电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G1期阻党政军及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL－4细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明,2．0Gy和4.0Gy照射后12-72h,G1期EL－4细胞百分数显著高于假照射组（P＜0．05－p＜0.001).4.0Gy照射后EL-4细胞p53蛋白表达从照射后2h开始明显增高,持续至照射后24h(p＜0．05－p＜0．001）;p21蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0.05-p＜0.001);GADD45蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0．05－p＜－0．001）;MDM2蛋白表达在照射后4h开始明显增高,持续至照射后24h（p＜0.05-p＜0.01）。结果提示,中等剂量X射线照射可诱导EL－4细胞G1期阻滞。p53、p21和GADD45蛋白表达在电离辐射诱导EL－4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

p53及其下游基因在电离辐射诱导小鼠胸腺细胞G1期阻滞中的作用

采用流式细胞术和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测了Ｘ射线全身照射后的昆明系小白鼠胸腺细胞的细胞周期、ｐ５３及其下游基因表达的变化。结果表明：⑴２ＧｙＸ射线全身照射后４ｈ,小鼠胸腺细胞Ｇ１期细胞百分数明显高于假照射组,２４ｈ达峰值,持续至照射后４８ｈ;⑵２Ｇｙ照射后ｐ５３蛋白表达在照射后１～８ｈ明显增高,ｐ２１蛋白表达在照射后４～４８ｈ明显增高,而ＧＡＤＤ４５蛋白表达示未南明显变化;⑶２ＧｙＸ射线照射     

电离辐射对小鼠骨髓细胞CDK4表达的影响

采用流式细胞术和Northern blot检测X射线全身照射后小鼠骨髓细胞CDK4转录水平和蛋白表达的变化。结果表明,2GyX射线全身照射后4－48h CDK4 mRNA转录水平及蛋白表达均明显下降;0.5-6Gy X射线全身照射后12h CDK4 mRNA水平及蛋白表达亦呈降低改变。结果提示,CDK4在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞G1期阻滞中可能起重要作用。     

X射线照射对 EL-4 淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响

目的研究不同剂量Ｘ射线照射对ＥＬ４淋巴瘤细胞周期进程及细胞倍增时间的影响。方法离体培养ＥＬ４细胞，计算细胞倍增时间。ＰＩ荧光探针标记，流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞周期各时相细胞的变化。结果０．５Ｇｙ～４．０ＧｙＸ射线照射使ＥＬ４细胞倍增时间明显延长，Ｇ１及Ｇ２期细胞数明显增加。结论０．５Ｇｙ～４．０ＧｙＸ射线照射诱导ＥＬ４细胞明显的Ｇ１及Ｇ２期细胞阻滞，此变化显示出明显的剂量效应和时间效应。细胞周期进程变化与细胞倍增时间延长密切相关。     

X射线照射后EL-4细胞p16mRNA和Pl6蛋白表达的变化

采用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)半定量方法检测p16基因转录水平的变化,采用免疫细胞化学方法检测蛋白表达,观察x射线照射对离体培养的EL-4细胞pi6基因转录及蛋白表达的影响,证实pi6基因转录表达在辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中的重要作用.结果表明,2.0Gy x射线照射后2-48h,EL-4细胞p16mRNA水平增高,照射后72h恢复正常水平.P16蛋白表达于照射后2h开始增高,照射后12h P16蛋白表达非常显著高于对照组(p＜0.01).剂量-效应实验表明,0.5-6.0Gyx射线照射后12h,EL-4细胞p16mRNA水平明显提高.2.0、4.0、6.0Gy组P16蛋白表达均非常显著增加(分别P＜0.01).研究证实,电离辐射能够诱导EL-4细胞p16基因转录及蛋白表达增高,其增幅呈现明显的剂量依赖性.提示辐射诱导pi6基因转录表达增加在辐射诱导EL-4细胞G1期阻滞中发挥重要作用.     

小剂量X射线诱导EL—4细胞凋亡及G1期阻滞的适应性反应

采用流式细胞术观察了小剂量Ｘ射线预照射对其后大剂量照射所致ＦＬ－４细胞凋亡及细胞周期的影响。证实了０．０７５Ｇｙ预照射可明显降低其后２Ｇｙ所致细胞凋亡，减轻Ｇ１期阻滞，并促进细胞ＤＮＡ合成，说明小剂量辐射可诱导ＥＬ－４淋巴瘤细胞凋亡及Ｇ１期阻滞的适应性反应。     

电离辐射对EL-4细胞的P53蛋白及其下游基因MDM2 mRNA和蛋白表达的影响

采用流式细胞术和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交检测了Ｘ射线照射后ＥＬ－４细胞中ｐ５３蛋白及其下游基因ＭＤＭ２ｍＲＮＡ和蛋白表达的变化,以探讨Ｘ射线照射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞的分子机制。结果表明：经４ＧｙＸ射线照射后的ＥＬ－４细胞,ｐ５３蛋白表达在照射后２ｈ增高,４ｈ达峰值,持续至照射后２４ｈ（ｐ〈０．０５～０．００１）;ＭＤＭ２蛋白的表达在照射后４～２４ｈ明显升高（ｐ〈０．０５～０．０１）。进     

电离辐射诱导P21蛋白表达及对细胞周期解偶联的作用

采用免疫细胞化学方法检测P21蛋白表达的变化。采用P1荧光标记及流式细胞术（Flow cytometry,FCM）测定细胞周期并分析细胞倍体的变化。观察电离辐射对EL-4细胞P21蛋白表达的影响及对细胞周期解偶联的作用。时效实验结果显示,4．0GyX射线照射后2—72h,EL-4细胞中P21蛋白表达明显增高（p〈0．05-p〈0．001）。量效实验结果显示,0．5—6．0GyX射线照射后24h,EL-4细胞中P21蛋白表达明显增高（p〈0．01—p〈0．001）。结果还显示,1．0-16．0GyX射线照射后,EL-4细胞的8倍体细胞数在各剂量组均未见明显变化（均p〉0．05）。研究表明,电离辐射可诱导EL-4细胞P21蛋白表达,但不诱导EL-4细胞周期解偶联。提示P21蛋白可能参与细胞周期解偶联的分子调控。     

低剂量电离辐射对小鼠胸腺细胞Fos蛋白表达的影响

应用免疫组织化学、图像分析定量法及流式细胞术分别观察７５ｍＧｙ全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞Ｆｏｓ蛋白的变化。结果发现,照射后胸腺细胞Ｆｏｓ蛋白的表达明显增高,２４ｈ达峰值,以后逐渐恢复至假照水平。与以往的低剂量电离辐射全身照射后小鼠胸腺细胞ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ转录水平的变化在时程上一致。提示,低剂量电离辐射可使免疫细胞的活性增强。     

电离辐射诱导金属硫蛋白在小鼠免疫器官中的表达

观察了电离辐射对金属硫蛋白(MT)在免疫器官中表达的影响.采用放射性109Cd血红蛋白亲和分析法检测组织中MT含量.观察0.5、2、4、6GyX射线全身照射后16h,及4Gy全身照射后0.5、2、4、8、16、24、48、72h,昆明小鼠胸腺及脾脏中MT含量的变化.结果发现,在0.56Gy剂量范围内胸腺中MT含量呈剂量依赖性增高,其中,4Gy和6Gy组有统计学意义(p<0.05).4Gy X射线照射后848h胸腺中MT含量显著增高(p<0.05 p<0.001).然而,量效及时效研究均未见脾脏中MT含量的变化.以上结果表明,X射线能诱导MT在免疫器官中表达,但表现出明显的组织特异性.     

p53和Bcl—2／Bax在辐射诱导胸腺细胞凋亡中的作用

采用流式细胞术对昆明小鼠接受７５ｍＧｙ和２ＧｙＸ射线全身照射后，胸腺细胞内细胞凋亡相关基因ｐ５３，Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ蛋白的表达进行了比较研究。结果表明，７５ｍＧｙＸ射线全身照射后２４ｈ，ｐ５３基因蛋白产物的表达显著降低，而２ＧｙＸ射线全身照射后２４ｈ，ｐ５３基因蛋白表达则显著增高。     

微细胞介导染色体转移法提高AT5 BIVA细胞对电离辐射的抗性

ＡＴ５ＢＩＶＡ细胞是一株经ＳＶ４０病毒转化的ＡＴ病人皮肤成纤维细胞，对γ射线高度敏感。实验用ＦＤ３（含人第１１号染色体的人鼠杂种细胞）、ＦＤ８（不含人第１１号染色体的人鼠杂种细胞）、ＬＭ／ＴＫ鼠细胞）为洪体，通过微细胞介导染色体转移（ＭＭＣＴ）向ＨＴ５ＢＩＶＡ细胞导入人或鼠的完整染色体，经两次３Ｇｙγ射线照射筛选后，获得ＡＴ５ＢＩＶＡ与ＦＤ３微细胞融合的杂合细胞ＡＴ／ＦＤ３－１，对γ射线抗性有显著提高。而ＦＤ８或ＬＭ／ＴＫ的微细胞与ＡＴ５ＢＩＶＡ细胞的杂合细胞，对γ射线抗性未增加。枝型分析表明ＡＴ／ＦＤ３—１细胞中包含了来源于ＦＤ３细胞的人第１１，１４号染色体和数条鼠染色体。通过对照实验，排除了人１４号和鼠染色体提高ＡＴ／ＦＤ３－１细胞对γ射线抗性的可能性．确认人第１１号染色体与ＡＴ细胞对电离辐射敏感性相关，提示人第１１号染色体上可能存在决定细胞对γ射线抗性的相关基因。     

电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响

采用流式细胞术（ＦＣＭ）观察了Ｘ射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞周期进程的时程变化和剂量效应关系,为探讨电离辐射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响。结果显示,２ＧｙＸ射线全身照射后１２ｈ,骨髓细胞出现Ｇ１期细胞百分数升高（ｐ〈０．０５）,４ｈＳ期细胞百分数下降（ｐ〈０．０５）,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分数于后４ｈ和１２ｈ升高（ｐ〈０．０５）。量效研究显示,０．５～６Ｇｙ照射后１２ｈＧ１期细胞百分数高于对照组,其中     

小剂量辐射诱导哺乳动物细胞对基因突变的适应性反应

预先用小剂量γ射线照射小鼠SR-1细胞,然后观察其对随后大剂量γ射线照射诱发细胞hprt基因突变的影响。0.01 Gy小剂量一次预照射,18h、24h后能显著降低3Gy照射诱发SR-1细胞的hprt基因突变频率。细胞每天接受一次0.01Gy照射,共10d,累积剂量达0.1Gy后,6h就能产生上述效应,并可持续到小剂量刺激后的48h,hprt基因突变频率下降了30%—40%。     

低剂量电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD活性的影响

采用MTT法观察了低剂量电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞铜锌超氧化物歧化酶（CuZn SOD）活性的影响，同时用较大剂量作为对照，观察两者的不同之处，而且还利用印迹杂交方法观察了CuZn SOD的mRNA水平变化，结果表明，从转录水平上低剂量电离辐射可导致小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD mRNA水平下降，而CuZn SOD活性却无明显改变；较高剂量电离辐射使小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD活性在照射后8－12h明显增强。     

CD28和Fas在辐射所致T细胞凋亡中作用的研究

采用双标记直接免疫荧光－流式细胞仪分析技术,测定了不同剂量γ射线照射后T细胞CD28分子和Fas受体（CD95）表达的变化。用乙醇抽提法－流式细胞仪分析技术和JAM检测技术,研究了不同剂量γ射线照射、CD28单抗和IL－18处理后T细胞凋亡的情况。结果显示,正常人淋巴细胞用不同剂量γ射线照射后,CD3^ T细胞中CD28的表达随着剂量的增加而下降,T细胞凋亡的增加并与Fas表达上升有关。照射前用CD28单抗和IL－18处理细胞后,Fas表达下调,细胞DNA断裂明显减小。表明γ射线可影响T细胞CD28受体分子的表达及其信号转导,加速T细胞凋亡的进程,而CD28单抗和IL－18对辐射所致T细胞凋亡有一定的拮抗作用。