产胆盐水解酶BSH乳酸菌的鉴定及发酵条件优化

目的:鉴定降胆固醇和产胆盐水解酶的乳酸菌菌株,并通过优化发酵条件提高胆盐水解酶酶活.方法:对初步筛选的乳酸菌菌株Lp-1进行体外降胆固醇试验,采用PCR方法鉴定菌株中的胆盐水解酶基因,用16SrRNA方法鉴定该菌株,并对该菌株发酵培养基和发酵条件进行优化.结果:乳酸菌菌株Lp-1具有体外降胆固醇功能,基因组中含有胆盐水解酶基因,其脱氧核糖核苷酸序列与已发表的胆盐水解酶基因同源性为98.9%;该菌株与已发表的植物乳杆菌16S rRNA同源性为99%;通过发酵条件优化,以葡萄糖为碳源,蛋白胨、酵母粉为氮源,碳氮比1∶1,初始pH 6.5,接种量7%,在37 ℃下培养14 h,胆盐水解酶酶活最高达到11.2 U/mL.结论:鉴定到1株植物乳杆菌Lp-1(Lactobacillius plantarum Lp-1),该菌含有胆盐水解酶基因,并产胆盐水解酶;发酵条件优化后该菌产胆盐水解酶活力比优化前提高6倍.     

发酵酸菜中嗜热链球菌的分离鉴定与特性研究

从东北自然发酵酸菜中分离筛选得到一株乳酸菌,经形态学鉴定、显色培养基初步鉴定和API鉴定为嗜热链球菌,命名为ST-111,对其进行生理特性及耐酸、耐盐试验的初步研究,该嗜热链球菌在pH 4以下几乎不生长,最适生长pH为7~10,最适盐浓度为0%~3%;在MRS液体培养基中菌株生长较快,2 h即达到对数期,12 h达到稳定期时OD600可以达到4.5左右;该菌株产酸能力较强,培养24 h后发酵液pH可降到3.6以下;耐胆盐试验和胆固醇移除率试验结果表明,该菌株具有较强的胆盐耐受力和较高的胆固醇移除率,在0.1%胆盐条件下生长良好,在0.1%的胆盐条件下的胆固醇移除率为42.3%。     

鲈鱼肠道来源降胆固醇乳酸菌分离筛选及其益生功能评价

该研究探讨了从健康鲈鱼肠道中筛选分离出高效降胆固醇的乳酸菌,通过菌株鉴定、耐酸、耐胆盐、疏水性、自凝聚力和代谢物抑菌性评价的测定,评价并考察其体外益生作用。采用胆盐水解酶测定和体外降胆固醇试验,筛选分离得到一株高效降胆固醇的菌株ZG2YLu05,其胆盐水解酶（BSH）粗酶活和胆固醇去除率分别为0.82 µmol/(h?mL)和50.09%;在pH 3.0的培养条件下培养8 h,菌株的耐酸存活率为83.33%;在胆盐浓度0.3%的培养条件下培养8 h,菌株的耐胆盐存活率高达89.31%;在二甲苯中菌株的疏水性为46.82%,静置24 h后菌株的自凝聚力为92.93%,说明菌株具有良好的黏附潜力;菌株代谢物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌都有明显的抑制作用;经形态学观察和16S rDNA鉴定为戊糖乳杆菌（Lactiplantibacillus pentosus）。该菌株能够作为潜在降胆固醇乳酸菌用于开发辅助降脂益生菌制剂的生产。     

抑制阴道加德纳菌乳酸菌的筛选及安全性研究

为筛选具有较强抑制阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)特性的乳酸菌菌株，该研究通过双层琼脂扩散法测定菌株抑制阴道加德纳菌的能力，从筛菌样品中筛选能力较强的乳酸菌，通过溶血性试验、动物致病性试验评价其安全性，并进行了耐酸耐胆盐能力试验。结果表明，筛选菌株中罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001抑菌能力最强，发酵上清液抑菌圈直径为18.23 mm，发酵上清液经过3倍浓缩后抑菌圈直径可达21.58 mm。菌株HCS02-001无溶血性，无致病性，在pH 2.0条件下培养17 h活菌数对数值为7.97，存活率为85.52%，在1.5%胆盐条件下培养17 h活菌数对数值为8.48，存活率为90.99%。结果显示罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001具有较强的抑制阴道加德纳菌特性，初步判定其具备安全性。     

发酵肉制品中潜在改善高脂血症乳酸菌的筛选及鉴定

采用溶钙圈法从传统发酵肉制品中分离乳酸菌菌株，通过清除胆固醇、甘油三酯能力及胆盐水解酶活性测定筛选潜在改善高脂血症乳酸菌菌株。基于此，结合体外益生特性研究，利用主成分分析（PCA）筛选综合益生活性较好的菌株，并通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定，最后评价该菌株对HepG2细胞高脂模型中胆固醇和甘油三酯含量的影响。结果表明，从传统发酵肉制品中共分离得到125株乳酸菌，最终筛选得到1株具有潜在改善高脂血症能力且综合益生活性最好的菌株LC4，被鉴定为戊糖片球菌（Pediococcus pentosus），其体外胆固醇及甘油三酯清除率分别为74.73%和91.65%，具有胆盐水解酶活性；模拟胃液及肠液的耐受力分别为87.57%和72.70%，在0.3%胆盐条件下处理24 h活菌数为9.79 lg CFU/m L，在pH 2.5酸条件下处理4 h，活菌数为7.67 lg CFU/m L;24 h后的自聚集能力为52.77%；对二甲苯、乙酸乙酯及氯仿的疏水性分别为78.13%、34.07%和10.30%。HepG2细胞高脂模型经菌株LC4处理后，降低了胆固醇和甘油三酯含量。     

自然发酵肉制品中乳酸菌的体外降胆固醇特性

为筛选出具有高效降胆固醇作用的乳酸菌,以自然发酵肉制品中分离出的13株乳酸菌为实验对象,采用邻苯二甲醛法对其体外降胆固醇能力进行测定,并对其中2株菌（M12、M23）的作用机理进行初步探讨。结果表明,2株菌均通过同化吸收和共沉淀作用协同降低培养基中的胆固醇;添加0.3 g/100 mL胆盐可极显著增加菌体对胆固醇的去除作用（P＜0.01）,去除率分别为56.05%和58.49%;添加胆固醇和胆盐均可显著提高菌株经超声波处理后的存活率（P＜0.05）,存活率分别为32.09%和37.93%;2株菌的热灭活菌体和休眠菌体也具有一定的胆固醇去除能力,且休眠菌体的去除率高于热灭活菌体。经16S rRNA序列分析,菌株M12为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）,菌株M23为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）。     

一株产γ-氨基丁酸屎肠球菌的筛选和发酵条件优化及其益生特性分析

为拓宽产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)微生物资源,以四川泡菜为分离源从中筛选高产GABA乳酸菌菌株,并对高产乳酸菌菌株进行生理生化、分子生物学鉴定,高产GABA发酵条件优化及其益生特性分析。结果表明:采用高效液相色谱对菌株产GABA能力分析发现菌株AB157的GABA产量最高为1.08 g/L。生理生化和16S rRNA鉴定菌株AB157为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。通过单因素实验和响应面优化,确定屎肠球菌AB157的最佳培养条件为L-谷氨酸钠底物浓度5.2 g/L、发酵温度31 ℃、初始pH7、发酵时间70 h,在此条件下,屎肠球菌AB157的GABA产量达到1.60 g/L。屎肠球菌AB157的益生分析表明,其在pH2.0和3 g/L的胆盐环境中的存活率分别为39%和59%,胆固醇的脱除量为18.09 μg/mL,说明该菌株具有良好的耐酸和耐胆盐特性以及较强的降胆固醇能力,可作为潜在功能性乳酸菌资源进行后续研究开发。     

副干酪乳杆菌HCS17-040的筛选鉴定及其益生特性

目的：获得具有降甘油三酯功能的乳酸菌菌株。方法：从母乳及顺产的健康婴儿粪便中筛选分离乳酸菌菌株,采用单试剂法乳酸菌（GPO-PAP法）测定其甘油三酯去除能力。从中选择甘油三酯去除能力强的菌株进行形态学鉴定、生理生化及16S rDNA鉴定,并测定其耐受酸、胆盐和胃肠液的能力。结果：筛选分离出一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）,命名为HCS17-040（CGMCC No 19747）,其甘油三酯下降率达（42.80±1.79）%;该株菌在pH 3.0和pH 2.0的环境中培养17 h后存活率分别为89.39%和87.18%;在3 g/L和5 g/L的胆盐浓度环境中培养17 h后存活率分别为94.75%,92.97%;在人工胃液中作用3 h,存活率为93.93%;在人工肠液中作用4 h,存活率高达99.06%。结论：副干酪乳杆菌HCS17-040对甘油三酯具有一定的去除能力,且具有良好的耐酸、胆盐及人工胃肠液的能力。     

乳酸菌MR25的筛选、鉴定及降胆固醇益生特性

通过气相色谱法,从萝卜干中共分离到31株具有清除培养基中胆固醇能力的乳酸菌,其中乳酸菌MR25的胆固醇清除率最高(42.48％).通过形态观察、生理生化试验、糖发酵试验等,鉴定MR25为米酒乳杆菌.乳酸菌MR25具有酸耐受性、胆盐耐受性和一定的胆固醇降低能力.在pH 2.0、培养2h条件下菌株浓度仍能达到106 cfu/mL.加胆盐(0.3％～0.4％)对菌株生长量(OD值)的影响很小.热杀死和休眠的细胞能去除很少的胆固醇,分别是3.26 mg/mL和8.42 mg/mL,而生长的细胞去除的胆固醇达到44.06 mg/mL.胆固醇去除与菌体的生长有一定的相关性.乳酸菌MR25去除胆固醇的机理是菌体对胆固醇的吸附作用,以及菌体在生长过程中对胆固醇的吸收利用.     

具有降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌的筛选及其益生作用

为获得具有较强降胆固醇功能的益生菌株,试验从内蒙古呼伦贝尔满洲里通达牧场制作的奶豆腐中筛选分离菌株,并采用邻苯二甲醛法测定菌株降胆固醇的能力,从中选出降胆固醇能力强的菌株,通过形态学鉴定、生理生化及16S rDNA对菌株进行鉴定,并测定了其耐受酸、胆盐和胃肠液的能力。结果筛选分离出5株具有降胆固醇功能的菌株,其中一株菌对胆固醇降解能力最强,降解率达50.60%,经鉴定此株菌为罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,将其命名为HCS02-001（CGMCC No. 19746）;经对酸、胆盐及胃肠液的耐受试验,该株菌在pH 3.0和pH 2.0的环境中培养17 h后存活率分别为86.80%和85.52%;在0.30%、0.50%的胆盐浓度环境中培养17 h后存活率分别为97.42%和95.17%;在人工胃液中作用3 h,存活率为96.74%;在人工肠液中作用4 h,存活率高达98.41%。该研究筛选出了一株具有较好降胆固醇功能的罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）,其具有较强的耐受酸、胆盐环境和胃肠液的能力,对关于降胆固醇功能方面的产品研究开发具有重要意义。     

益生菌的筛选及其发酵特性研究

为获得性能优良的益生菌生产菌株,通过乳酸菌的溶钙圈筛选,耐酸、耐胆盐检测及体外抗氧化和分解胆固醇能力测试进行了菌株的选育;对筛选菌株进行16S rRNA基因测序及生理生化特性鉴定;采用正交试验优化培养基配方和发酵条件。结果表明,从牛奶储罐中分离、筛选到一株各项性能优良的菌株,编号为SX68,经鉴定其为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。优化培养基配方为：蛋白胨10 g/L,牛肉膏10 g/L,酵母提取物5 g/L,磷酸氢二钾3 g/L,柠檬酸氢二胺4 g/L,乙酸钠5 g/L,葡萄糖30 g/L,吐温-80 1 mL/L,MgSO4·7H2O 0.58 g/L,MnSO4·4H2O 0.25 g/L,pH 6.4;最佳发酵条件为：起始pH 6.5,发酵温度35 ℃,接种量20 mL/L,溶氧量＜100 mL/L,搅拌转速50 r/min,罐压0.03 MPa。在此优化条件下,菌株SX68最高发酵生物量（OD600 nm值）为15.68,活菌数为9.6×1012 CFU/mL,可为其用于益生菌生产奠定基础。     

降胆固醇乳酸菌的筛选及其益生元干预生长作用分析

本研究从传统自然发酵的酵素饮品中分离筛选出一株高效降胆固醇菌株,该菌株具有较好的胆盐耐受性和耐酸能力。在pH3的酸性环境下,耐酸率为71.53%,该菌株能够长时间耐受胆盐环境,培养16h的胆盐耐受率为42.09%。以二甲苯为吸附剂,疏水率为35.91%,有较好的黏附特性;益生元不仅能够促进菌株生长,而且可显著提高降胆固醇能力。4种益生元中乳果糖促进生物量增加幅度最大,培养至16 h时生物量达到最高。乳果糖对菌株产酸性能影响最显著,pH值可降至3.56,胆固醇去除率达41.10%。该菌株对菊粉的利用率低,说明菌株对不同益生元具有选择性代谢。菌株经形态学观察和16S rDNA鉴定为副干酪乳杆菌,并命名为Lactobacillus paracasei S0940。本研究为进一步研究体内降脂能力以及开发功能性乳酸菌食品提供理论依据。     

宁夏自然发酵泡菜中乳酸菌的分离鉴定及其在枸杞汁发酵中的应用

以宁夏银川市采集的家庭自制的3份发酵泡菜制品为材料,从中筛选产酸量较高的乳酸菌,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学方法对其进行鉴定,并对其耐酸、耐胆盐及发酵性能进行测定,筛选性能优良的乳酸菌,最后将其应用到发酵枸杞汁中。结果表明,筛选得到5株产酸量较高的乳酸菌,经鉴定分别为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum NXU_19010）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus NXU_19023）、戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus NXU_19006）、瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus NXU_19022）和副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei NXU_19004）。其中菌株瑞士乳杆菌NXU_19022的耐酸、耐胆盐及生长性能较好,在6 h左右优先进入生长对数期,其在pH为2时的存活率约为92%,在牛胆盐含量百分比为0.9%时的存活率约为18%。NXU_19022发酵后使枸杞汁中多糖含量提高约29%,多酚含量约为原来的91%,感官评分最高。能显著提高自由基清除率和改善发酵枸杞汁的风味品质。采用非靶向代谢组学对NXU_19022发酵前后枸杞汁的挥发性成分进行分析,其中显著性差异代谢产物有20种,脂类物质含量上调,呈香味及甜味物质含量上调。表明该菌株具有良好的发酵特性,可进一步开发利用作为发酵产品的生产菌株。     

植物乳杆菌MA2的生物学特性研究

对Kefir源植物乳杆菌MA2的生物学特性进行了研究,结果显示,MA2菌株在MRS培养基初始pH为6.60,接种量为4%,37℃厌氧条件下培养18 h,活菌数可达到1.2×109cfu/mL。乙酸和乳酸为发酵液中的优势有机酸,且厌氧条件下发酵液中的有机酸的含量较高,厌氧发酵液中检测出的6种脂肪酸中C18∶1的含量最高。降胆固醇试验证明,低聚葡萄糖(GOS)可以促进MA2的胆固醇移除能力,移除率可达到70%;菌体细胞脂肪酸的测定结果显示MA2菌株降胆固醇的机理主要是吸附、吸收同化机理。MA2菌株的牛乳发酵试验结果显示其具有良好的产黏特性,在乳清培养基中胞外多糖产量可达380 mg/L。结合其良好的耐酸、耐胆盐特性,植物乳杆菌MA2具有良好的益生菌应用潜力。     

一株酸面团源乳酸菌的益生特性及其对刺五加叶总皂苷的影响

为了评价前期分离的一株酸面团源菌株HUCM105的益生特性及其对刺五加叶总皂苷含量的影响,通过形态学特征及16S rDNA基因序列分析鉴定种属,分别于pH2.0、pH2.5和pH3.0的酸性环境及0.5%胆汁环境培养3 h,并监测活菌数变化,于富含胆固醇的培养基中培养24 h并监测胆固醇含量的变化,以评价菌株HUCM105的益生特性,随后以刺五加叶水提液为唯一基质,经菌株HUCM105静置或振荡培养72 h,同时监测活菌数和刺五加叶总皂苷含量的变化。结果表明,菌株HUCM105被鉴定为短乳杆菌,其对酸和胆汁均展现出了良好的耐受性,在pH高于2.5和0.5%胆汁环境下培养3 h活菌数均无明显变化。菌株HUCM105体外培养24 h,可去除培养基中26.4%的胆固醇。菌株HUCM105静置或振荡培养于刺五加叶水提液中24 h时活菌数达到最高值,约为5×108 CFU/mL水平。菌株HUCM105静置培养对刺五加叶总皂苷含量无显著影响,而振荡培养可明显提高总皂苷水平,振荡培养48 h时刺五加叶总皂苷含量最高,达42.6 μg/mL,较未接种菌株提高了79.0%。总之,短乳杆菌HUCM105展现出了良好的酸和胆汁耐受性及降胆固醇的益生特性,在刺五加叶水提液中生长良好,并可提高其总皂苷水平,在开发刺五加叶益生菌发酵产品方面具有潜在的应用价值。     

一株高产丁酸的丁酸梭菌分离鉴定及其生物学性质研究

从健康成人新鲜粪便中筛选得到一株高产丁酸的丁酸梭菌C1-6,分析其生长特性和部分生物学性质。从形态学特征、生理生化试验、16S rDNA基因序列同源性以及多位点序列分型(Multi-site sequence typing,MLST)等方面对菌株进行鉴定;分析了该菌的部分生物学性质,包括发酵液中丁酸含量,对酸、胆盐、模拟消化道的耐受性以及抗生素抗性。结果表明,丁酸梭菌C1-6的24 h发酵液中丁酸含量达到2.1 g/L左右;对酸、胆盐以及模拟消化道环境具有较强的耐受性,其在pH2和pH3的酸性条件下孵育3 h后的存活率分别为72.5%和91.8%,对胆盐的耐受性随胆盐浓度的提高略有上升,当胆盐浓度为1%时,其存活率为104.63%,经过模拟消化道环境后其存活率仍高达93%以上;除对氯霉素、卡那霉素等氨基糖苷类抗生素和青霉素具有抗性外,对氨苄西林、四环素、万古霉素、头孢呋辛均比较敏感,有必要进一步评价其耐药基因的转移风险。由以上结果发现,丁酸梭菌C1-6有一定的潜在应用价值。     

耐酸耐胆盐益生菌的筛选及其益生特性研究

该研究采用浓香型白酒原酒为主要原料研发低度艾草酒。浓香型白酒原酒在80 ℃、-65 kPa条件下减压蒸馏，去除蒸馏釜中残液并收集中段馏出液。与原酒相比，中段馏出液中的乙醛、甲醇分别降低了32%、77%，酯类物质总含量提升89%，酒精度从67%vol提高至85%vol，以此为基酒浸渍艾草新鲜茎叶，并对浸渍条件进行优化。结果表明低度艾草酒的生产工艺为料液比5∶100（g∶mL），在20～25 ℃条件下浸渍新鲜艾草茎叶5 d，无菌纱布过滤，添加纯净水降度至30%vol。经检测，该低度艾草酒含有相对含量为0.33%的石竹烯、0.40%的桉叶油醇、0.09%的天然樟脑、0.06%的4-萜烯醇、0.06%的2-茨醇、0.02%的马鞭草醚等活性成分，且常温储存3个月外观及风味仍保持稳定。该研究结果为以浓香型白酒为基酒生产特色露酒提供了新的途径。     

西藏牦牛粪和乳源中益生菌的筛选与鉴定

采用钙透明圈法从西藏地区牦牛粪和乳源中分离、筛选益生菌，通过形态观察及分子生物学技术进行菌种鉴定，并对其生长特性、产酸能力、耐胆盐、酸、人工胃液能力及抑制大肠杆菌能力进行分析。结果表明，共分离、筛选出25株乳酸菌，经鉴定7株为益生菌，分别为1株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），2株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）和4株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracaseium）。其中植物乳杆菌B2具有良好的生长优势、产酸能力（发酵终pH值在4左右）、耐酸（pH值为4）、耐胆盐（0.6%）、耐人工胃液能力（存活率为57.4%），且抑制大肠杆菌效果较好（抑菌圈直径为22.0 mm）。     

降胆固醇和耐酸耐胆盐益生菌的筛选研究

本研究通过含有胆固醇胶束的MRS-胆固醇液体培养基从五株益生菌中筛选出降胆固醇能力较强的益生菌,接着对筛选出的益生菌进行耐酸、耐胆盐试验。结果表明,五株益生菌都有降胆固醇的功能,其中干酪乳杆菌LCA-1、鼠李糖乳杆菌LR-D和植物乳杆菌LP-C的胆固醇去除率较高,分别为25.26%、22.18%和20.03%;LR-D能够短时耐受低p H值环境,在p H 2.5的发酵液中培养2h的存活率能够达到14.39%,但是耐胆盐能力较差;LP-C能够长时间耐受低p H值的环境,具有较强的胆盐耐受能力,在高胆盐环境(0.5%)中培养2 h的存活率高达133.75%,培养24 h的活菌数仍保持在1.13×105 cfu/m L,此时其余两株菌的活菌未检出,说明LP-C能够耐受高胆盐环境。植物乳杆菌LP-C具有较高的胆固醇去除率,能够耐受低p H值和高胆盐环境。因此,可用于进一步研究与开发。