Abbau von Diolen und Bildung von Ethylenglykol durch verschiedene Hefen

Zusammenfassung Die mikrobielle Bildung von Ethylenglykol sowie der Abbau von Diolen durch Hefestamme verschiedener Gattungen wurde im synthetischen Medium und in Traubensaft untersucht. Diole (aber nicht Diethylenglykol) wurden von Arlen wieHansenula, Candida, Pichia undRhodotorula abgebaut. Von 40 überprüften Hefen produzierten einzelne Stämme vonZygosaccharomyces bailii, Torulopsis ernobii undKluyveromyces veronae unter aeroben Bedingungen 70 bis 210 mg/l Ethylenglykol bei Zusatz von 400 mg/l Ethanolamin zum synthetischen Medium. Ohne Ethanolamin erzeugtenZ. bailii undT. ernobii im synthetischen Medium oder Traubensaft zwischen 7 bis 30 mg/l Ethylenglykol. Die Bildung von Ethylenglykol war bei aeroben Kulturen vom Gehalt an Ethanolamin abhängig, während die geringe Bildung von Ethylenglykol anaerober Kulturen davon nicht beeinflußt wurde.Z. bailii Stamm 429, eine Art, die auch in Wein vorkommt, bildete besonders viel Ethylenglykol. Dabei entsprachen die gefundenen Mengen etwa der Hälfte des Verbrauches von Ethanolamin. — Da Hydroxylamin, ein Inhibitor der Aminoxidase, die Bildung von Ethylenglykol in Medien mit Ethanolamin hemmte, wird angenommen, daß der Biosyntheseweg über Glykolaldehyd verläuft. — Stämme vonSaccharomyces cerevisiae produzierten unter den gleichen Bedingungen sowohl aerob wie anaerob nur geringe Mengen von Ethylenglykol.

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Degradation of diols and formation of ethylene glycol by different yeast species

Summary The degradation of diols and the formation of ethylene glycol by yeasts of different genera were investigated. Diols, with the exception of diethylene glycol, were metabolized under aerobic conditions by species of the generaHansenula, Candida, Pichia andRhodotorula. Certain yeasts formed ethylene glycol in a synthetic medium or in grape must and this formation was greatly increased by ethanolamine. If 400 mg/l ethanolamine was added to the synthetic medium, three strains of the speciesZygosaccharomyces bailii, Torulopsis ernobii, andKluyveromyces veronae produced 70–210 mg ethylene glycol/l. Anaerobically, only 7–30 mg ethylene glycol/l was formed in the synthetic medium or in grape must. The aerobic formation of ethylene glycol increased with the amount of ethanolamine present in the medium, whereas the reduced formation of ethylene glycol from anaerobic cultures was not affected by ethanolamine. The strainZ. bailii 429 (a yeast species that is also found in wine) formed the largest amount of ethylene glycol, which amounted to more than half of the ethanolamine consumed. Hydroxylamine, an inhibitor of aminoxidase, prevented the formation of ethylene glycol from ethanolamine. Therefore, it is assumed that yeasts produce ethylene glycol from ethanolamine via glycolaldehyde. Under aerobic as well as under anaerobic conditions strains ofSaccharomyces cerevisiae formed only small amounts of ethylene glycol.

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Herrn Prof. Dr. F. Kiermeier zum 80. Geburtstag gewidmet     

Einflu? des L?sungsmittels auf die Fluoreseenz von Aflatoxin B1

Zusammenfassung Die Fluoreseenz-Intensität des Aflatoxins B₁ ist von der Art des Lösungsmittels außerordentlich abhängig. Mit den Alkoholen ergaben sich die höchsten Fluorescenz-Intensitäten (Propanole > Äthanol > Methanol), mit Chloroform und Acetonitril die niedrigsten Werte. Während sich hierbei die Fluorescenz-Anregungsmaxima nur unwesentlich ändern, sind die Verschiebungen der Emissionsmaxima deutlich zu erkennen.

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Influence of the solvent on the fluorescence of aflatoxin B₁

Summary The fluorescence-intensity of aflatoxin B₁ strongly depends on the kind of the solvent. With alcohols, the highest fluorescence intensities were obtained (propanols > ethanol > methanol), with chloroform and aceto-nitrile the lowest ones. Whereas the fluorescence-excitemaxima thereby were changed only insignificantly, the changes of emission maxima were clearly detectable.

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Vorveröffentlichungen aus der Dissertation von Sylvia Kroczek: Über den Einfluß des Schmelzprozesses auf aflatoxinhaltigen Käse bei der Verarbeitung zu Schmelzkäse. Technische Universität München.

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21. Mitt.: Zur Aflatoxinbildung in Milch und Milchprodukten.     

低温等离子体对黄曲霉毒素B1的降解效能

目的:确定低温等离子体降解黄曲霉毒素B₁（Aflatoxin B₁,AFB₁）最佳工艺条件,并探究其在农产品中应用的可行性。方法:选取低温等离子体不同激发条件（峰值电压、工作频率、作用时间）,研究其对溶液中AFB₁的降解效果。通过Center Composite Design（CCD）法进行响应面试验,获取最优降解组合及各因素交互作用机制,并考察此条件下玉米中AFB₁降解效果。结果:当AFB₁浓度为1000 μg/L时,其降解率随峰值电压及作用时间（除90~120 s）的增加,工作频率的下降而极显著升高（P<0.01）。响应面优化后最佳工艺条件为峰值电压160 kV、工作频率50 Hz、作用时间165 s,此时AFB₁降解率为99.62%。此外,将优化后的降解条件在受AFB₁污染的玉米（23.18±0.06 μg/kg）中进行应用,发现180 s处理时间下,其降解率可达39.29%。结论:通过CCD法确定了低温等离子体技术降解AFB₁最优工艺,证实了其在玉米中的降解效果。表明低温等离子体技术在降低谷物黄曲霉毒素污染方面具有巨大潜力。     

微生物代谢黄曲霉毒素B1的研究进展

黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉等真菌产生的次级代谢产物,主要存在于谷类、花生、玉米等农作物中。在我国尤其是南方省份,受高温高湿环境的影响,黄曲霉毒素在农作物上的污染极易发生,造成巨大的经济损失。利用微生物代谢黄曲霉毒素,具有专一、高效、反应条件温和等诸多优点,是目前公认的理想脱毒方法。本文首先简要介绍了黄曲霉毒素B₁的形成过程、结构特征以及毒性基团,接着重点介绍了已报道的能代谢黄曲霉毒素B₁的微生物种类、关键酶以及代谢途径,最后列举了应用基础研究的例子。     

Bestimmung von Vitamin B1 in Zuckerwaren

Zusammenfassung Es ist festzustellen, daß das von Kinnersley und Peters angegebene Vitamin-B₁-Bestimmungsverfahren sich sehr gut bei der Vitaminbestimmung in Hartkaramellen bewährt hat.     

Hitzestabilit?t von Aflatoxin M1

Zusammenfassung Aflatoxin M₁ wurde Emmentaler Hartkäse zugesetzt, der zur Herstellung von Schmelzkäse verwendet wurde. Die Schmelzzeiten bei ca. 90° C lagen zwischen 3 und 30 min. Die Analyse der entsprechenden Schmelzkäse ergab eine durchschnittliche Wiederfindungsrate von ca. 91% Aflatoxin M₁. Das bedeutet, daß im Hartkäse vorhandenes Aflatoxin M₁ bei der Schmelzkäseherstellung praktisch nicht zerstört wird.

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Thermal stability of aflatoxin M₁

Summary Aflatoxin M₁ was added to Emmental hard cheese which was used for the production of processed cheese. The melting times at about 90° C varied between 3 and 30 min. The analysis of the corresponding processed cheeses yielded a recovery of about 91% aflatoxin M₁ on average. This means, that the aflatoxin M₁ present in the hard cheese is essentially not destroyed during the production of processed cheese.

     

乳与乳制品中黄曲霉毒素M1研究进展

目的：建立基于不同序列长度适配体的纳米金（Gold nanoparticles,AuNPs）比色传感法快速定量检测牛奶中的黄曲霉毒素M₁（Aflatoxin M₁,AFM₁）,并评价目前文献报道中常用的21（A21）和72个碱基（A72）长度的AFM₁适配体在实际样品中的检测性能。方法：采用柠檬酸钠还原法制备AuNPs溶液,加入AFM₁适配体及AFM₁标准品后,适配体与AFM₁特异性结合形成特殊三维结构,随着NaCl溶液加入,AuNPs溶液的稳定性被破坏而发生聚集,导致溶液颜色变化,通过测定AuNPs溶液的吸光值和吸收光谱定量检测AFM₁。结果：通过优化适配体浓度、NaCl浓度、反应温度及pH等实验条件,基于适配体A21和A72的AuNPs比色传感法检测AFM₁的检测限分别为25.26和5.77 µg/L,线性范围均为10~800 µg/L,且均具有良好的选择性及特异性,在牛奶中的加标回收率分别为95.7%~103.6%、94.3%~98.2%。结论：A72检测牛奶中AFM₁的效果优于A21,可能与适配体长度、构型及亲和性相关。基于适配体A72建立的比色传感法简单、快速、灵敏、特异性强且可视化,为AFM₁适配体在乳制品中的应用提供数据参考。

     

黑曲霉降解黄曲霉毒素B1的研究及转录组分析

为探究黑曲霉FS10对AFB_1的降解机制,使用黑曲霉FS10的不同组分(菌悬液、发酵液、孢子、菌丝体)对AFB_1进行降解,并研究了AFB_1刺激对黑曲霉FS10降解效果的影响;利用扫描电子显微镜观察降解过程中黑曲霉菌丝体的形态变化;用转录组学技术探究AFB_1可能的降解机理。结果表明:黑曲霉FS10能有效降解AFB_1,72 h时菌悬液的对AFB_1脱除率高达98.65%;黑曲霉FS10孢子对AFB_1无明显脱除作用,但菌丝体对AFB_1有一定的吸附能力,发酵液对AFB_1有明显脱除效果;经过AFB_1诱导刺激后黑曲霉FS10降解效果有明显提升,表明AFB_1处理能显著提升黑曲霉FS10对AFB_1的降解能力。微观结构分析表明AFB_1处理在一定程度上影响黑曲霉FS10的形态,但随着时间的延长这种影响逐渐减小。此外,转录组学分析表明AFB_1处理降低了一些能量代谢基因的水平,这可能是黑曲霉FS10的一种自我保护机制,同时蛋氨酸的合成基因上调,推测AFB_1的降解可能与蛋氨酸的合成有关。     

Bestimmung von Aflatoxin M1 und M2 in Milch

Zusammenfassung Durch Fällung der Milchproteine mit Cadmiumsulfat und Extraktion mit Chloroform wird eine schnelle und verläßliche Erfassung von Aflatoxin M₁ and M₂ erreicht. Die Abtrennung erfolgt dünnschichtchromatographisch, und zwar zweidimensional; einmal mit Diäthyläther, zum anderen mit Essigsäureäthylester/Acetonitril (1 + 1). Durch Derivatbildung, Sprühreagentien und Fluorescenzspektren wird die eindeutige Identifizierung gesichert. Die Erfassungsgrenze liegt bei 0,04 ppb.

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Determination of aflatoxin M₁ and M₂ in milk

Summary By precipitation of milk proteins with cadmium sulfate and by extraction with chloroform, a fast and reliable determination of aflatoxin M₁ and M₂ is achieved. The separation is performed by two-dimensional thin layer chromatography with diethyl-ether and acetic-acid ethyl-ester/acetonitrile (1 + 1). By derivate-formation, spray reagents and fluorescence spectra the definitive identification is assured; the detection limit is 0.04 ppb.

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Auszug aus der Dissertation von W. Mücke: Nachweis der Aflatoxine M₁ and M₂ in Milch. Technische Universität München 1973.

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19. Mitteilung: Zur Aflatoxinbildung in Milch und Milehprodukten.     

Zur Untersuchung von Milch und Milchprodukten auf die Aflatoxine B1, B2, G1, G2 und M1

Zusammenfassung Der vom Bundesgesundheitsamt vorgelegte Entwurf zur Bestimmung der Aflatoxine B₁, B₂, G₁ und G₂ wurde auf die zusätzliche Erfassung des Aflatoxins M₁ überpruft. Es wurde Wert darauf gelegt, die ursprüngliche Methode nur wenig zu ändern, um die zahlreichen Vorschläge zur Aflatoxin-Analytik nicht noch weiter zu vermehren. Mit verhältnisäßig geringen Änderungen können alle Aflatoxine, also B₁, B₂, G₁, G₂ and M₁ in flüissiger Milch, Milchpulver, Butter, Käse, Quark, Saline, Joghurt und Fruchtjoghurt quantitativ erfaßt werden.

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Investigations of aflatoxin B₁, B₂, G₁, G₂, and M₁ in milk and milk products

Summary The method proposed by the Federal Department of Health for the determination of aflatoxin B₁, B₂, G₁, and G₂ was tested for additional determination of aflatoxin M₁. With relatively small changes of the original method, all aflatoxins including. B₁, B₂, G₁, G₂, and M₁ can be determined quantitatively in milk, milk powder, butter, cheese, quark, cream, yoghurt and fruit yoghurt.

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37. Mitteilung: Zur Aflatoxinbildung in Milch und Milchprodukten.     

Zur Untersuchung von Milch und Milchprodukten auf die Aflatoxine B1, B2, G1, G2 und M1

Der vom Bundesgesundheitsamt vorgelegte Entwurf zur Bestimmung der Aflatoxine B₁, B₂, G₁ und G₂ wurde auf die zusätzliche Erfassung des Aflatoxins M₁ überpruft. Es wurde Wert darauf gelegt, die ursprüngliche Methode nur wenig zu ändern, um die zahlreichen Vorschläge zur Aflatoxin-Analytik nicht noch weiter zu vermehren. Mit verhältnisäßig geringen Änderungen können alle Aflatoxine, also B₁, B₂, G₁, G₂ and M₁ in flüissiger Milch, Milchpulver, Butter, Käse, Quark, Saline, Joghurt und Fruchtjoghurt quantitativ erfaßt werden.     

有机改性蒙脱土吸附黄曲霉毒素B1能力的研究

利用十八烷基三甲基溴化铵(OTMAB)作为有机改性剂对钠基蒙脱土(Na-MMT)进行改性,以提高对黄曲霉毒素B1(AFB1)的吸附能力。改性后的钠基蒙脱土利用X-射线衍射(XRD)、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、扫描电镜(SEM)及热失重分析(TGA)等方法对其结构特性进行研究。结果表明,改性剂OTMAB插入到钠基蒙脱土的夹层内并扩大了其夹层间距(d_(0.01)),增大了其比表面积。改性蒙脱土对AFB1的吸附等温线符合Langmuir数学模型。有机改性Na-MMT对AFB1的最大吸附量(q_(max))为34.25 mg/g,Langmuir吸附常数(k)为3.65L/mg,均高于未改性的Na-MMT(q_(max)=28.74mg/g和k=2.37L/mg),说明有机改性能够有效提高Na-MMT对AFB1的吸附能力。     

高灵敏黄曲霉毒素B1免疫层析定量检测法的建立

以胶体金为标记物,借助于胶体金读取仪,建立了高灵敏的定量检测黄曲霉毒素B_1的胶体金免疫层析方法。试纸条制备时,当标记溶液pH为6.0,检测线全抗原的使用浓度为1.5mg/mL,金标抗体浓度为4μg/mL、用量为1.2μL时,所建立方法的灵敏度为5.7ng/L。通过加速保存试验,结果显示该试纸条的保存期大于1年。该试纸条应用于实际谷物及酱油加标样本检测,证明该方法可满足食品快速检测的需要。     

Vitamins B1 and B2 contents in cultivated mushrooms

Mushrooms have long been treated as a delicacy. Nowadays however, many researchers consider them to be nutraceutical foods, which has stimulated new and existing Brazilian producers to search for more productive techniques and to introduce other species. The objective of this study was to determine the vitamin B₁ and B₂ contents in mushrooms. The main species of mushroom cultivated in Brazil and analysed in this study are: Agaricus bisporus (white button mushroom and portobello), Lentinula edodes (shiitake) and Pleorotus spp. (shimeji and oyster mushroom). The methodology employed used acid hydrolysis followed by enzymatic hydrolysis and separation of the vitamins by high performance liquid chromatography using a C₁₈ reverse phase column and fluorescence detector. The results obtained for thiamine (vitamin B₁) were from 0.004 to 0.08 mg/100 g and for riboflavin (vitamin B₂), from 0.04 to 0.3 mg/100 g.     

Zur Aflatoxin B1-Bildung in K?sen

Zusammenfassung Um die Frage zu beantworten, ob Aflatoxine im Käse vorkommen können, mußten käsereitechnische Erfahrungen über toxinproduzierende Mikroorganismen gesammelt werden. Zunächst wurden 169 Käseproben des Handels auf das mögliche Vorkommen von Aflatoxin B₁ geprüft. Bei keiner der 19 Käsesorten, in der Hauptsache Tilsiter, Edamer, Romadur und Camembert, konnte dieses Toxin nachgewiesen werden.Bei Modelluntersuchungen zur Entwicklung von Aflatoxin B₁ wurden einzelne Käse mit aflatoxinbildenden Schimmelpilzen künstlich infiziert, das Toxin nach der Mycelbildung isoliert und quantitativ bestimmt.Der Kulturschimmel des Camembertkäses (Penicillium candidum) verhindert das Wachstum B₁-Aflatoxin bildender Pilze, so daß kein Aflatoxin B₁ nachweisbar war. Auch beim Romadur kann das Vorkommen von Aflatoxin B₁ wegen der Pilzwachstumshemmung, vermutlich durch die Schmierenbildung, ausgeschlossen werden.Dagegen gelang es, auf Tilsiterkäse mitAspergillus flavus undAspergillus parasiticus bei 18–30° C und mitPenicillium puberulum bei 5–20° C größere Mengen von Aflatoxin B₁ anzureichern. Hierbei muß die relative Luftfeuchtigkeit mehr als 79% betragen. 18 bzw. 5° C sind die unteren Grenzwerte für das Wachstum der betreffenden Schimmelpilze auf dem Käse. Unter optimalen Einflüssen (Temp. 26° C; rel. Luftfeuchtigkeit 99%) ist das Aflatoxin B₁ bereits 3–4 Tage nach Pilzbefall durchAspergillus flavus im Käse vorhanden. Durch Vergleiche der gefundenen Ergebnisse mit den Verhältnissen in Käsereien kann eine Bildung von Aflatoxin B₁ in Käse durch die genannten Organismen nicht ausgeschlossen werden, so daß weitere Untersuchungen erforderlich sind.

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About the formation of aflatoxin B₁ in cheese

Summary In order to answer the question whether aflatoxins can be present in cheese, observations on toxin-producing micro-organisms during manufacture of cheese had to be undertaken. 169 cheese samples, taken from the market, were tested for possible presence of aflatoxin B₁. In none of the 19 cheese varities, mainly Tilsiter, Edamer, Romadur, and Camembert, toxins could be found.By artificial infection of cheese with aflatoxin-producing fungi, the toxin was isolated after mycel-formation and quantitatively determined.The starter fungus of Camembert cheese (Penicillium candidum) pevents the growth of aflatoxin B₁ forming fungi so that no aflatoxin B₁ was detected. Also in Romadur cheese the presence of aflatoxin B₁ can be excluded due to growth prevention, probably by smear formation.It was possible, however, to obtain larger amounts of aflatoxin B₁ on Tilsiter cheese by growth ofAspergillus flavus andAspergillus parasiticus at 18–30° C. The relative humidity has to be more than 79%. 18° C resp. 5° C are the lower tolerance values for the growth of these fungi on cheese. Under optimal conditions (temperature: 26° C, relative humidity: 99%) aflatoxin B₁ is present in cheese 3–4 days after infection byAspergillus flavus. By comparing these results with the conditions in cheese factories, the formation of aflatoxin B₁ in cheese, caused by the organisms mentioned, cannot be excluded, so that further investigations are necessary.

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Auszug aus der Dissertation Lebensmittelchemiker Dieter Groll: Zur Aflatoxin-Entwicklung in Käse. Dissertation TH München 1969.

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Für die Unterstützung dieser Arbeit durch das Bundesministerium für Gesundheitswesen sei an dieser Stelle herzlich gedankt.     

贵州苦荞饭中黄曲霉毒素B1物理降解技术对比

应用微波、紫外线、γ射线辐照三种物理技术降解苦荞饭中黄曲霉毒素B₁(AFB₁),采用高效液相色谱法测定AFB₁的含量。试验考察了微波功率、微波时间、紫外照射时间、紫外照射高度、γ射线辐照剂量对其降解效率的影响。结果表明,苦荞饭中AFB₁降解率依次为γ射线辐照 > 紫外降解 > 微波降解,γ射线在辐照剂量为20 kGy时,降解率分别为33.6%±1.5%(污染剂量7.5 μg/kg)、35.1%±1.7%(污染剂量30 μg/kg)、45.7%±1.3%(污染剂量60 μg/kg)。与单独降解技术相比,将任意两种或者三种降解技术联合后,其降解率均显著增加(P<0.05),微波+紫外线+γ射线辐照三种技术联合降解率可达51.9%±0.9%(污染剂量7.5 μg/kg)、66.5%±0.7%(污染剂量30 μg/kg)、71.5%±0.9%(污染剂量60 μg/kg)。三种物理降解技术对于苦荞饭中低剂量的AFB₁污染有一定的应用价值。     

黄曲霉毒素B1人工抗原及鼠源多克隆抗血清的制备

目的:研究合成并鉴定了黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源AFB1多克隆抗血清。方法:采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxy-succinimide NHS)法将AFB1分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原AFB1-BSA和包被抗原AFB1-OVA,采用紫外分光光度法和SDS-PAGE进行鉴定,通过动物免疫实验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行了鉴定。结果:结果表明半抗原AFB1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;免疫的6只小鼠效价均达1×10-4以上,3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50% inhibitive concentration,IC50)为8.199ng/mL。结论:实验成功合成了AFB1人工抗原,并生产了高效价、高敏感性的鼠源多克隆抗体血清,为AFB1单克隆抗体制备及其快速检测试剂的研制奠定了坚实的基础。     

快速测定婴幼儿配方乳粉中的维生素B1及B2

建立高效液相色谱-荧光法快速测定婴幼儿配方乳粉中维生素B₁及维生素B₂。方法优化了前处理条件,采用高压酸提法提取目标化合物,样品沉淀蛋白后直接测定维生素B₂,取部分清液用碱性铁氰化钾衍生后测定维生素B₁。目标物在对应的浓度范围内呈现良好的线性关系（R²≥0.9998）,样品加标回收率在92.4%～102%之间。该方法快速,准确,适用于婴幼儿配方乳粉中维生素B₁、B₂的测定。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及有效降解组分初探

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是具有强毒性、强致癌性的一种真菌毒素。为了筛选出AFB₁降解菌,将实验室保藏的真菌菌株与AFB₁共培养,选取降解率最高的菌株,经形态学和ITS rDNA分析确定其种属,分离菌株不同组分(菌悬液、菌体、孢子液、发酵液)后探究其降解AFB₁的有效组分,并将有效组分菌体破碎后作进一步探究。结果表明:培养72 h后的郝克氏青霉MD1菌悬液和未破碎菌体对AFB₁降解率分别为98.15%和28.20%,菌体破碎后对AFB₁的降解效果更好,培养24 h后对AFB₁的降解率为55.40%。因此,郝克氏青霉MD1的菌悬液和菌体内的活性组分能有效降解AFB₁。本研究筛选出的郝克氏青霉MD1扩大了AFB₁降解菌的菌种库,为AFB₁的生物降解提供了一定的参考价值。