甜高粱秆汁高产酒精酵母原生质体的诱变选育

以南阳酵母菌为出发菌株,采用紫外线对其原生质体进行物理诱变和TTC法初筛,并以甜高粱秆汁为发酵底物进行发酵试验,最终选育出高产酒精的NY-09菌株。试验结果表明,经紫外线照射20s～30s,致死率为78.7%～86.56%,发酵48h后发酵液残糖为2.09g/mL,酒精度为11.2%,较出发菌株提高了23.3%。经过连续转接10代,NY-09的发酵性能无明显变化,表现稳定。     

氯化锂诱变赤灵芝原生质体选育高锗菌株的研究

采用化学诱变剂氯化锂诱变赤灵芝原生质体,对高锗含量的菌株进行了筛选。结果表明:经0.3%氯化锂诱变后,致死率为72.8%。此时诱变菌株第4代锗含量达到最高,为174.88μg/g,比原发菌株提高了269.02%,第3代比第1、2代锗含量分别提高3.33%、0.80%,较原发菌株提高了281.30%,诱变菌株遗传稳定性良好。     

桑黄菌原生质体诱变及发酵菌株选育

对桑黄菌原生质体进行紫外线与He-Ne激光复合诱变处理,经过3代筛选,筛选出了5株变异株SJ1～SJ5。5株变异株都具有较稳定的遗传性,多糖发酵产量比出发菌株均有所提高,其中SJ4比出发菌株增产57.74%,表现最优,酯酶同工酶分析表明SJ4与出发菌株相比酯酶酶谱发生了变化。     

林肯链霉菌原生质体制备条件的研究

对林肯链霉菌SL98原生质体制备条件进行了探索.其原生质形成最佳培养基中含甘氨酸浓度为0.4%,蔗糖浓度为34%;酶解条件是采用溶菌酶浓度4mg/mL,菌龄72h,酶解时间5h,酶解温度为30℃.其最高的原生质体的制备率达16.3%.     

原生质体诱变选育高富硒量冬虫夏草菌株的研究

以冬虫夏草菌丝体为材料,经原生质体诱变获得了生物量和富硒能力均高于出发菌株的无性型菌株。实验结果表明:经紫外线诱变的8号再生菌株的生物量和富硒能力分别是13.445mg/mL和125.8μg/g,分别比出发菌株提高55.16%和50.12%。     

原生质体紫外诱变选育纳豆激酶高产菌株

以纳豆菌B．N．K为出发菌株，在适宜条件下制备和再生原生质体，并结合紫外线诱变筛选纳豆激酶高产菌株。经过原生质体紫外诱变的重复处理、摇瓶复筛和遗传稳定性试验，最终得出5株高产菌株即DU104、DU115、DU120、DU212、DU223，酶活分别为383．65、400．74、327．15、347．16、378．98IU／ml，比出发菌株B．N．K分别提高了67．1％、74．5％、42．5％、51．2％和65．0％。     

原生质体复合诱变选育耐高温高产乙醇酵母菌株

以酿酒酵母Ygx-5为出发菌株,对其原生质体进行紫外线(UV)与亚硝基胍(NTG)复合诱变,经初筛和复筛,选育出1株耐高温、高产乙醇菌株U-N2。在37℃培养条件下,菌株U-N2产乙醇浓度最高可达16.32%vol,比原菌株提高20.44%,比只用紫外线诱变后的菌株提高8.04%,比只用亚硝基胍诱变后的菌株提高6.27%。经过20次传代培养,乙醇产量稳定。     

基于紫外诱变原生质体法选育高活力蛋白酶产生菌

以米曲霉沪酿3·042为出发菌株,在适宜条件下制备原生质体,并进行紫外线诱变提高蛋白酶活力。经过原生质体紫外诱变的处理和遗传稳定性实验,最终得到一株高产菌株,其蛋白酶活力的产量达1700U/g以上,约是出发菌株的1·8倍。     

基于紫外诱变原生质体法选育高活力蛋白酶产生菌

以米曲霉沪酿3·042为出发菌株,在适宜条件下制备原生质体,并进行紫外线诱变提高蛋白酶活力。经过原生质体紫外诱变的处理和遗传稳定性实验,最终得到一株高产菌株,其蛋白酶活力的产量达1700U/g以上,约是出发菌株的1·8倍。      

原生质体紫外诱变技术在核糖菌种选育中的应用

本文采用原生质体紫外诱变技术,经过硫酸二乙酯(DES)诱变后筛选出的NO3菌。采用溶菌酶浓度0.8mg/ml,酶解温度36℃,酶解时间120min,获得原生质体;采用10s作为紫外原生质体诱变的作用时间,选育出一株稳定的核糖生产菌TJ3,该菌具有莽草酸营养缺陷,耐高糖、以核糖为唯一碳源不生长等遗传标记。     

游动放线菌原生质体诱变选育阿卡波糖高产菌株

为提高阿卡波糖发酵水平,制备了阿卡波糖产生菌犹他游动放线菌ZJB-08196的原生质体并对原生质体进行诱变处理。考察了甘氨酸的添加方式及浓度、菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、菌体浓度对原生质体制备和再生的影响,并对再生培养基进行了优化。较佳的原生质体制备与再生条件为:菌体一级培养56 h后,转接入含0.4%甘氨酸的菌丝培养基中二级培养22 h,收集菌体并调整菌体浓度为0.2 g/mL,用10 mg/mL溶菌酶35℃水浴酶解4 h后,涂布添加4 g/L L-脯氨酸和0.2 g/L聚乙烯吡咯烷酮的R2YE固体平板,原生质体的再生率达到了15.14%。原生质体经紫外诱变处理,筛选到1株高产突变株UN-52,阿卡波糖产量达到5 165.2 mg/L,比出发菌株提高了12%。     

原生质体紫外诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株

对Pseudomonas sp.HJ-14的原生质体制备和再生条件进行了研究,并对其原生质体紫外辐照诱变选育L-半胱氨酸高活力转化菌株。在37℃、2 mg/mL溶菌酶作用下酶解60 min,其原生质体的形成率和再生率分别为78.6%和28.6%。经过紫外辐照诱变Pseudomonas sp.HJ-14原生质体,在含DL-2-氨基-△~2-噻唑啉- 4-羧酸(DL-ATC)再生平板上筛选抗性菌株,获得1株酶活较高的正突变株B-3,该菌株具有良好的遗传稳定性和酶活稳定性。采用5L罐进行产酶培养,并在pH8.0、DL-ATC·3H_2O浓度为10 g/L、42℃酶促反应9 h,L-半胱氨酸最高产量达4.63 g/L,摩尔转化率为76.5%,较HJ-14提高了117.7%。     

原生质体紫外诱变选育多糖高产菌株

采用紫外诱变选育多糖高产菌株,通过对原生质体形成条件及诱变条件的研究,探索出了原生质体形成和诱变的最优条件:菌龄为52h,酶解浓度为0.02g/mL,酶解时间为2h,酶解温度为25℃~29℃,0.6mol/L的甘露醇做稳渗剂。通过实验并确定了紫外诱变最佳条件为15W紫外灯30cm处照射时间为10m in,通过初筛和复筛,最终选育出5株遗传性状稳定的多糖高产诱变株,多糖产量分别提高了21.7%、13.5%、12.2%、37.4%、24.0%。     

原生质体紫外诱变选育富硒血芝优良菌株

探讨了利用原生质体诱变育种技术选育富硒能力强的血芝优良菌株,确定其原生质体制备的最适条件为:以6d菌龄的菌丝体为基体,用3%裂解酶+0.5%蜗牛酶,0.6mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,30℃下酶解3.5h。原生质体的产量最高可达到8.28×106cfu/mL。对其原生质体进行了紫外照射诱变以及再生培养,筛选获得了1株具有稳定遗传性的富硒血芝菌株UV37。该菌株液体发酵菌丝干重和菌丝体中含硒量分别为19.81mg/mL和42.87μg/g,与出发菌株相比分别提高了20.35%和58.31%。     

果胶酶产生菌ZH-g的原生质体形成与再生研究

本文通过研究酶浓度、酶的作用时间、菌龄、菌体预处理等不同因素对原生质体形成与再生的影响,得出了果胶酶产生菌ZH-g原生质体制备和再生的最佳条件:加入0.6μg/ml的氨苄青霉素进行菌体预处理,选用对数生长期的菌株,以1.2mg/ml溶菌酶37℃保温处理2h,原生质体形成率为92%,再生率达50.7%。     

酯化红曲霉原生质体制备及紫外线诱变育种

以红色红曲霉（Monascus ruber）为出发菌株,用混合酶制取原生质体并对原生质体形成条件进行探讨,并进行紫外诱变选育。采用50h菌龄的菌丝体,使用蜗牛酶（0.6%）＋溶菌酶（0.4%）＋纤维素酶（0.6%）的复合酶液,30℃酶解2h,在该条件下原生质体浓度可达7.8×106个/mL,再生率为7.3%。在最佳紫外照射时间80s下,突变株经筛选,得到一株酯化酶活显著提高、遗传性能稳定的诱变株HN215-6,其酶活达468.4mg/100mL,比出发菌株HN215提高了1.66倍。     

黑曲霉原生质体诱变选育内切型菊粉酶生产菌株

从徐州市沛县河口镇秦庄村牛蒡种植基地腐烂牛蒡根附近采集土壤,经过初筛得到了3批菌株(包括从中国科学院购买菌株黑曲霉AS3.316),经过测定内切型菊粉酶酶活力(I)和外切型菊粉酶酶活力(S),筛选出I/S值大于10的菌株,共17株菌株。从17株黑曲霉菌株样本中,再筛选出一株产菊粉酶酶活力最高的菌株C122803,其酶活力为2.78U/mL。对菌株C122803进行原生质体制备及LiCl诱变后,得到一株内切型菊粉酶酶活力最高的菌株YY18,其酶活力为3.97U/mL,比出发菌株的酶活力提高了42.80%。     

雀稗麦角菌原生质体诱变育种及发酵条件研究

为获得麦角碱高产菌株,提高雀稗麦角菌（Claviceps paspali strain 3103）发酵的产碱率,用溶壁酶水解处理菌丝体、不同浓度的亚硝基胍诱变处理制备的原生质体,经再生培养获得诱变菌株,再经紫外初筛后进行发酵复筛,采用Van—Urk方法测定产碱量。筛选得到的高产菌株进行二级发酵并优化其发酵条件。实验结果表明,经亚硝基胍诱变处理,麦角总碱的产率由90mg／L提高到了1600mg／L,增加了约16倍;单位产碱率由22．5mg／L／g提高到了400mg／L／g,增加了约17倍;连续传代培养可以得到稳定的高产菌株,接种量为20％时可有效缩短发酵周期。结果表明,用亚硝基胍对原生质体进行诱变处理可有效提高C．papspali的产碱率。     

复合诱变选育茁霉多糖高产菌株

茁霉多糖具有许多优良的化学性质,可以作为中间体合成多种有经济价值的工业用化合物,是一种潜在的重要化工平台产品.以出芽短梗霉Y为出发菌株,通过紫外2轮、亚硝基胍3轮复合诱变,高蔗糖浓度(20％)平板筛选得到6株高产突变株,其中菌株N3茁霉多糖产量质量浓度达到37.84g/L,比出发菌株产量提高71.22％.     

冬虫夏草原生质体诱变育种研究

以冬虫夏草原生质体为材料,经紫外诱变获得了性状优于出发菌株的突变株。实验结果表明:生物量最高的再生菌株为诱变30s的8号菌株,生物量达到1.3445g/100mL,比出发菌株生物量提高55.16%;胞内多糖产量最高的再生菌株为诱变30s的3号菌株,胞内多糖产量达到54.570mg/g,比出发菌株多糖产量提高52.9%;富硒能力较高的突变菌株是诱变30s的8号菌株,富硒量达到125.8μg/g,比出发菌株提高50.11%。由结果可知,原生质体诱变技术可以用于冬虫夏草的菌种选育。