精索静脉曲张不育者精子的超薄切片和冷冻蚀刻的电镜观察

精索静脉曲张影响精子发生和精液质量,导致男性不育。为探讨不育的原因,本实验采用超薄切片和冷冻蚀刻复型膜的电镜观察。材料和方法:两例青年男性不育者,年龄为29岁,31岁,婚后三年不育,有双侧中度精索静脉曲张。超薄切片制备:2.5％二醛,1％锇酸双固定,酒精脱水,环氧树脂812包埋,超薄切片厚度500埃左右,铀、铅双染色。冷冻蚀刻复型膜制备:新鲜精液固定于2.5％戊二醛,经30％甘油生理盐水处理12小时,BAF—400D高真空冷冻蚀刻仪制成复型膜,电镜观察。观察结果:超薄切片:精索静脉曲张患者精液内可见头帽期和顶体期精子细胞,且形态异常,如顶体扩张,细胞核染色质松散,核内出现大空腔。发育成熟的精子头畸形,中段线粒体排列紊乱等。冷冻蚀刻复型膜:患者     

家兔肺巨噬细胞的“洗肺”取材及其超微结构观察

许多实验研究证明,肺巨噬细胞不仅有很强的吞噬功能,而且参与某些免疫反应,因此被视为肺脏防御体系的重要组成部分,并引起人们的广泛重视。本文以家兔为实验材料,应用“洗肺”技术采取肺巨噬细胞,进行了超薄切片与冷冻蚀刻电镜观察,,以探讨巨噬细胞亚显微构造及其细胞膜结构与该细胞功能之间的关系。 (一)材料与方法:本实验用成年健康家兔,经放血处死后,立即切开气管并插入特制气管插管,注入适量(约50毫升)温生理盐水缓冲液,且随即吸出,如此反复灌洗6次。再将全部洗出液经三次离心沉淀(500克,8分钟/次),制得约5×10~6/毫升的肺巨噬细胞混悬液。接着,将离心后的细胞经4％戊二醛予固定,618树脂包埋,按常规方法制备超薄切片;同时,选用FHZ—1型冷冻蚀刻装置,制取冷冻蚀刻复型膜。最后送H—500透射     

肺巨噬细胞在某些实验病理情况下超微结构变化的电镜观察

本文以健康家兔为实验对象,分别采用夹闭肠系膜上动脉所造成的动脉闭塞性(SMAO)休克、自耳静脉注入油酸所复制的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)为实验模型,应用“洗肺”技术采取肺巨噬细胞,进行超薄切片和冷冻蚀刻电镜观察;分析比较了肺巨噬细胞在上述实验性疾病时的超微结构变化,探讨了肺巨噬细胞与某些病理过程的关系。一、材料与方法:将健康成年家兔,分为正常对照组,SMAO休克组和ARDS组。各组动物均以适量温生理盐水缓冲液(约50毫升),经气管插管反复灌洗肺组织(六次),再将洗出液三次离心沉淀(500克,8分钟/次),制得5×10~6/毫升肺巨噬细胞混悬液。此后,样品分别经2.5～4.0％戊二醛固定,以618树脂包埋制备超薄切片;经30％甘油生理盐水防冻处理,用日立FHZ—1型冷冻蚀刻装置制得冷冻复型膜。样品送H—500电镜观察,加速电压75KV。     

应用冷冻蚀刻技术研究几种病毒的超微结构

采用冷冻蚀刻技术研究了GPV、IBRV和NDV等几种病毒的超微结构,初步取得如下结果: 一、在冷冻蚀刻样品中,GPV呈球形(在细胞质内)或近似球形(释放到细胞外),直径约300nm,这与在超薄切片或负染色样品中所见的病毒形态和大小有很大的不同。二、IBRV囊膜的PF和EF面上,均可见到直径5—9nm的膜内微粒。GPV囊膜膜内微粒的数量及其在PF面和EF面上的分布与IBRV不同。细胞质内与细胞外成熟的GPV囊膜的膜内微粒也有明显的差异。三、在GPV毒浆基质中,可观察到由直径5—10nm颗粒的聚集或规则排列形成的弓形、环形、及直径150—400nm大小不等的球形结构。实验结果显示了冷冻蚀刻技术在病毒形态结构和形态发生,尤其在病毒囊膜结构研究中的优越性。对这一技术在病毒学中的应用进行了讨论。     

纤毛细胞膜特化结构的冷冻蚀刻研究

六十年代以来,冷冻蚀刻技术的应用和发展,能较满意地揭示生物膜上某些特化区域的蛋白分子排列方式和三维图象。本文应用此技术,研究纤毛细胞表面特化结构。家兔整体麻醉后,开胸取新鲜气管上皮层数条,用0.IM磷酸缓冲液配制的2％戊二醛(PH7.2)在4C固定一小时,洗涤24小时后浸入30％甘油生理盐水,待组织条沉没数分钟后,取出样品,置于样品台上,用液氮冷冻后,迅速放入FD—3A 冷冻蚀刻仪中,在真空优于2×~(-6)Torr下做断裂,蚀刻和喷涂白金及碳,用10％次亚氯酸钠溶化喷涂样品,洗净复型膜,捞取在载网上,待干后用TEM—100CXⅡ电镜观察。     

山羊痘病毒囊膜的超微结构与形态发生

痘病毒可以作为研究生物膜形态发生的很好材料。我们应用冷冻蚀刻技术并附以超薄切片、负染色,细胞表面复型和扫描电镜等技术,对一种复制周期很长的痘病毒——山羊痘病毒囊膜的精细结构和发生过程进行了比较研究。病毒发育早期,毒浆周围出现的弧形膜样结构在冷冻蚀刻样品中呈现出间距为15—20nm均匀排列的二层颗粒;未成熟病毒囊膜为圆形,直径约400nm,因其常常从病毒中部断裂,因而可清楚地显示出病毒周缘仍由二层颗粒围绕;细胞质内成熟病毒囊膜为直径320—340nm的规则球体,其的PF面和EF面上均可见到大量直径为7—10nm的膜内微粒。释放到细胞外的成熟病毒囊膜的PF或EF面仅有少量的膜内微粒,囊膜形态呈不规则的球体     

中国林蛙胃上皮细胞紧密连接的冰冻蚀刻电镜观察

超薄切片技术和渗透法虽然比较广泛地用于研究细胞的连接装置,但分析结果比较困难。冰冻蚀刻技术可以使细胞表面的连接装置立体地显示出来,分析方便,本文初步报告了东北及四川某地中国林蛙胃上皮细胞紧密连接的形态结构。东北及四川中国林蛙均由中国科学院成都生物所两栖爬行动物研究室提供。按常规方法取样,2％的戊二醛固定。用30％的甘油两栖类生理盐水作防冻处理后,按冰冻蚀刻常规操作进行。用日本电子光学公司(JEOL)的EE—FEB·D冰冻蚀刻装置,在1×10~6托—130℃“切”断后,蚀刻1分钟。以45角向样品表面喷铂,再垂直喷碳,制成复型膜,供电镜观察。     

用常规透射电镜观察半薄切片——铀—铅—铜浸染技术的应用

在常规透射电镜中,超薄切片的厚度一般不超过0.1微米,否则就看不清样品的细节。但是,使用特殊的标本本浸染方法,选择性地对某些细胞结构染色,就可以在一般透射电镜下观察半薄切片。本实验采用铀—铅—铜浸染技术,选择性地染色一部分细胞器,在75—100KV透射电镜下观察0.25—0.5微米的半薄切片。结果表明,这一技术在超微结构研究中有一定实用意义。实验方法:用2％戊二醛灌注大鼠,取肝、肾、十二指肠和睾丸等组织,切成1立方毫米小块。组织块经缓冲液漂洗后,在42℃下先放入5％醋酸铀水溶液(PH3.5)浸染1小时,再在硝酸铅—硫酸铜—枸椽酸钠溶液中浸染1小时,然后在4℃下用1％饿酸后固定12小时、常规环氧树脂包埋,最后将组织块切成0.25—0.5微米半薄切片,在透射电镜下观察。     

幽门螺杆菌感染后胃粘膜屏障改变的形态学研究--Ⅱ.胃粘液细胞间紧密连接的变化

目的观察HP感染后胃粘液细胞间紧密连接的变化,并探讨其临床意义. 方法 6例有HP感染(快速尿素酶试验阳性)胃粘膜窦部活检标本,采用超薄切片技术及冷冻蚀刻技术处理后,HU-12A透射电镜观察.结果 HP常聚集在胃粘液细胞连接的附近 ,甚至可沿细胞间隙向深部浸润.冷冻蚀刻复型膜观察显示:部分粘液细胞间紧密连接条索数减少,断裂或缺失,部分细胞间紧密连接条索数目增多,并向深部延伸,可游离存在或构成稀疏的网状遍布于细胞的侧面.结论 HP感染后,作为胃粘膜屏障组成部分之一的胃粘液细胞间紧密连接的破坏可能是HP致病的一个重要机制.     

幽门螺杆菌感染后胃粘屏障改变的形态学研究：Ⅱ.胃粘液细胞间紧 …

目的 观察ＨＰ感染后胃粘是紧密连接的变化,并探讨其临床意义。方法 ６例有ＨＰ感染（快速尿素酶试验一）胃粘膜窦部活检标本,采用超薄切片技术及冷冻蚀刻技术处理后,ＨＵ－１２Ａ透射电镜观察。结果 ＨＰ常聚集在胃粘液细胞边接的附近,甚至可沿细胞间隙向深部浸润。冷冻刻复型膜观察显示,镜紧密连接索数减少,断裂或缺失,部分细胞间紧密连接条索数目增多,并向深部延伸,可游离存在或构成稀疏的网状遍布于细胞的侧面。结论     

高分子材料冷冻切片的捞片技术

长期以来,在透射电镜样品制备超薄切片中,常规的捞片方法是采用带支持膜的载网收集。近年来,随着电镜的广泛应用,冷冻切片技术在高分子材料中应用也越来越广泛,由于冷冻切片技术要求较高,难度也大,切片厚度的控制是关键,否则在电镜下电子束将无法穿透过去。因此,在切片过程中,除了掌握好制样重要技术环节以外,要求尽可能采用无膜载网进行捞片,以减少电子束穿透厚度和切片的热漂移,这样才能保证获得厚度低于100nm的切片。本人经过长期的工作实践不断的摸索和总结,现将冷冻切片技术中应用无膜载网收集切片应掌握的技术介绍如下。冷冻切片样品…     

植物材料冷冻蚀刻技术的几点改善

植物材料的冷冻蚀刻制样过程中遇到的技术难处是很多的。我们采用减压蒸发冷却法制备的液氮泥作样品的高速冷却剂、用5～10M高浓度铬酸作试样的腐蚀剂和在用聚四氟乙烯材料制成的凹型器皿中将样品进行腐蚀和漂洗复型膜。用以上改善的方法制备的样品没有冰晶,腐蚀彻底的复型膜不卷曲、制样成功率极高。     

睾丸精小管的冷冻蚀刻和超薄切片的电镜观察

本文报导小白鼠、大白鼠、狗的睾丸精小管冷冻蚀刻和超薄切片的观察结果和讨论。一、细胞连接:精小管中各细胞之间关系密切,相互交换信息和物质,保证了精子发生的节奏性和同步化。用冷冻蚀刻技术观察到两种细胞连接形式。1.紧密连接,低倍镜下可见支持细胞的表面有各种线条组成的图案,花纹,高倍镜下则能分辨出这些线条是由蛋白颗粒排列而成。2.间隙连接:由数量不等的蛋白聚集形成,这是两个细胞片状接触,增加了细胞间的信息交流和物质交换量,紧密连接和间隙连接常常是混合存在的,这种结构表明两种连接形式有共同性。通过超薄切片的电镜观察到细胞间的桥粒连接,和精子细胞的间桥,这保证了细胞之间有更多的物质交换,同步发育。     

低温固定的植物叶绿体超微结构探讨

五十年代以来.对植物叶绿体结构进行广泛的研究。近年由於超薄切片技术、冷冻蚀刻技术和细胞器组分的生化测定技术等的发展,使细胞器的超微结构有了更深入的了解。但以上这些制样技术均要对生物样品进行化学试剂处理,不同的处理方法,观察到的结构图象差异很大,且看不到生活状态的细胞器结构。为此,我们对植物样品不经任何化剂处理,采用直接低温固定冷冻     

扁桃酸酰胺作用阴道滴虫的电镜观察

扁桃酸酰胺(Mandelic Amide)已证实为桃叶膏抗滴虫的有效成份,为探讨此成份的杀虫机制,作者曾作了光镜下的形态观察,而对电镜下的超微结构改变未见有过记载。本文就电镜下的观察结果报导如下。观察方法是在培养48小时的滴虫培养管内加入40mg/5ml扁桃酸酰胺,培养48小时后制备样品。另外取一滴虫培养管不加药品作对照组,并与实验管同时进行样品制备。样品制备是将上述两种标本,先以2.5％戌二醛液在室温下作一级固定,15分钟后,用pH7.4磷酸缓冲液水洗1小时,再入1％四氧化锇二级固定2小时。用乙醇进行系列脱水,用环氧树酯包埋处理48小时,作超薄切片,切片用醋酸铀和柠檬铅作双染色,随后在H—600型电镜下观察拍片。     

草鱼出血病病毒的电镜观察

草鱼出血病是我国淡水渔业的一大病害,我所与长江水产所协作开展对草鱼出血病病毒的分离,防治和分子生物学的研究。本文侧重介绍利用电子显微镜对草鱼出血病病毒的形态和超微结构的研究。材料与方法病毒制备成悬液,滴于火棉胶炭膜铜网上待干后,2％磷钨酸负染。取病鱼的肝、脾、肾组织和病变细胞,用2％戍二醛和1％锇酸双固定,苯二甲酸二丙烯酯包埋,LKB—8800型超薄切片,于JEM—100C电子显微镜观察。     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

胆石症患者肝的超微结构改变

胆石症常伴发胆囊炎,慢性胆石性胆囊炎(CHL)对患者肝脏的超微结构改变的影响,目前资料不多。本研究应用透射电镜对超薄切片及冷冻蚀刻复型标本进行了综合观察。对象是经临床及外科手术证实为慢性胆石性胆囊炎患者,均未经胆酸类药物或其它肝毒性药物治疗,多数患者为40岁以上妇女。病程2—5年,无临床郁胆,     

高分子材料的冷冻超薄切片技术

本文使用冷冻超薄切片装置对高聚物材料包括共混物的切片获得了较好结果,並介绍了作者在高分子材料的冷冻超薄切片技术方面的一些经验。     

甲烷氧化细菌的冷冻蚀刻电镜观察

甲烷氧化细菌(Methanotroph)在生态环境中占有重要地位,在生产生物多糖、单细胞蛋白,以及近年发现的甲烷单加氧酶对多种烃的生物转化等方面,有着广泛的用途,因而引起人们极大的关注。本文运用冷冻蚀刻方法,对甲烷氧化菌的细微结构进行观察,特别对细胞包被(envelope)结构进行较详细的研究。实验选用了Methylomonoas sp.761M和Methylosintis sp.81Z两株甲烷氧化菌。按常规方法,用日本电子光学公司的EE-FEB·D冷冻蚀刻装置制成复型膜,用JEM-100CX电镜观察拍照。两株甲烷氧化菌经冷冻蚀刻后,细胞从两个平面劈裂开,形成四个断裂面,其中两个为凸面,两个为