啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的提取及鉴定

主要研究了泡沫活性蛋白质中最重要的Z4蛋白的分离提纯,并利用蛋白免疫印记法(Western Blot)以及质谱(Mass Spectrometry)鉴定Z4蛋白质。此外,还探讨了Z4蛋白质的含量在酿造过程中的变化。实验结果表明,Z4蛋白质的pI值为5.5~6.0,分子质量为43ku,其抗体鉴定Z4有很高的相关性。在酿造过程中,泡沫活性蛋白质发生了很大的变化。     

试论啤酒泡持性与蛋白质隆丁区分的关系

本文介绍啤酒泡持性与蛋白质隆丁区分的的关系，并通过对某些啤酒泡持性能与泡沫蛋白质隆丁区分之间关系的研究，对提高啤酒泡持性能提出一些看法，愿以此抛砖引玉。     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备(一)

目的研制啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的准确高效测定。方法Z4蛋白质与弗氏佐剂乳化后免疫BALB／C小鼠,采用间接ELISA法筛选阳性克隆株。按照传统杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果成功地获得两株Z4蛋白质的单克隆抗体,为其啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质基础研究及其鉴定奠定了基础。     

啤酒中异-α酸和蛋白质含量对啤酒泡持性的影响

研究以11°P不同品牌的啤酒为研究对象,分别利用国标法、反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)、二喹啉甲酸法(BCA法)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(SDS-PAGE技术)检测了啤酒泡持性、异-α酸含量、泡沫蛋白质的浓度及蛋白质Z与脂转移蛋白(LTP)含量.结果显示,异-α酸中的异合葎草酮及总蛋白质含量与泡持性关系较密切,但是单一蛋白质Z或LTP含量与泡持性不太密切.     

人工法和仪器法测定啤酒泡持性的比较

通过对人工法和仪器法测定啤酒泡持性结果进行对比,表明人工法误差明显大于仪器法。     

啤酒泡沫蛋白质的初步分离及测定

研究了啤酒泡沫蛋白质的简便测定方法，发现Bradford法用于啤酒泡沫蛋白质的测定具有一定的可行性，测定结果与泡持值有着良好的线性关系。同时对啤酒泡沫蛋白质进行了凝胶色谱分离（Sephdex G-50)，并得到了主要的三种泡沫高分子蛋白质。     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备鉴定(二)

目的：实验在前期研究的基础上,研究了啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,对单抗特性进行鉴定,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的鉴定与定量。方法：制备啤酒泡沫活性蛋白Z4蛋白的单克隆抗体,并测定单克隆抗体效价、单抗亚类鉴定及确定单抗识别位点,最后通用Western Blot免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性。结果：所得两株Z4蛋白质的单克隆抗体效价可达10^6以上,其均属于IgG1亚类,但具有不同的抗原识别表位,并且对泡沫活性蛋白均具有较好的反应特异性,与浑浊蛋白、LTP1和Z7无交叉反应。为快速鉴定啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质研究提供了基础。     

啤酒泡沫泡持性测定的研究进展

通过对国内外现行泡持测定法的介绍，优缺点分析和比较；说明了泡沫测定对泡沫的质量评判，工艺改进等的重要意义，并为泡持的精确测定提供极具价值的参考。     

啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化研究

泡沫蛋白质是啤酒泡沫的骨架,其含量和性质很大程度上决定了啤酒泡沫的质量.蛋白质Z和脂转移蛋白(LTP)是啤酒泡沫蛋白质中的关键组分,实验究考察了啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化过程.结果显示:在糖化过程中,分子量为53ku及20～40ku的蛋白质被分解,蛋白质Z及LTP的含量没有太大变化;麦汁煮沸过程中蛋白质含量逐渐减少,蛋白质Z、LTP1和LTP2分别减少了11％、32％及26％;主酵过程中,蛋白质Z、LTP1和LTP2的降幅较大,分别为12％、59％和31％;后酵过程中,蛋白质Z和LTP1的含量基本不变,LTP2的含量逐渐降低,到后酵结束,LTP2的降低幅度达22％.     

啤酒中蛋白质的稳定状态

介绍了啤酒中蛋白质沉淀形成的机理,蛋白质稳定技巧,硅胶的种类、特性及其在啤酒稳定方面的应用。     

高分子蛋白和蛋白酶A对纯生啤酒泡沫稳定性的影响

利用考马斯亮蓝法、荧光底物法分别跟踪检测啤酒酿造和贮存过程中高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化,研究影响纯生啤酒泡沫稳定性的关键因素。结果表明,各发酵罐因发酵阶段工艺参数的不同,导致高分子蛋白含量及蛋白酶A活力变化趋势存在明显差异。发酵阶段高分子蛋白含量缓慢降低,由入罐麦汁时的350~407.6 mg/L降到成品酒时的180.1~243.1 mg/L;蛋白酶A活力在回收酵母前增加,后达到最高值,其范围是18.27~30.13 U/m L,回收酵母后蛋白酶A活力下降,最终在成品酒中的蛋白酶A活力检测值为发酵过程中最高值的19.06%~36.4%。通过对成品纯生啤酒中高分子蛋白含量、蛋白酶A活力的跟踪,分析各自对泡持性的作用发现,高分子蛋白含量与泡持性(r=0.794,P0.01)显著正相关;蛋白酶A活力与泡持性及高分子蛋白含量之间没有显著相关性。     

纯生啤酒泡沫稳定性的研究

纯生啤酒的泡持随着货架时间的延长会逐渐衰减 ,严重影响啤酒的外观质量。大量的文献资料证实 ,纯生啤酒泡持性的下降是由酒液中存在的蛋白酶A造成的。通过对成品酒泡持性的跟踪测定 ,重点讨论了发酵及啤酒过滤过程控制对泡持衰减趋势的影响。     

啤酒和啤酒泡沫中蛋白质组成的差异性比较

利用SDS-PAGE、双向电泳仪、氨基酸分析仪对啤酒和啤酒泡沫中蛋白进行了系统的检测,并探讨了泡沫活性蛋白的组成。结果表明：啤酒和啤酒泡沫蛋白的分子量分布相似,：均由43kD和7-17kD的蛋白组成;在分子量和等电点的分布上啤酒泡沫蛋白的分布要少于啤酒蛋白的分布;双向电泳未能成功检测出单向电泳可测出的在7～10kD间的丰富蛋白分布,但检测到了多个12kD和17kD蛋白;并得出除蛋白质Z、脂转移蛋白外。醇溶蛋白残片也应是泡沫蛋白的一个重要组成。     

纯生啤酒质量影响因素初探

针对纯生啤酒的质量稳定性进行了相关的研究。研究发现 ,纯生啤酒的货架保鲜期比相应熟啤酒延长了 10 %～ 2 0 %左右 ;纯生啤酒经常会遇到泡持性下降的问题 ,运用特殊合成的底物从泡持性较差的啤酒中检测出很高的蛋白酶A活性 ;啤酒灌装后的蔗糖转化酶活性在保存 3个月后 ,经检测能保存 80 %以上的酶活 ,5个月后检测仍能保存 6 0 %以上的酶活 ;外加葡萄糖氧化酶会造成啤酒中葡萄糖含量的异常增加 ,采用液相色谱分析法对加入葡萄糖氧化酶啤酒的蔗糖转化酶活性进行了分析 ;温瓶温度升高对蛋白酶A和蔗糖转化酶活性能产生相似的作用 ,蔗糖转化酶活性对温度升高的抵抗能力稍高于蛋白酶A ,在蛋白酶A失活的临界点 ,蔗糖转化酶仍能保持约30 %的活力     

The Impact of Malt Derived Proteins on Beer Foam Quality. Part I. The Effect of Germination and Kilning on the Level of Protein Z4, Protein Z7 and LTP1

The effect of barley germination and kilning on three putative beer foam-positive proteins was investigated by immunoblotting and ELISA procedures. These procedures involved the use of specific antibodies raised to purified lipid transfer protein 1 (LTP1)and the two protein Z forms, Z4 (BSZ4) and Z7 (BSZ7). The free fraction of BSZ4 and BSZ7, and all LTP1 were extracted by aqueous salt-solution from barley and malt. The addition of reducing agent allowed the extraction of bound BSZ4 and BSZ7. A previously undescribed fraction of BSZ4 and BSZ7, refered to as latent, was extracted with SDS and reducing agent. The barley combined fraction (free + bound fractions) was surveyed in 93 barley varieties to show that BSZ4 was the dominant isoform, on average constituting ?80 % of all protein Z. Considerable variation was observed between varieties in the level of LTP1 (502–1144 μg/g) and the combined fractions of BSZ4 (18–2136 μg/g) and BSZ7 (38–771 μg/g). The free fraction is expected to be more available for extraction into wort during mashing than the bound or latent fractions. The level of LTP1 did not change substantially during germination, but a significant proportion of the latent and/or bound protein Z fractions was converted into the free fraction. In the seven varieties studied the free fraction of BSZ4 and BSZ7 increased 149–300% and 49–141%, respectively. Proteolytic cleavage in the reactive site loop converts protein Z to heat- and protease-stable forms that survive the brewing process. During germination most of the free BSZ4 and 30–70% BSZ7 was converted to the cleaved form. Kilning was found to reduce the amount of protein Z and LTP1 that could be extracted by 10–30% and 7–37%, respectively, which is likely to be counter productive for foam quality. These results suggest that barley variety selection and optimisation of germination and kilning protocols during malting may be opportunities for improvement of beer foam quality.     

奶啤稳定性的研究

以牛奶、麦芽和酒花为主要原料经过二次生物发酵研制出具有奶香和啤酒风味的奶啤饮料.从乳化剂、稳定剂、盐类、均质条件等方面分析探讨了影响奶啤稳定性的各因素,得出了使奶啤保持稳定性的最佳工艺条件.     

The Impact of Malt Derived Proteins on Beer Foam Quality. Part II: The Influence of Malt Foam-positive Proteins and Non-starch Polysaccharides on Beer Foam Quality

Pilot (50 litre) and small scale (700 mL) brewing trials conducted using, similar brewing protocols with 25 different malts, indicated that differences in malt quality influenced foam stability (Rudin head retention value) by up to 24%. In addition to conventional measures of malt quality, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) were used to measure the level of the putative foam-positive proteins, BSZ4 (protein Z4), BSZ7 (protein Z7), BSZ7b and lipid transfer protein 1 (LTP1). Regression analysis performed on the combined pilot and small scale data sets identified that malt BSZ4, wort β-glucan and wort viscosity, and beer protein, β-glucan and arabinoxylan were positively correlated with foam stability, while malt Kolbach index (KI), and beer FAN were negatively correlated with foam stability. Potentially foam-positive proteins such as BSZ7 and LTP1 were not correlated with foam stability. The negative correlation of BSZ4 level with KI suggested an additional role for BSZ4 in influencing protein modification. Step-wise multiple regression indicated that up to 82% of the variation in foam stability could be predicted from the malt and beer characteristics measured, demonstrating that there are a number of inter related malt derived factors that influence beer foam stability.     

蛋白酶抑制剂对纯生啤酒泡沫稳定性的影响

在纯生啤酒中加入灵芝真菌蛋白酶A抑制剂，可明显提高纯生啤酒的泡沫稳定性，对其感官指标、理化指标等都不会产生影响。（孙悟）