一种百岁老人源罗伊氏乳杆菌益生特性及其发酵水牛乳制备工艺优化

为探索新筛选的一株百岁老人源罗伊氏乳杆菌LT018开发利用价值,本研究首先检测了该菌株在连续培养300代过程中的活菌数、菌活力,判断其遗传稳定性,又对该菌株在模拟胃肠液中存活率及凝集率进行测定,判断该菌株的益生特性。进一步以此菌株与传统保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌发酵剂相结合制备发酵水牛乳,在单因素实验的基础上,通过响应面实验探索其最佳工艺。结果显示,在连续培养300代的过程中,罗伊氏乳杆菌LT018的活菌数和菌活力均保持在一个较高的水平;菌株在模拟胃液和肠液中的存活率分别高于99.07%和77.83%;同时保持大于55.4%的凝集率。发酵水牛乳最佳制备工艺为:罗伊氏乳杆菌发酵剂:传统发酵剂为2:1、白砂糖添加量为3.00%、发酵温度为40.00℃,此时发酵乳的感官评分最高(86.63±1.47),罗伊氏乳杆菌活菌数也达到了1.033×108 CFU/mL。本研究为该菌株的开发利用提供了重要的理论和技术参考。     

产Reuterin罗伊氏乳杆菌的定向筛选及其生物学特性

依据菌株宿主适应性特点，从健康家禽新鲜粪便中定向筛选具有开发潜力的罗伊氏乳杆菌。经16S rDNA序列分析和pduC基因筛查，获得3 株产抗菌物质Reuterin的罗伊氏乳杆菌，对其耐受模拟胃肠道环境、抗生素敏感性、甘油发酵上清液抑菌活性及肠上皮细胞黏附能力等生物学特性进行系统评价。结果表明，罗伊氏乳杆菌WLRE01、WLRE03、WLRE04均具有较强耐受极端酸（pH 2.5和pH 3.5）、胆盐（1.5 g/L）及模拟胃肠液的能力；经1 mmol/L过氧化氢处理6 h，WLRE03、WLRE04的活菌数能基本维持初始浓度；甘油发酵上清液对金黄色葡萄球菌具有极强的抑制作用，抑菌圈最高达（28.1±1.2）mm；3 株菌对HT-29细胞均具有良好的黏附特性，其中WLRE01黏附能力最强。综上所述，健康家禽肠道源的3 株产Reuterin的罗伊氏乳杆菌可作为益生菌候选菌株进行深入研究。     

发酵豆腐黄水的抑菌效果研究

选取豆腐黄水作为发酵底物,添加10%葡萄糖作为外加碳源,开展基于发酵豆腐黄水抑菌作用的研究及其在豆腐和冷鲜肉保鲜中的应用。试验选取谢氏丙酸杆菌(Propionibacterium shermanii)、费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)和罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri),通过发酵豆腐黄水得到发酵产物,并研究发酵产物上层清液对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)三种指示菌的抑制作用。抑菌试验结果表明,对于大肠埃希氏菌的抑菌能力:罗伊氏乳杆菌强于费氏丙酸杆菌谢氏亚种,强于费氏丙酸杆菌;对于金黄色葡萄球菌的抑菌能力:罗伊氏乳杆菌强于费氏丙酸杆菌,强于费氏丙酸杆菌谢氏亚种;对于枯草芽孢杆菌的抑菌能力:罗伊氏乳杆菌强于费氏丙酸杆菌谢氏亚种,强于费氏丙酸杆菌。豆腐和冷鲜肉的保鲜试验表明,选取罗伊氏乳杆菌发酵上层清液作为抑菌物质喷洒至豆腐和冷鲜肉表面后,可将豆腐的保质期延长1~2 d,将冷鲜肉的保质期延长2 d以上,且几乎不影响其本身的理化性质与感官风味。     

与特定乳酸菌共培养对植物乳杆菌KLDS1.0391细菌素合成的诱导作用

植物乳杆菌KLDS1.0391与76株乳酸菌分别共培养后,测定培养物的抑菌活性和活菌数,判断与乳酸菌共培养对植物乳杆菌细菌素合成的影响及细菌素合成与菌体密度的关系。结果表明：植物乳杆菌KLDS1.0706、KLDS4.0315、KLDS4.0351、罗伊氏乳杆菌KLDS1.0736这4株菌与植物乳杆菌KLDS1.0391共培养后,抑菌活性显著增加(P＜0.01)。与罗伊氏乳杆菌共培养过程中细菌素的抑菌活性与植物乳杆菌KLDS1.0391的细胞密度呈现明显的正相关性,并且发现只有活的诱导菌与植物乳杆菌KLDS1.0391共培养才能够诱导细菌素的合成。     

抗幽门螺旋杆菌乳酸菌的筛选与益生特性评价

目的:从发酵食品、乳制品和婴儿粪便中筛选具有拮抗幽门螺旋杆菌活性且益生特性良好的乳酸菌。方法:从175份样品中筛选获得39株具有良好遗传稳定性的疑似乳酸菌株,采用体外抑菌圈法和尿素酶活性试验筛选出能抑制幽门螺旋杆菌生长的9株菌,并对其中活性最强的菌株GQ1702和D1进行16S rDNA鉴定。然后,进一步评价其耐酸、耐胆盐、抗生素耐药性、抑菌性能、表面疏水性及自凝集性等益生特性。结果:筛选得到两株拮抗幽门螺旋杆菌的乳酸菌:瑞士乳杆菌GQ1702（Lactobacillus helveticus GQ1702）和植物乳杆菌D1（Lactobacillus plantarum D1）,其发酵产物的抗幽门螺旋杆菌活性分别相当于浓度为0.038 mg/mL和0.034 mg/mL甲硝唑的抑制率。在pH为3的环境中培养3 h后的存活率均大于70%,在含0.3%胆盐环境中培养3 h后存活率分别为0.47%和1.08%,疏水作用力分别为25.10%和11.79%,自凝集率在24 h后分别达到75.53%和68.61%,与幽门螺旋杆菌的交互凝集率在24 h分别达到61.18%和57.25%。对常见抗生素（氯霉素、青霉素、红霉素、氨苄青霉素和头孢唑林）不耐药,对4种肠道致病菌（金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门氏菌）均具有抑制作用。结论:本试验筛选到具有拮抗幽门螺旋杆菌能力的植物乳杆菌D1和瑞士乳杆菌GQ1702,可为功能性乳制品的开发及研究提供菌株。     

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及体外特性评价

从117株泡菜和婴儿粪便源中筛选高产共轭亚油酸(CLA)的乳酸菌,对其进行功能性和安全性评价。采用紫外分光光度法初筛得到27株CLA转化率大于8%的菌株,通过GC-Q-TOFMS验证其CLA异构体组成,最终获得8株CLA转化率在10%以上,同时发酵液中c9,t11-CLA、t10,c12-CLA异构体质量浓度高于20 μg/mL乳酸菌。对这8株菌进行自凝集、疏水性、黏附性能、胃肠道耐受能力、抑菌活性、安全性等体外特性评价。结果表明,植物乳杆菌NCU001044、NCU006007整体表现优异,自凝集率皆大于60%,具有中度疏水能力,且黏附率分别为8.81%,9.10%。两株菌在pH 2.5酸性条件下存活率分别为95.68%,84.63%,在质量分数为0.3%的胆盐中存活率均高于65%。安全性方面,两株菌对青霉素、苄卡西林、四环素、红霉素中性敏感或敏感,无溶血活性。本研究筛选到具有高效生物转化有益CLA异构体能力的植物乳杆菌2株,这2株菌具有良好的胃肠道定植能力,以及酸、胆盐耐受力,对致病菌表现出较高的抑制作用,可进一步投入发酵产品及功能性微生态制剂的开发。     

健康婴儿粪便样本中加氏乳杆菌的分离鉴定及安全性评价

目的:本研究从125例健康婴儿粪便样本中分离鉴定出加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)并对其安全性和抑菌性能进行评价。方法:本研究以1月龄健康婴儿粪便样本为对象,经过MRS培养基分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定和16S rRNA测序技术进行菌种鉴定;随后,对分离得到的加氏乳杆菌利用血琼脂平板进行溶血性评价;利用微量肉汤稀释法对常见抗生素的药物敏性进行测定,并对加氏乳杆菌的安全性进行评价;最后,采用牛津杯法检测对大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923的抑制作用。结果:从125例健康婴儿粪便样本中成功分离并鉴定出15株加氏乳杆菌。溶血性检测结果显示,14株均无溶血性;待测菌株对四环素、万古霉素、利奈唑胺、利福平敏感性较高,对亚胺培南完全敏感,对甲氧苄啶完全耐药;抑菌实验结果显示,有6株菌同时对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌效果。结论:本研究从健康婴儿粪便样本中成功分离筛选出3株安全性较高且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌同时具有一定抑制作用的加氏乳杆菌,编号分别为:LGI 6-1、LGI 6-2、LGI 6-3,作为潜在的益生菌资源,为后续深入探究加...     

产抗菌肽乳源乳酸菌的筛选及定向培养

为了获得乳酸菌高效表达抗菌肽的代谢调控方法,对德氏乳杆菌保加利亚亚种等7种乳酸菌进行了产抗菌肽能力的筛选和定向培养。筛选出具有较高抑菌活性的菌株嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌,它们产生的抑菌物质经排除酸、过氧化氢后,仍具有抑菌活性,然而经蛋白酶处理后其抑菌活性明显下降。结果表明,两种菌发酵上清液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑制作用。经一系列定向培养嗜酸乳杆菌抑菌直径达到(23.53±0.06)mm,与未经定向培养的抑菌直径(11.63±0.15)mm相比抑菌活性提高了102%;经定向培养的干酪乳杆菌抑菌直径达到(21.27±0.25)mm,与未经定向培养的抑菌直径(12.50±0.10)mm相比抑菌活性提高了70.2%。     

地衣腌菜中产广谱细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

采用滤纸片双层平板法从自制酸奶、市售散装腌菜和袋装榨菜中分离出乳酸菌,再对分离的乳酸菌进行抑菌试验、酸和过氧化氢抑制作用的排除、蛋白酶的敏感检测和抑菌谱测定,最后对所得菌株形态和生理生化特性进行鉴定。结果:从样品中筛选到5株具有较高抑菌活性的乳酸菌菌株,在排除了酸和过氧化氢干扰后,发酵上清液仍有很强的抑菌作用;经蛋白酶处理后,发酵液的抑菌活性显著下降,说明该抑菌物具有蛋白质性质,是一类细菌素。这5株菌对绿脓假单胞杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌均有很强的抑菌活性,并选出抑菌活性最强的菌株E2-2,初步鉴定其为戊糖乳杆菌。     

婴儿肠道源格氏乳杆菌的安全性评价及益生特性

以广州1?月龄婴儿肠道中分离出的乳酸杆菌为实验菌株，经分子生物学鉴定，确认为格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）LGZ 1029。对格氏乳杆菌LGZ 1029进行体内外安全性评价和益生特性研究，结果表明：格氏乳杆菌LGZ?1029不产溶血毒素，对多类抗生素表现出敏感性，小鼠经口急性无毒；该菌具有较好的胃肠液耐受力及自凝聚能力，疏水性（79.75%）强于商业标准菌株鼠李糖乳杆菌ATCC?7469（43.01%）；菌株对大肠杆菌ATCC?25922抑菌圈直径为17.31～20.70?mm，对金黄色葡萄球菌ATCC?12598的抑菌圈直径为21.71～31.08?mm，抑菌效果强于鼠李糖乳杆菌ATCC?7469；活菌数为1×107?CFU/mL发酵液的1,1-苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率可达87.07%。本实验为格氏乳杆菌LGZ?1029在膳食补充剂、乳品制造和防腐剂替代品领域的应用提供理论依据。     

1株抑制乳房炎病原菌乳杆菌的筛选、鉴定及其抑菌机理研究

为了研究乳酸菌对牛乳房炎病原菌的抑制作用,降低牛乳房炎所造成的经济损失。本实验以大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、无乳链球菌ATCC14556作为指示菌,综合抑菌试验和黏附试验从8株乳杆菌中筛选抑菌效果较好的菌株。结果表明,乳杆菌KLDS1.0344对指示菌的抑制作用比其他乳杆菌的作用更明显,最大抑菌直径为15.4 mm,经过对16S rDNA鉴定,发现KLDS1.0344为植物乳杆菌,同时,对抑菌机理的初步研究表明,其代谢过程中产生的乳酸和细菌素类物质对抑制三种指示菌发挥主要作用,而且这些抑菌活性物质在酸性条件下才具有更强的抑菌活力。     

低盐发酵香肠用优良菌株的分离筛选及鉴定

从10 种我国自然发酵制品中分离纯化得到52 株乳酸菌及56 株过氧化氢酶阳性球菌,首先通过菌株耐受性、发酵特性等指标对菌株进行初步筛选,然后利用抑菌特性和风味特性对菌株进行复筛,选择可能改善低盐发酵香肠安全性和风味的优良菌株,最终筛选得到3 株葡萄球菌Z9、L2和R2,以及4 株乳酸菌P6、P12、X和SN1-3。经由形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析对筛选得到的菌株进行鉴定,结果表明,葡萄球菌菌株Z9、L2为腐生葡萄球菌,R2为肉葡萄球菌;乳酸菌菌株P6、P12均为植物乳杆菌,X为干酪乳杆菌,SN1-3为戊糖片球菌。最后测定菌株的生长特性及产酸能力,研究菌株间的拮抗特性,最终筛选得到戊糖片球菌SN1-3与肉葡萄球菌R2作为制作发酵香肠的复配菌株。     

火炭母提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及稳定性研究

目的：研究火炭母提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及稳定性。方法：用牛津杯法和微量肉汤稀释法来测定火炭母提取物的体外抑菌活性,并以金黄色葡萄球菌的OD_{600 nm}值为指标,进一步探讨温度、pH、紫外线及Na⁺、K⁺、Ca²⁺等金属离子对其抑菌稳定性的影响。结果：火炭母提取物对金黄色葡萄球菌具有一定抑菌活性,最小抑菌浓度为8 mg/mL;火炭母提取物在热处理、不同pH、紫外线照射等情况下抑菌活性较为稳定;当添加不同金属离子时其抑菌活性具有明显差异,0.1 mol/L Na⁺、K⁺处理时其抑菌活性有所下降,而在0.1 mol/L Ca²⁺处理时其抑菌活性丧失。结论：火炭母提取物对金黄色葡萄球菌具有稳定的体外抑菌活性。     

酱油渣中具有抑菌活性的乳酸菌的筛选及其抑菌特性

本研究以实验室前期从酱油渣中分离的16株乳酸菌ZW1~ZW16为出发菌株,拟筛选对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果较强的菌株,并对菌株产生的抑菌物质、生长特性及其影响因素进行分析。结果显示,乳酸菌ZW2、ZW9、ZW14对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较高的抑菌活性,其中ZW9抑菌效果最好,排除有机酸和H₂O₂影响后,胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、α-蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶处理后抑菌活性均显著性降低（P<0.05）,初步推断抑菌物质是一种具有蛋白质属性的细菌素。抑菌动力学曲线显示,菌株培养至20 h抑菌活性趋于稳定。抑菌稳定性显示,抑菌物质在40~100 ℃具有较好的热稳定性,在紫外线照射、表面活性剂处理下均保持较高的抑菌活性;在pH2.0~6.0抑菌活性无明显变化,pH10.0抑菌能力完全丧失。酱油渣中筛选的3株乳酸菌具有抑菌功能且产生的抑菌物质稳定,对开发成新型生物抑菌剂具有重要参考价值。     

Specific Bifidobacterium strains isolated from elderly subjects inhibit growth of Staphylococcus aureus

Cell-free, pH-controlled supernatants of thirty-eight Bifidobacterium strains isolated from healthy elderly subjects were subjected to antimicrobial activity assay. Bioluminescent indicator strains Staphylococcus aureus RN4220, Escherichia coli K-12, and Salmonella enterica serovar Typhimurium ATCC 14028 were used as targets of antimicrobial activity. The effect of nutrient depletion on the inhibition was eliminated with spent-culture controls. Three out of thirty-eight Bifidobacterium strains were capable of inhibiting the growth of S. aureus. The inhibition was equal to 23.2+/-19.1% to 50.4+/-26.7% of the inhibition caused by 50 IU/ml nisin. Reuterin-producing positive strain Lactobacillus reuteri SD2112 was capable of 86.0+/-24.6% inhibition, but Bifidobacterium lactis Bb-12, a known probiotic strain, showed no inhibition. None of the strains was capable of inhibiting the growth of E. coli or S. enterica. The observed inhibition by bifidobacteria was related to hydrogen peroxide formation and possible production of heat-stable proteinaceous compounds. The results suggest that production of antimicrobial substances other than organic acids is not common among Bifidobacterium strains typical of elderly subjects. However, specific strains were identified which showed considerable inhibitory activity against S. aureus.     

湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及其稳定性

目的:研究湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的体外抑菌活性及其稳定性.方法:采用牛津杯法和微量肉汤稀释法测定湄潭白茶多糖对金黄色葡萄球菌的抑菌活性及最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),并进一步探讨温度、pH、紫外线照射和金属离子对其抑菌活性稳定性的影响.结果:湄潭白茶多糖...     

驼乳制品中抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性乳酸菌的筛选及益生特性研究

目的:本研究以新疆阿勒泰地区的驼乳制品为研究对象,筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的优良乳酸菌。方法:采用稀释涂布法分离纯化菌株,DNS和pNPG法筛选对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性的菌株,通过耐酸性、耐胆盐、模拟胃肠道环境耐受性、抑菌性、抗氧化活性实验评价菌株的益生特性。结果:从驼乳制品中共计获得34株菌株,其中6株对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有抑制活性,经过形态学和16S rRNA分子鉴定,确定有4株为植物乳杆菌Lactiplantibacillus plantarum,2株为副干酪乳杆菌Lactiplantibacillus paracasei。6株乳酸菌对α-淀粉酶的抑制活性都达到50%以上,其中X34对α-淀粉酶的抑制率最高达到88.59%。本实验中筛选的乳酸菌对α-葡萄糖苷酶的抑制率在11%~16%之间,X31抑制率最高为15.43%。6株乳酸菌在不同pH（1.0、2.0、3.0）和不同浓度胆盐（1、2、3 g/L）的培养基中均可存活。6株乳酸菌在模拟胃液和肠液中的存活率分别达到83%和90%以上。对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率超过90%以上,其中X29对羟自由基的清除率最高为92.43%,对超氧阴离子自由基清除率最强的是X33清除率达到94.04%。6株乳酸菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,其中X31对大肠杆菌的最大抑菌圈直径为19.63 mm,X23对沙门氏菌抑菌圈最大达到19.85 mm,菌株X33对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径最大为19.17 mm。结论:从驼乳制品中筛选到6株具有潜在降糖活性的乳酸菌,对强酸、胆盐和胃肠液有一定的耐受性,抗氧化能力较强,具有抑制致病菌的效果,为后期研发功能性降糖饮品提供益生菌株。