油菜蜂花粉多糖的分离鉴定及免疫活性研究

油菜蜂花粉粉碎后经体积分数95%乙醇脱脂,过滤,滤渣用去离子水60℃提取,再用体积分数95%乙醇沉淀提取液,得到油菜蜂花粉水提醇沉物。利用DEAE-纤维素柱、HW-55F色谱柱及Sephacryl色谱柱、Sepharose色谱柱对油菜蜂花粉水提醇沉物进行分离,得到一个主要的多糖类化合物。经Sephadex G-100色谱柱及紫外光谱分析对该化合物进行纯度鉴定,再通过核磁方法对其进行1H-NMR、13C-NMR和135DEPT-NMR分析,得该化合物结构为HOCH2-[CHOH]4-COOH。给免疫抑制小鼠灌胃花粉多糖,实验结果表明:油菜蜂花粉多糖能显著提高免疫抑制小鼠的胸腺指数(P0.01)、脾脏指数(P0.01)及血清Ig G水平(P0.01)。     

牛大力多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

建立了热水提取、乙醇沉淀、三氟乙酸除蛋白、Sephadex G-75凝胶过滤层析法,从牛大力分离纯化得到一种水溶性多糖,命名为MSP-1。通过红外光谱和离子色谱对其结构和单糖组成进行初步分析,结果表明MSP-1主要由鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和果糖组成。同时对牛大力水提物、醇沉物和粗多糖进行体外抗氧化活性研究,结果表明,三者的抗脂质过氧化作用和对·OH自由基和DPPH·自由基清除能力:VC牛大力水提物牛大力醇沉物牛大力粗多糖,并呈量效关系。     

AB-8大孔吸附树脂纯化蛋黄卵磷脂的工艺研究

采用柱层析法对蛋黄卵磷脂纯化工艺进行研究。结果表明,从3种吸附介质中筛选出AB-8大孔吸附树脂为蛋黄卵磷脂的纯化树脂,并通过静态试验得到其对蛋黄卵磷脂的最大吸附率为92. 2%,最佳静态吸附时间是60 min。经过中压制备色谱分离,采用干法上样,用体积分数95%的乙醇洗脱,可得到蛋黄卵磷脂的纯化倍数为4倍,纯度达到83. 1%,回收率为97. 04%。AB-8大孔吸附树脂使用50个操作周期时,卵磷脂吸附率仍在80%以上。表明AB-8大孔吸附树脂纯化蛋黄卵磷脂具有纯化倍数高、回收率高、时间短、重复性好等优点。     

鸡卵黄抗体(IgY)的制备工艺研究

对鸡卵黄抗体(简称IgY)的制备工艺进行研究。通过低温乙醇沉淀、DEAE葡萄糖凝胶A-50离子交换层析、Tris-HCl缓冲液洗脱及Sephadex G200凝胶过滤等逐步纯化免疫球蛋白。研究卵黄稀释倍数、pH值、乙醇添加量以及盐浓度对纯化效果的影响。分离纯化后所得的提取物经检测IgY纯度可达98%。用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定,效果良好,此方法能很好保持免疫球蛋白的活性。     

长白山林蛙输卵管糖蛋白多抗制备及应用研究

针对长白山林蛙输卵管糖蛋白制备特异性多克隆抗体。将新鲜林蛙输卵管蛋白粗提液经Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G-100凝胶层析柱获得纯化的输卵管糖蛋白组分。以纯化输卵管糖蛋白免疫新西兰大白兔,制备多抗血清,采用辛酸- 饱和硫酸铵法对多抗进行纯化并鉴定。结果表明：纯化后的多抗ELISA 效价为1:64000,纯化多抗具有较高的敏感性和特异性,效价较高。利用制备的多抗对长白山林蛙输卵管分泌细胞进行免疫组织化学定位,为分泌细胞培养产物中输卵管糖蛋白进行检测提供研究条件。     

ACE抑制活性物质分离纯化初步研究

采用超滤、凝胶过滤色谱对醋蛋酶解液进行初步分离纯化,研究结果表明,醋蛋酶解液经超滤浓缩后水解物的IC50降低了18.8%,对凝胶色谱的洗脱条件进行优化,洗脱液为去离子水、样品浓度为30%时分离效果较好,并分别对醋蛋白和醋蛋黄酶解物分离纯化,得到高活性组分C(IC50=0.102 mg/mL)和Ⅱ(IC50=0.096 mg/mL)。     

麻竹竹叶多糖分离纯化及相对分子质量测定

为了获得更多竹资源的信息,对麻竹竹叶中的多糖进行了分离纯化及相对分子质量测定的研究。麻竹竹叶水提,提取物Sevage法去蛋白,95%醇沉,透析,DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-200凝胶柱分离纯化,得到2种多糖,经高效凝胶渗透色谱测定其相对分子质量(Mw)分别为61500u和1780 ku,该实验为麻竹多糖研究打下基础,为竹资源的深度开发提供科学依据。     

绞股蓝皂苷成分的分离与鉴定

目的 提取、分离、鉴定绞股蓝皂苷主要成分。方法 利用硅胶柱色谱及反相半制备柱色谱等分离手段, 分离、纯化绞股蓝皂苷成分, 并用核磁共振波谱(1H-NMR、13C-NMR)、液相色谱离子阱飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)等方法鉴定化合物结构, 并对相关成分的抑癌作用进行了研究。结果 绞股蓝总提物的主要成分经分离得到2种达玛烷类皂苷, 分别为绞股蓝皂苷gypenoside XLVI和gypenoside LVI, 而且它们具有一定的抑制癌细胞增殖作用。结论 利用硅胶柱色谱和反相半制备色谱方法从绞股蓝总提物中分离得到主要的皂苷成分, 为进一步研究其抑癌有效成分提供了参考。     

氧化铝柱层析纯化蛋黄多不饱和脂肪酸卵磷脂及其脂肪酸组成分析

以实验室自制蛋黄卵磷脂(PC)粗品为原料,采用中性氧化铝柱层析分离技术,制备高纯度蛋黄多不饱和脂肪酸卵磷脂(PC≥90%)。分别考察固定相粒径、洗脱液浓度、上样浓度、洗脱液流速、上样量等对氧化铝层析柱纯化蛋黄卵磷脂过程中的影响,同时采用薄层层析定性和高效液相色谱定量跟踪分析,采用气相色谱对所得样品脂肪酸种类及组成进行分析。最佳工艺条件:氧化铝粒径为100～200目、95%乙醇洗脱液、上样浓度1∶4(m/V)、洗脱流速8 mL/min、色谱柱负载量0.0222 g/g氧化铝;在最优条件下,高纯度蛋黄卵磷脂(PC≥90%)得率可达84.43%,一段PC产品的DHA含量高达13.35%。本试验可为工业化制备高纯度多不饱和脂肪酸卵磷脂提供技术参考。     

苍山大蒜低聚糖纯化技术及分子质量测定

文中研究了苍山大蒜中低聚糖(GOS,garlic oligosaccharide)的分离纯化技术,并测定其分子质量。分别研究了聚酰胺柱色谱法对蛋白质的脱除效果;离子交换色谱法,有机溶剂沉淀法和葡聚糖凝胶色谱法对GOS的纯化效果。结果表明:聚酰胺色谱柱对大蒜粗糖中蛋白质有良好的脱除效果,糖回收率为98.9%,蛋白质脱除率为66.8%;DEAE-纤维素(OH~-)色谱柱可将大蒜低聚糖分为3个组分;乙醇分级沉淀可将大蒜低聚糖分为8个组分;Sephadex G-25纯化后的GOS的HPLC测定结果表明,其纯度为99.1%,Mw/Mn=1.31,数均分子质量为1770u。     

Immunoglobulin Separation from Egg Yolk: A Serial Filtration System

A serial filtration system was developed for separating immunoglobulin from egg yolk (IgY). Egg yolk was diluted 10 times with water, adjusted to pH 5.0, frozen, then thawed. The diluted yolk was diafiltered through a hard filter paper at 4-6°C to produce a clear water-soluble fraction (WSF). The WSF was then delipidated by filtering through a hydrophobic membrane filter. Ultrafiltration of delipidated WSF at pH 9.0, at 4-6°C, in the presence of 1.5M NaCl resulted in electrophoretically pure (>90%) IgY with a recovery of about 92%. Advantages of this method are the use of only a few mild chemicals and the potential of developing a continuous process.     

绿色高效连续分离技术制备蛋黄中活性蛋白质和磷脂

为了实现蛋黄功能性成分的充分利用，采用绿色溶剂从新鲜蛋黄中高效连续分离具有生物活性的卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin Y, IgY）、卵黄高磷蛋白（phosvitin, PV）和磷脂（phospholipids, PL）。首先采用水稀释法（稀释倍数为1:10）分离水溶性组分与脂蛋白，通过35%饱和(NH₄)₂SO₄和0.5% NaCl（w/v）对上清液进行盐析并用8% PEG 6000纯化IgY。脂质组分中的PV在pH5.0，90 ℃条件下的NaCl溶液（w/v）中进一步纯化。采用乙醇/乙酸乙酯比例为1:2（v/v）提取蛋黄中全部脂类，进一步采用乙酸乙酯在0 ℃下提纯蛋黄总脂中的PL。经脱盐、冷冻干燥后，IgY、PV和PL的纯度分别为97.38%、78.63%和85.94%。IgY和PV的得率分别为6.15、10.15 mg/mL。蛋黄总脂中PL的含量为35.18%。因其良好的多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸比率（0.70）和相对较低的n-6/n-3比率（5.37），该PL产品可应用于食品加工中。本方法简便、环保并且高效，可从蛋黄中依次分离出高纯度IgY、PV和PL，并为蛋黄的综合利用提供技术支持。     

低温乙醇除脂法纯化鸡卵黄中免疫球蛋白

采用低温乙醇除脂法提取鸡卵黄免疫球蛋白 (immunoglobulinyolk,IgY)。通过低温乙醇沉淀、透析和葡聚糖凝胶等不同方法逐步纯化免疫球蛋白。研究了卵黄稀释倍数、乙醇浓度、NaCl浓度以及离心转速对纯化效果的影响。分离纯化后所得的冷冻干燥制品 ,经SDS PAGE和抑菌试验检测可知 :可溶性蛋白质得率为每毫升蛋黄 1 2 6mg ,可溶性蛋白质含量占总蛋白质量的 97% ,且保持了免疫球蛋白的活性     

卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定

对氯仿法、辛酸法、水稀释法、水-辛酸法分离卵黄免疫球蛋白(IgY)进行了比较,结果表明:水-辛酸法在9倍稀释度、pH5.3、辛酸加量1%条件下,可获得较好效果,进一步用硫酸铵沉淀脱盐后,提取率达93.4%,产率达4.67mg/mL卵黄,纯度达85%。     

鸡卵黄免疫球蛋白的糖基化及其构效关系研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin,IgY）是鸡卵黄中的一种免疫球蛋白。由于其具有原料易得、制备简单、不与类风湿因子以及哺乳动物的补体发生交叉反应等优点,IgY是一种颇具潜力的抗生素替代品,但由于IgY性质不稳定,易受温度、pH值、酶的影响,从而限制了其实际应用。糖链在维持IgY理化性质、抗原特性等功能中扮演着重要角色。因此,对IgY进行糖基化修饰,从而改善其理化性质和抗原特性,不仅能使鸡蛋资源得到充分利用,也为开发蛋黄保健食品、添加剂以及相应的医药产品提供科学依据。本文归纳几种常见的IgY的糖基化方法,并论述IgY糖基化与其结构、理化性质之间的关系。     

Detection and serological relationships of cymbidium mosaic potexvirus isolates

Twenty-two isolates of Cymbidium mosaic virus (CyMV) were isolated from 35 orchid plants suspected of being infected with CyMV. Among the three methods used for detecting CyMV, immunoelectron microscopy (IEM-1) was shown to be the most sensitive method, being able to detect the virus in 71.43% of suspected CyMV-infected plants while the electron microscopic method and the indexing plant method could detect 51.43 and 42.86%, respectively. Out of 12 symptomless plants investigated, 25% were found by IEM-1 method to be infected with the virus. Purified CyMV were flexuous rods having lengths between 470-490 nm. A few end-to-end aggregates were also observed and the 280 260 absorbance ratios were from 0.884 to 0.929. The yield of CyMV was 31.07 to 44.09 mg per kg of Datura leaves. Antibodies against purified CyMV D2 were produced in rabbits and hens. The antibody titers in the yolk and sera of hens indicated that 0.5 mg of virus per immunization efficiently generated an abundant supply of IgY in the yolk, however 1 mg of virus per immunization gave a stronger immune response in both sera and yolk. The average yields of IgY were 6.5 +/- 0.6 and 9.4 +/- 0.9 mg/ml of yolk in the group that received 0.5 mg and the group that received 1.0 mg of the virus, respectively. Positive ELISA reactions were observed in 18 and 20 of 22 CyMV isolates when detected with rabbit IgG and IgY, respectively, demonstrating that those isolates were serologically related and the ELISA reactions were shown to be stronger with IgY than those with rabbit IgG in most isolates. The degree of reaction between the CyMV isolates, O(2) and O(4), and IgY was less than that of the other isolates. The two isolates, D(6) and Cat(6), gave negative reactions to rabbit IgG. The results of ELISA assays showed that the homologous serological reaction was not consistently stronger than the heterologous one. Twelve isolates out of twenty-two gave stronger reactions than the homologous antigen (CyMV D(2)) when IgY was used as the detecting antibody while nine isolates gave stronger reactions when using rabbit IgG. No reactions were observed with other plant viruses and plant proteins from healthy Datura.     

特异性抗肠出血性大肠杆菌O157:H7内毒素鸡卵黄抗体的制备

目的:比较研究LPS和O-SP的免疫原性,制备出特异性抗内毒素(LPS)鸡卵黄免疫球蛋白(eggyolkimmunoglobulin,IgY),用于对E.coliO157:H7的免疫预防及检测。方法:分别用灭活E.coliO157:H7菌体、不同浓度内毒素(LPS)及O-特异性多糖链(O-SP)与不完全弗氏佐剂充分乳化后作抗原免疫临产蛋母鸡,以水稀释法从卵黄中提取抗体,阴离子交换色谱法实现对抗体的纯化,间接ELISA及双向免疫扩散检测抗体产生效价与活性。结果与结论:所制内毒素(LPS)和O-SP均有较好的免疫原性,刺激鸡体后可产生高效价抗体,灭活菌体、600μg/mlLPS、1200μg/mlLPS、2000μg/mlLPS、O-SP抗体产生效价最高可分别达1:32000、1:28000、1:32000、1:12000、1:40000。结合离子交换色谱,用0.185mol/L的离子强度可实现一步洗脱纯化抗体,制备出高纯度、高活性、特异性强的鸡卵黄免疫球蛋白IgY,为大肠杆菌O157:H7的感染防治提供了可靠的保证,在此实验基础之上可进一步探讨应用特异性IgY对大肠杆菌O157:H7的检测。     

抗大肠杆菌O157:H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果.研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7 IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360 d,效价仍维持在1:7200.用水稀释法、硫酸铵分级盐析和Sephadex G-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍.SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带.体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长.     

Anti-E. coli lmmunoglobulin Y Isolated from Egg Yolk of Immunized Chickens as a Potential Food Ingredient

Active immunoglobulin (IgY) was isolated from egg yolk of chickens immunized with formalin-treated E. coli. The antibody activity was measured by enzyme-linked immunosorbent assay using E. coli lipopolysaccharide as an antigen. The anti-E. coli IgY aggregated the bacterial cells and inhibited their growth in vitro. IgY was relatively heat-stable without loss in antibody activity by pasteurization. IgY was stable at pH above 4, but was more susceptible to pepsin than bovine IgG, while appreciable activity was retained by IgY after trypsin- and chymotrypsin-digestion. It appears possible, therefore, to use IgY for the fortification of food products, especially infant formulae.     

水稀释法分离鸡卵黄免疫球蛋白的研究

本研究详细探讨了水稀释法分离鸡卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk:IgY）的主要工艺条件，当蛋黄液的稀释倍数为6、pH5.2时，IgY的提取率和纯度分别是6.73mg IgY/ml蛋黄、14.66%。比较了水稀释法和聚乙二醇法分离IgY的效果。结果表明，水稀释法更适合于大规模分离食品级IgY。