谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticilliummobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥,制得粗酶粉的酶活约为1033U/g.对粗酶研究发现,该酶的最适反应温度为52℃,最适pH为6.0;粗酶的pH稳定范围在4～8,温度稳定范围在20～40℃,离子强度对该酶的活性稍有影响.粗酶经CM 纤维素层析和SephadexG 75凝胶过滤层析后得到较纯的酶,通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度,得到较弱的单一区带.其中,CM 纤维素层析的纯化倍数为4.5,收率质量分数约为78.8%;凝胶过滤层析纯化倍数为1.11,收率质量分数为50%;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092.     

谷氨酰胺转胺酶的用量和腌制时间对蛋白质凝胶特性的影响及其在西式火腿加工中的应用

主要研究谷氨酰胺转胺酶在低温腌制过程中对蛋白质凝胶特性的影响。以西式蒸煮火腿为试验对象,通过测定不同添加水平的谷氨酰胺转胺酶在不同腌制时间段对产品的pH值、TPA质构特性、色差和扫描电子显微镜照片(SEM)的影响,结合感官评定的分析结果,初步探讨西式火腿低温腌制条件下谷氨酰胺转胺酶的应用工艺。     

响应曲面优化超滤分离花生粕活性肽的工艺

以花生粕为原料,采用双酶法酶解制备活性肽,应用不同截留分子量的超滤膜对酶解液进行分离纯化,通过单因素试验探讨原料液pH值、操作压力和时间等因素对花生活性肽超滤分离膜通量的影响,利用响应曲面法对超滤工艺条件进行优化.结果表明,最佳超滤工艺参数:选用截留分子量10kD的超滤膜,原料液pH8.2,压力0.25MPa下,超滤38.9min,膜通量可达到27.68L/(min·m2).超滤滤出液中氨基氮含量提高到4.6倍,氨基氮总量回收率达到90％左右,实现了样品的分离纯化与初步浓缩.说明超滤分离花生粕活性肽具有快速、方便、条件温和、操作简单等优点.     

酶聚合结合超滤技术分离豆腐废水乳清蛋白的工艺研究

为改善豆腐乳清蛋白及低聚糖的回收率、提高膜通量,研究采用转谷氨酰胺酶在豆腐黄浆水自然条件下(温度50℃、pH值6.0)对乳清原液预处理,使蛋白质聚合,方便后续分离工艺选用截留分子量大的超滤膜分离大豆乳清蛋白。数据显示转谷氨酰胺酶Ⅰ可有效催化大豆乳清蛋白聚合,1%的酶添加量50℃反应30min即可催化95%以上的大豆乳清蛋白聚合,酶添加量3‰,聚合时间延长至5h。与对照组相比,乳清采用酶法预处理然后超滤分离,蛋白截留率及膜通量分别提高了2倍和1.3倍,而低聚糖的透过率没有明显影响。试验结果表明,相对于单纯的超滤工艺酶聚合预处理乳清然后超滤的分离效果是显著的。     

乳源酪蛋白糖巨肽超滤分离的工艺优化研究

采用超滤方法分离酶解液中的酪蛋白糖巨肽,通过对料液pH值、操作压力和温度等对膜通量的影响,确定最优工艺参数,以达到最佳超滤通量性能,利用液相色谱法测定纯化后的酪蛋白糖巨肽分子量.试验结果表明:溶液pH9.0、操作压力0.3MPa、温度55℃时膜通量最高,超滤酪蛋白糖巨肽的截留率达到98.23%,产物纯度达到92.62%,酪蛋白糖巨肽的平均分子量为35682u.超滤方法分离酶解液中的酪蛋白糖巨肽是完全可行的.     

赖氨酸与谷氨酰胺在谷氨酰胺转胺酶作用下的交联反应

本文研究了赖氨酸与谷氨酰胺在谷氨酰胺转胺酶催化下的交联反应。探讨了底物比、加酶量、pH值、反应温度和反应时间对聚合度的影响。利用Design-Expert6.0.3软件优化得出交联反应的最佳工艺条件为底物比2.15、加酶量14.39U/g、pH值8.0、温度42℃和反应时间94min。同时,分析了各因素之间的交互效应。     

pH值和初始淀粉质量浓度对发酵生产谷氨酰胺转胺酶的影响

研究了不同的 pH值对谷氨酰胺转胺酶 (MTG)发酵过程中菌体生长和产酶的影响 ,在此基础上探讨了不同初始淀粉质量浓度及中后期碳源流加对发酵过程的影响 .研究结果表明 :pH值对菌体的生长和产酶模式产生明显的影响 ,当发酵过程的 pH值控制在 6 .5时 ,最有利于菌体的生长和酶的合成 ,在此条件下可得到较高的菌体干重 (DCW )和酶活 ;初始淀粉质量浓度以 3g/dL较适宜 ,其DCW和MTG酶活最高 ,DCW为 2 5.1g/L ,酶活水平达 2 .94U /mL ;中后期采用流加碳源的策略使发酵时间比分批发酵最好水平缩短 12h左右 ,酶活提高到 3.0 5U/mL ,各项指标均比分批发酵最好水平有明显的提高 .     

超滤对芸豆蛋白酶解物抗氧化活性的影响

采用超滤法从芸豆蛋白酶解物中初步分离纯化抗氧化活性肽。研究超滤系统主要参数对膜通量的影响,确定最优的超滤条件和膜清洗方法,并对超滤前后酶解物的相对分子质量分布、氨基酸组成及抗氧化活性进行比较。结果表明：采用改性聚醚砜平板超滤膜在室温,酶解液质量分数2.5%,pH6.5 和压力0.25MPa 条件下的分离纯化效果较好;超滤能有效去除酶解液中相对分子质量较大的组分,相对分子质量2000～1000D 及1000D 以下的组分分别从11.38% 和12.64% 提高到32.83% 和 45.91%,其抗氧化活性也得到明显提高。     

培养基组成对轮枝链霉菌合成谷氨酰胺转胺酶的影响

对产谷氨酰胺转胺酶菌种轮枝链霉菌（Streptoverticillium）SK-1的摇瓶条件进行了研究,结果表明当起始pH值为6.5～8.0,氮源、碳源为蛋白胨与甘油,培养时间为110h时,酶活最高可达1.8μmol/(min     

超滤法浓缩鳀蒸煮液的数学模型

采用切向流超滤技术浓缩鳀鱼蒸煮废弃液中蛋白质,在前期对超滤压力、进样流速、样品pH 值、操作温度等操作条件研究的基础上,建立超滤数学模型,通过实验获得拟合参数。结果表明：模型理论值曲线与实验值曲线拟合良好,各曲线的相关系数均在0.99 左右,且膜通量理论值和实验值之间的误差较小,范围在0.44%～10.00% 之间。在工业化设计和实践中,可以根据该数学模型预测超滤条件的变化对超滤过程的影响,根据该模型选择最佳的操作条件,有效地控制浓差极化和膜污染。     

小麦面筋蛋白的性质和转谷氨酰胺酶对其成膜性能的影响

以小麦面筋蛋白为研究对象,探讨小麦面筋蛋白的性质,转谷氨酰胺酶的作用和制备条件对膜性能的影响。结果表明,酶用量为20U/g,反应时间为120min,pH为11,甘油/谷朊粉1:2.5,塑料平板作为成膜介质和乙醇体积分数均为40%～50%时,膜的抗拉强度增加51%,阻水性提高23%,透光率提高了5.48倍。扫描电镜显示膜的超微结构更加细致光滑。说明蛋白质的性质对其成膜性能的影响至关重要,酶处理有助于改善膜的机械性能和透光性,选择合理的制备条件,可得到性能优良的小麦面筋蛋白膜。     

四种生物酶对红豆小麦面团流变性质和面条质构性质的影响

为了改善红豆小麦面条的质构品质，本文将30 g红豆粉和70 g小麦粉混合并分别添加1 U脂肪酶、4 U葡萄糖氧化酶、3 U谷氨酰胺转氨酶、3 U木聚糖酶测定其面团的流变性质和面条的质构性质。结果表明，添加脂肪酶、葡萄糖氧化酶、谷氨酰胺转氨酶均使红豆小麦面条的硬度增加，其增大幅度依次为3588、4183、6190 g，咀嚼度依次增加了1311、1527、2673。添加木聚糖酶降低红豆小麦面条的硬度，降低幅度为97.67 g，咀嚼度减小了134.48。综上，脂肪酶、葡萄糖氧化酶、氨酰胺转氨酶均可提升红豆小麦面条的质构品质。其中，氨酰胺转氨酶应用效果最为显著。     

乳铁蛋白-乳清分离蛋白乳状液微聚集体构建与酶交联对其流变学特性的影响

以乳清分离蛋白（whey protein isolate,WPI）与乳铁蛋白（lactoferrin,LF）乳状液形成微聚集体与转谷氨酰胺酶酶促交联微聚集体,以期提高体系流变特性。通过微射流分别制备WPI和LF乳状液,二者混合后,乳状液微滴之间发生异型聚集效应,通过转谷氨酰胺酶交联结合形成具有特定三维空间网络结构的微聚集体。研究结果表明：WPI与LF乳状液发生异型聚集,最大程度的聚集和最高物理稳定性体系发生在50% LF-50% WPI微滴形成的微聚集体。异型聚集效应改变了乳状液的流变特性,与单一WPI和LF乳状液相比,50% LF-50% WPI微聚集体流变学特性黏度值分别为单一乳状液的3.72?倍和2.2?倍,通过转谷氨酰胺酶交联,乳状液微聚集体的黏度值为原来的11.4?倍。因此,基于异型聚集效应结合酶促交联,可提高食品体系的流变特性,为开发食品脂质替代物提供了一定的理论支持。     

微生物转谷氨酰胺酶催化聚合酪蛋白酸钠研究

研究了不同条件下微生物转谷氨酰胺酶 (MTGase)催化酪蛋白酸钠聚合。结果显示 ,MTGase较易催化α 以及β 酪蛋白 ,而不易催化κ 酪蛋白 ,随着酪蛋白量的不断下降 ,而形成的生物聚合物量不断增多。MTGase催化酪蛋白酸钠聚合的较佳条件如下 :酶量 /酪蛋白酸钠比例为 10～ 2 0U/g ,pH 6 0～ 8 0 ,最适催化温度为 37～ 5 0℃。     

酪蛋白在碎猪肉边角料重组中的应用研究

主要研究了以鲜猪肉分割过程中产生的碎精肉为原料,经腌制后添加转谷氨酰胺酶、酪蛋白进行重组的工艺。以转谷氨酰胺酶添加量、酪蛋白添加量和反应时间为影响因素,以坚实度和内聚性为指标进行重组工艺参数优化,结果表明,在原料肉中添加4g/kg TG和20g/kg酪蛋白,6℃条件下反应12h,重组肉的坚实度和内聚性分别为825g和0.334,研究结果为碎肉的重组和综合利用提供了理论依据。      

谷氨酰胺转氨酶对鸡蛋蛋白热凝固性的影响

本实验研究了Na Cl浓度、p H、酶作用温度、酶作用时间和酶量对谷氨酰胺转氨酶（TGase）处理鸡蛋蛋白后其热凝固所得凝胶的硬度和保水性的影响。并通过SDS-PAGE电泳对酶作用后鸡蛋清样品中蛋白质进行分析,以初步探究TGase对鸡蛋蛋白热凝固性的影响机理。结果表明:TGase处理鸡蛋蛋清液后其凝胶的硬度和保水性都有极显著提高（p<0.01）。当Na Cl浓度为0.4mol/L、p H6.0、温度35℃、酶作用时间3.5h、酶量为10U/g蛋白质时,鸡蛋蛋白凝胶硬度和保水性最大,分别为（134.73±1.79）g和93.83%±0.58%,相比空白组分别提高了58.87%和29.38%。经SDSPAGE电泳分析表明:一定条件下,TGase可促进鸡蛋清中的蛋白质分子交联,从而可改善其热凝固性。      

谷氨酰胺转氨酶交联对牦牛乳曲拉酪蛋白功能性质的影响

以曲拉和荷斯坦牛乳酪蛋白为原料,利用安全、高效的谷氨酰胺转氨酶对其进行交联修饰,研究谷氨酰胺转氨酶对酪蛋白功能性质的影响,测定交联前后样品的持水性、持油性、热稳定性、黏度、起泡性。结果表明,牦牛乳曲拉酪蛋白和荷斯坦牛乳酪蛋白经过谷氨酰胺转氨酶交联后,两种酪蛋白的交联度分别可达到20.04%(p<0.05)和25.15%(p<0.05),曲拉酪蛋白的持水性、热稳定性、黏度和泡沫稳定性显著增加(p<0.05),荷斯坦酪蛋白的黏度和热稳定性显著增加(p<0.05),其余性质均无显著差异。研究结果能为酶法改性酪蛋白的工业化生产提供理论依据。      

转谷氨酰胺酶改性对明胶耐酶解性的影响

以转谷氨酰胺酶改性明胶的耐酶解性为关注点,通过单因素试验和均匀设计试验研究转谷氨酰胺酶浓度、改性pH值、改性温度和改性时间等因素对改性明胶耐酶解性的影响。通过均匀试验得到的最优改性条件为:转谷氨酰胺酶质量浓度为0.20 g/L,改性pH 6.0,改性温度44℃,改性时间35 min。与未改性明胶相比较,改性明胶的耐酶解能力提高了14.44%。本研究结果表明转谷氨酰胺酶改性可以显著提高明胶的耐酶解能力。