阪崎肠杆菌及与肠杆菌科其他细菌差异比较

为进一步推动乳品企业对每批次婴幼儿配方乳粉进行阪崎肠杆菌出厂检验,寻求准确,更加便捷、且检测费用低廉的检测方法.选择3种基础肠道分离培养基组合应用进行了研究,分离阪崎肠杆菌并对几种常见的肠杆菌科细菌在5种肠道分离培养基上生物学特性反应差异比较,以及对3种方法所用的培养基分离鉴定结果进行比较.结果表明,3种基础肠道分离培养基组合应用,观察其不同形态特征及生物学特性反应后,可初步判别阪崎肠杆茼及肠杆菌科中不同的属以及同属不同种.3种用于分离鉴定阪崎肠杆菌方法,无统计学差异.该方法分离崎肠杆菌准确、操作便捷、且检测费用低廉,有利于乳品企业对每批次产品进行阪崎肠杆菌监控.     

新型阪崎肠杆菌选择性分离培养基的研制

目的:筛选一种新型、特异性高的阪崎肠杆菌选择性培养基.方法:通过药敏实验,筛选出对阪崎肠杆菌耐药而对其他杂菌敏感的抗生素;利用抑菌浓度实验、抗生素组合平板实验,筛选出最佳的抗生素组合方式及浓度.将抗生素组合与显色剂添加到基础培养基中,配制成阪崎肠杆菌的新型选择培养基.结果:组合抗生素(4μg/mL万古霉素、0.1μg/mL头孢噻吩)和显色剂(0.1g/L 5-溴-4氯-3-吲哚-a-葡萄糖苷)添加到脑心培养基中,制成阪崎肠杆菌VC选择性显色培养基,能最大限度地抑制杂菌生长,而对阪崎肠杆菌的生长没有影响.经灵敏性实验,对接种的奶粉样品中的阪崎肠杆菌的检出限达到lcfu.结论:制得的新型阪崎肠杆菌选择性培养基特异性强、灵敏度高,可用于奶粉样品的分离检测.     

进口乳粉中阪崎肠杆菌检测分析

应用检验检疫行业标准<奶粉中阪崎肠杆菌的检验方法>中分离计数及普通PCR两种方法时50份进口乳粉进行检测,两种方法检测结果均准确可靠,但增茵方法不统一,标准有待完善.近三年来,天津口岸共检出31份阪崎肠杆菌阳性的进口乳粉.对这些阳性样品及阪崎肠杆茵进行了地域、污染情况及生化性状的总结分析,为完善检验方法及阪崎肠杆菌的进一步深入研究奠定基础.     

16S rDNA技术在乳粉阪崎肠杆菌监测中的应用

通过对婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌的检测,利用16S r DNA基因测序方法验证沙门显色培养基上分离到的蓝绿色的菌落进行监控的必要性。在进行监测的环境和原料样品中,通过对依据GB4789.4-2010监测沙门氏菌时从沙门氏菌显色培养基上分离出的,经API20E鉴定为阳性的阪崎肠杆菌的蓝绿色菌落进行基因测序。利用Micro SEQ ID微生物鉴定系统(ABI)进行16S r DNA基因测序分析,构建系统发育树,鉴定种属。结果表明:7株从沙门显色培养基上分离到的环境中的阪崎肠杆菌,经16S r DNA基因测序验证其中5株为阪崎肠杆菌,其余两株均为梨形肠杆菌。2株从沙门显色培养基上分离到的原料中的阪崎肠杆菌,经16S r DNA基因测序验证一株为梨形肠杆菌,另一株为溶解肠杆菌。实验过程中的9株菌,被证实为阪崎肠杆菌阳性的为5株,比例高达55.6%。由此可见,对沙门显色培养基上蓝绿色菌落进行监控十分必要,这一结论也为乳品企业中阪崎肠杆菌的防治、排查及溯源提供依据。     

奶粉中阪崎肠杆菌的污染及快速检测方法的研究

目的：了解福建省市售婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的污染状况、污染途径并寻找快速准确的检测方法。方法：应用分离鉴定、PCR 和荧光PCR 等方法检测,分离鉴定采用阪崎肠杆菌显色培养基和全自动微生物生化仪。结果：阪崎肠杆菌在192 份市售婴幼儿配方奶粉中的检出率为1.56%,在60 份原料奶粉中的检出率为13.33%,30 份生产车间环境样本均未检出。结论：福建省市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌的安全隐患,某工厂奶粉中阪崎肠杆菌的污染主要来自原料奶粉。荧光PCR 和显色培养基可用于阪崎肠杆菌的快速筛选和分离。     

3种方法检测婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌

目的对市售婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌检测方法进行研究。方法分别用常规培养鉴定方法、常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌分离鉴定。结果32份样品中检出2株阳性株，阳性率为6．25％，3种鉴定方法结果相符。结论联合使用多种鉴定方法可提高阪崎肠杆菌检测的可靠性。     

环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌

利用环介导等温扩增方法的快速、简便等优点,建立一种检测乳中阪崎肠杆菌的方法.以阪崎肠杆菌的OmpA序列为靶基因,设计特异性引物.优化并建立LAMP检测乳中阪崎肠杆菌的方法.结果表明,LAMP检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度为3.7×101cfu/mL,其灵敏度是PCR方法的10倍.人工污染阪崎肠杆菌灭菌乳的检测限为4.3×101 cfu/mL.对23株致病菌进行特异性实验,特异性良好.该方法具有特异性强、灵敏度高、设备简便、耗时短等优点,在食品检测中具有良好的应用前景.     

市售配方粉中阪崎肠杆菌检测方法的比较

目的比较和分析两种不同的阪崎肠杆菌定性检测方法的区别。方法修改采用美国FDA和ISO阪崎肠杆菌检测方法,同时对194份市售配方粉进行定性检测。结果经过选择性增菌和分离,第二法中待鉴定的阪崎肠杆菌疑似菌落只有8个,明显少于第一法,而且其特征性菌落易于辨认。运用两种方法分别检测到4个和5个阳性样品,其中第二法检出的1个阳性样品在第一法中未检出。结论第二法中的选择性增菌液肉汤mIST—Vm和阪崎肠杆菌显色培养基的选择性明显优于第一法中相应的培养基,可以大大减少工作量,简单省时。     

中国安徽阜阳劣质婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染

2004年中国安徽阜阳劣质婴儿配方粉事件引起了我国政府的高度重视.为了调查婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的污染状况,根据美国FDA和加拿大实验室的方法,建立了婴儿配方粉中阪崎肠杆菌的分离鉴定技术.从87份阜阳劣质奶粉样品中检测到11份阪崎肠杆菌阳性样品,污染阳性率为12.6%.用API 20E和Qualicon BAX(R)系统鉴定了11株阪崎肠杆菌.这是国内首次从婴儿配方粉中分离到阪崎肠杆菌菌株.     

恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。