Zn2+对制麦的影响及作用机理的研究

研究了制麦过程中添Zn2+加对制麦影响及Zn2+作用机理。发现Zn2+抑制麦芽苹果酸脱氢酶(MDH)活性,在添加0.3mmol/L、1.2mmol/L、2.1mmol/L Zn2+的实验组中MDH活性均受到抑制。Zn2+通过抑制MDH活性抑制麦芽呼吸作用,减少麦芽中糖的消耗,从而降低了制麦损失;添加0.3mmol/L Zn2+没有降低呼吸损失反而有促进作用,1.2mmol/L、2.1mmol/L Zn2+都能降低制麦损失,且Zn2+浓度越高抑制作用越明显。同时研究了Zn2+对麦芽几项重要品质的影响,结果表明添加Zn2+会小幅降低麦芽的蛋白溶解度及糖化力,但麦芽的浸出率有所提高。     

大麦发芽过程中金属离子对大麦酶系中淀粉酶活力影响研究

在大麦发芽过程中通过浸泡方式添加金属离子K 、Na 、Cu2 、Mg2 、Zn2 来提高制麦酶系中α和β淀粉酶的活力, 使麦汁中的离子构成及含量更加合理,这对于啤酒发酵是非常重要的实验发现,Na 、Cu2 对α和β淀粉酶活力影响较大;Mg2 和Zn2 对α-淀粉酶活力有一定的影响, 对β-淀粉酶活力有影响,但幅度较小;K 对α-淀粉酶活力有影响,而时β-淀粉酶活力有一定的影响;当Na 、K 、Mg2 、Zn2 和Cu2 浓度分别达到80、60、40、20、20mg/kg 时,两种淀粉酶活力都达到最大值。     

关于添加金属离子对国产大麦芽酶系酶活力影响的研究

国产大麦芽的酶活力不如进口大麦芽的酶活力强,其中原因之一是国产大麦中某些金属离子含量低,而这些离子对大麦中的某些酶有抑制和激活作用。实验发现:当添加Na+、K+、Mg2+、Zn2+和Cu2+浓度分别达到80×10-6、60×10-6、40×10-6、20×10-6、20×10-6时,制麦酶系中的α-淀粉酶、β-淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶活力都达到最大值,提高幅度明显。故可通过添加某些金属离子来强化制麦酶系的酶活力,提高其生产性能。     

啤酒大麦制麦过程中淀粉酶活性变化动态的研究

以不同品种的大麦为材料,运用底物分析法检测3种淀粉酶的活性。不同品种的大麦中α-淀粉酶、β-淀粉酶和极限糊精酶活力差异较大,因此实际生产中可对不同品种大麦进行筛选,选用酶活较高的大麦来制备麦芽;在制麦过程中,浸麦可在一定程度卜抑制淀粉酶的活力;淀粉酶的总活力在发芽初期缓慢增加,2d～3d后急剧增加至最大值;焙焦可使3种酶酶活有不同程度地下降。     

啤酒大麦制麦过程中淀粉酶活性变化动态的研究

以不同品种的大麦为材料,运用底物分析法检测三种淀粉酶的活性.不同品种的大麦中α-淀粉酶、β-淀粉酶和极限糊精酶活力差异较大,因此实际生产中可对不同品种大麦进行筛选,选用酶活较高的大麦来制备麦芽;在制麦过程中,浸麦可在一定程度上抑制淀粉酶的活力;淀粉酶的总活力在发芽初期缓慢增加,2～3d后急剧增加至最大值;焙焦可使三种酶酶活有不同程度的下降.     

大麦发芽过程中添加金属离子对纤维素酶和蛋白酶活力影响研究

在大麦发芽的过程中蛋白酶和纤维素酶是关系到麦芽和啤酒质量的重要酶类,通过浸泡方式添加金属K+、Na+、Cu2+、Mg2+、Zn2+离子,来提高制麦酶系中纤维素外切酶和蛋白酶的活力,加速大麦胚乳细胞壁的溶解和提高麦汁中α-氨基氮的含量,这对于啤酒发酵是非常重要的。实验发现:Na+、K+、Mg2+、Zn2+和Cu2+对纤维素酶活力有一定的影响,而对蛋白酶活力有很大的影响,当其浓度分别达到60mg/kg、60mg/kg、40mg/kg、20mg/kg、20mg/kg时,两种酶活力达到最大值。     

制麦过程中添加金属离子与赤霉素对大麦发芽过程淀粉酶系影响的研究

大麦发芽过程中,添加不同浓度的金属离子Mg2+、Ca2+、Zn2+、K+、Na+和赤霉素(GA3)对α-淀粉酶、β-淀粉酶和极限糊精酶活性有一定的激活和抑制作用;实验发现,添加量分别为:Mg2+50mg/kg,Ca2+50mg/kg,Zn2+20mg/kg,K+60mg/kg,Na+80mg/kg,GA30.5mg/kg时,对上述3种淀粉酶酶活均有一定的激活作用。与单独用金属离子或赤霉素浸麦相比,金属离子和赤霉素的配合使用对3种淀粉酶的酶活提高作用更为显著。     

中国蛤蜊内源酶性质的研究

研究了中国蛤蜊的肌肉与消化腺中内源酶的性质。结果表明:1中国蛤蜊肌肉中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H为7.0与9.0,可能存在同工酶;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Cu2+在5mmol/L时,对酶活力有激活作用,随着浓度升高对酶活力有抑制作用;Mn2+在5~15 mmol/L时,对酶活力影响不大,在20 mmol/L时对酶活力有激活作用。2消化腺中蛋白酶最适温度为60℃,最适p H 8.0;Pb2+对蛋白酶活力有激活作用;Mn2+对酶活力有抑制作用;Mg2+与Ca2+在5 mmol/L时,对酶活力有抑制作用,随着浓度升高有促进作用。Cu2+在5~15 mmol/L时对酶活力有促进作用,当浓度为20 mmol/L时,对酶活力有抑制作用。3肌肉中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H 10.0;Mn2+、Ca2+对淀粉酶活力有促进作用;Pb2+在5~10 mmol/L时对酶活力有促进作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有抑制作用;Mg2+在5~10 mmol/L时对酶活力有抑制作用,在15~20 mmol/L时对酶活力有促进作用;Cu2+在5 mmol/L时对酶活力有促进作用,随着浓度升高,对酶活力有抑制作用。4消化腺中淀粉酶最适温度为40℃,最适p H为9.0;Ca2+在20 mmol/L时对淀粉酶活性有促进作用,低于此浓度有抑制作用。Pb2+、Mg2+、Cu2+和Mn2+对淀粉酶活性皆有不同程度的抑制作用。     

浸麦过程中添加金属离子对麦芽内源抗氧化活力的影响

以大麦为实验材料,通过在浸麦阶段添加不同量(0、20、40、60、80、100mg/kg)金属离子(K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+和Cu2+),测定所制得成品麦芽的相关氧化还原酶(SOD、CAT、POD和PPO)活力、总酚含量、DPPH自由基清除率、还原力和TBARs值,以考察浸麦过程中添加的金属离子对麦芽内源性氧化还原酶与抗氧化活力的影响。结果表明:不同添加量的各金属离子对麦芽氧化还原酶类的影响不尽相同;适宜添加量的上述金属离子均有效增强了麦芽的总酚含量、DPPH自由基清除能力和还原力,降低了麦芽的TBARs值。     

钙处理对发芽糙米中淀粉酶活力的影响

研究了Ca2 + 处理对发芽糙米中淀粉酶活力的影响。结果表明 ,在 (2 1± 0 5 )℃发芽温度下 ,0～ 15mmol/LCa2 + 浓度范围内 ,低浓度的Ca2 + 能提高发芽糙米中淀粉酶活力 ,最佳浓度为 0 5mmol/L ,超过此浓度则产生抑制作用。在不同的发芽时间里 ,糙米中淀粉酶活力都表现出这一变化趋势 ;淀粉含量随淀粉酶活力升高而降低 ;低浓度Ca2 + 有提早发芽糙米还原糖含量高峰出现的作用。     

不同营养元素对甜玉米种子活力及抗氧化指标的影响

以超甜玉米种子为实验材料,探讨不同的营养元素对种子活力及抗氧化指标的影响。结果表明,Mn2+、Zn2+、K+营养元素处理过的种子发芽势与对照相比均达到了显著差异;在0.1～10mmol/L的范围内,K+处理过的种子发芽率显著高于对照,Mn2+、K+浸种的种子发芽指数和活力指数均升高,Zn2+浸种的种子发芽指数和活力指数均降低;不同的营养元素处理后,甜玉米种子萌发的SOD、POD、CAT酶活性呈现先升高再下降的趋势,但不同的氧化酶对不同的营养元素敏感性不同;种子脱氢酶活性先升高再降低,其中,1.00mmol/LK+处理的种子脱氢酶酶活性最高,10.00mmol/LZn2+、Mn2+处理的种子脱氢酶酶活性最高。随着营养元素浓度的增加,甜玉米种子的MDA含量上升。     

来源于P.bacterium 1109的甘露醇脱氢酶的重组纯化及酶学性质研究

本文将来自P.bacterium 1109的甘露糖醇脱氢酶(MDH)表达并提取纯化,研究了该重组酶的酶学性质及其在甘露醇生产中的工艺条件。结果显示重组MDH是一个相对分子量为37 kDa的四聚体。氨基酸序列比对发现其与大多数MDHs的同源性小于40%。该酶的最适pH和温度分别为8.5和80℃,且当金属离子Zn2+存在时,重组MDH的活力提高到对照组的260%。此外,重组MDH在75℃孵育6 h后仍可保留超过85%的残留活性,热稳定性较高,比大多数MDHs的活性高。底物特异性研究表明其对D-果糖具有较高的专一性。重组MDH催化D-果糖的米氏常数(K_m)和催化效率(k_cat/K_m)分别为20 mmol/L和7.5 L/(mmol·min)。重组MDH在以400 mmol/L的D-果糖为底物的反应系统中,可将80%以上的D-果糖转化为甘露糖醇。通过对反应条件的优化,为后续工业化生产制备甘露醇奠定了基础。     

大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质

以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶(mdh)编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶(mdh),纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K+对酶有明显的激活作用,Cu2+对酶有抑制作用,Hg2+和Zn2+对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/(L.min)。     

D-松醇复配Mn2+对HepG2细胞胰岛素抵抗的调节及其作用机制

采用胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型(IR),研究D-松醇复配Mn2+对细胞葡萄糖消耗量和糖原合成量的影响。实时荧光全定量分析(RT-PCR)实验检测AMPK信号通路相关基因mRNA表达水平。结果表明当胰岛素浓度为1×10-3 mmol/L,作用时间为36 h时,细胞葡萄糖消耗量达到最低,产生最大的胰岛素抵抗效应。与模型对照组相比,当D-松醇浓度为100 mg/L,复配MnSO₄为10 mg/L时,葡萄糖消耗量和糖原含量均极显著升高(p<0.01)。此外,复配组AMPKα-1、AMPKα-2和GLUT4基因表达水平均显著上调(p<0.05),G6Pase基因mRNA表达水平显著下调(p<0.05)。D松醇复配Mn2+可显著促进胰岛素抵抗细胞葡萄糖的利用,增加糖原合成,其作用机制可能涉及AMPK参与的抑制糖异生等生化调控过程起到降血糖作用。     

广东客家娘酒发酵过程中产β-葡萄糖苷酶酵母菌的筛选及酶学性质研究

采用七叶苷分离培养基初筛、4-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-NPGal）显色法复筛的方法从广东客家娘酒发酵过程中的酒糟中筛选产β-葡萄糖苷酶能力较强的酵母菌,通过26S rDNA D1/D2区基因序列分析对其进行鉴定,并对其酶学性质进行分析。结果表明,获得1株产β-葡萄糖苷酶能力较强的假丝酵母Candida apicola kj_312。该菌株所产的β-葡萄糖苷酶具有较宽的底物特异性,最适底物为对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷;最适反应温度为60 ℃,在25～65 ℃范围内,相对酶活力＞50%;最适pH值为4.5,在pH值为4.0～7.0酸性范围内,相对酶活力＞80%;1 mmol/L的Ca2+、Mn2+、Zn2+和Fe2+及100 mmol/L的Ca2+、Zn2+和Fe2+能显著提高酶活力。     

Fe2+对太湖蓝藻厌氧发酵产甲烷过程中关键酶的影响

通过研究不同质量浓度Fe2+对太湖蓝藻厌氧消化过程中相关酶活性的影响,以进一步提高其厌氧产甲烷的能力。结果表明,当添加Fe2+3 mg/L时,反应瓶中甲烷积累产量最高,为986.7mL,比空白对照组提高了43倍。同时,当Fe2+质量浓度为0.5 mg/L时,脱氢酶活性达到118 U,比空白对照组提高了76%;当Fe2+质量浓度为0.5 mg/L时,BAA-蛋白水解酶活性为3126.9 U,比空白对照组提高了83.4%;当Fe2+质量浓度为1 mg/L时,β-葡萄糖苷酶活性达到47 493 U,比空白对照组提高了6.3倍;当Fe2+质量浓度为3 mg/L时,F420摩尔质量为0.2 mmol/g,比空白对照组提高了4.3倍。     

金属离子对米糠解脂酶活性影响的研究

实验用CaCl2溶液从脱脂米糠中提取解脂酶,经(NH4)2SO4沉淀后,获得粗酶。用分光光度法测定了6种不同的金属离子对酶活力的影响,实验结果表明,在浓度为0.01mol/L时,Zn2+、Fe2+、Mg2+等金属离子对米糠解脂酶起激活作用,Ca2+、Ba2+、Cu2+等离子对酶活性起抑制作用。当离子浓度在0.001mol/L到0.1mol/L之间变化时,随着离子浓度的增加,Ca2+、Ba2+、Cu2+3种金属离子会使酶的活性逐渐降低;而Zn2+、Fe2+、Mg2+3种金属离子浓度在0.001～0.02mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐升高,在0.02～0.1mol/L的变化范围内,酶活性随着离子浓度的升高而逐渐降低。     

猪脑乙酰胆碱酯酶的分离纯化和性质研究

通过离心、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Superdex-200层析等步骤,从猪脑中获得电泳纯乙酰胆碱酯酶,该酶比活力和纯化倍数分别为2.05 U/mg和26.97,酶活回收率为11.95%;该酶分子质量为257.30 kD,亚基为66.94 kD;以碘化硫代乙酰胆碱为底物时,酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH值为7.4,且在40 ℃以下,pH 6.0～8.0有较好的稳定性;最适底物浓度为4.0 mmol/L,Km为0.94 mmol/L。Ba2+和Zn2+对该酶有强烈的抑制作用,而低浓度Mg2+对该酶有激活作用。     

白鲢鱼背侧肌焦磷酸酶的纯化及酶学特性

通过粗分离、50%～80%饱和度硫酸铵分级沉降、DE-52阴离子交换柱层析等步骤,从白鲢鱼背侧肌中分离纯化出焦磷酸酶。通过变性凝胶电泳分析,该酶在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中仅有一个分子质量为40 kD的条带。酶学特性研究表明,白鲢鱼背侧肌焦磷酸酶可专一性地水解焦磷酸盐,反应初速率时间范围为0～15 min,最适反应温度为45 ℃,最适反应pH值为7.5。Mg2＋对该酶有明显的激活作用,在Mg2＋浓度为5 mmol/L时酶活力最高。5 mmol/L的Ca2＋、Zn2＋、乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA）-Na2、EDTA-Na4、KIO3和1 mmol/L的NaF均对该酶有强烈的抑制作用。该酶水解焦磷酸四钠的最大反应速率为0.051 U/mg,米氏常数为0.54 mmol/L。     

嗜热真菌单宁酶的克隆表达及在柿子汁中的应用

对嗜热烟曲霉中的单宁酶基因afTanA在毕赤酵母中进行异源表达,分析重组酶的酶学性质及其对柿子汁抗氧化性的影响。研究表明,afTanA基因由1 767 bp碱基组成,编码588个氨基酸和一个终止密码子,存在1个Kex2酶切位点(Lys315-Arg316),其催化活性位点为Ser202、Asp455和His501。重组菌株经48 h诱导,重组AfTanA酶活力达到678U/mL。AfTanA的最适反应温度为40℃,最适pH5.0。不同金属离子浓度对酶活力的影响存在差异,在低浓度(1mmol/L)条件下,Zn2+使AfTanA酶活力提高49.65%,而Cu2+和Fe3+使该酶活力分别降低约78%和98%;在高浓度(5mmol/L)条件下,Zn2+使AfTanA酶活力降低47.12%,Cu2+和Fe3+能够完全抑制AfTanA活性。柿子汁经重组单宁酶AfTanA处理后,其抗氧化性能力显著提高,DPPH、ABTS自由基和·OH清除率分别提高15.79%,12.78%,3.4%。单宁酶AfTanA在毕赤酵母中实现了高效表达,并在果汁加工工业中具有良好的应用潜力。