波长处测定，可定量测定出盐藻中的β－胡萝卜素含量。本文利用此法对多个盐藻样品进行了测定，精密度Ｓ＝０．００４２。回收率在８４．１％－１１２．０％之间。     

我国六个品系高直微藻营养组成的研究

本文对六个品系的高盐微藻（五个克隆的杜氏藻，一个克隆的颤藻）的主要营养成分及氨基酸进行分析。五个品系杜氏藻的蛋白质含量从３９．１％－４８．９％。从新疆盐湖中分离的颤灌的蛋白质含量高达５１．３％。我们还对蛋白质的营养价值，用必需所基酸指数（ＥＡＡＩ）进行了评价，必需氨基酸指数从７９．１到８５．１，这表明高盐微藻的蛋白质有很好的营养价值。