基于磁性纳米颗粒的化学发光酶免疫分析用于日本血吸虫抗体的检测

该文提出了一种高灵敏的基于磁性纳米颗粒的化学发光酶免疫分析方法用于感染兔血清中日本血吸虫抗体的检测.日本血吸虫抗原通过N-(3-二甲基氨丙基)-N-乙基碳二亚胺盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)固定在磁性纳米颗粒的表面,选择性地结合与富集血清中的日本血吸虫抗体,然后与辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗夹心进行免疫分析.对免疫反应的实验条件如日本血吸虫抗原在磁性纳米颗粒表面的标记浓度,磁性纳米颗粒的用量,抗原与待测抗体的反应时间及辣根过氧化物酶标记二抗的浓度进行了优化.发光强度与感染兔血清的稀释比在1:10000～1:100的范围内成良好的线性关系,检测下限为1:13442.     

基于胱胺自组装膜和SiO2纳米颗粒增强效应的日本血吸虫压电免疫传感器的研究

提出了一种基于胱胺自组装膜和SiO2纳米颗粒增强效应的生物分子固定法,并将之用于日本血吸虫压电免疫传感器的研究.所制备的SiO2纳米颗粒具有生物亲和性高和比表面积大等优良理化性能,经表面功能化后可高效键合日本血吸虫抗原(SjAg)分子,制得敏化的SjAg@SiO2颗粒.将SjAg@SiO2固定于修饰了胱胺自组装膜的石英晶体表面,发展了一种新型压电免疫传感器,用于日本血吸虫抗体(SjAb)的检测.实验结果表明,SiO2颗粒的纳米三维(3D)空间结构有利于所固定的抗原对抗体的识别,进而获得了对目标物SjAb的高灵敏检测.所研制的传感器检测感染兔血清样中SjAb浓度的线性范围为0.6～22.7 μg/mL,检测下限为0.4 μg/mL(S/N=3).此外,临床实际样品的分析结果表明,该免疫传感技术的分析检测能力与经典酶联免疫法(ELISA)相接近,可望用于血吸虫病临床生化诊断、现场筛查和疫情监控等.     

碳纳米管组装电化学免疫传感器测定IgG抗体的研究

应用吸附法将IgG抗原固定于多壁碳纳米管修饰的玻碳电极表面,制备用于IgG抗体检测的电化学免疫传感器。以辣根过氧化物酶为标记物,对苯二酚为底物,利用辣根过氧化物酶标记IgG抗体与待测IgG抗体竞争电极表面固定的IgG抗原,建立了免疫竞争法检测IgG抗体的高灵敏度电化学分析方法。碳纳米管的大比表面积和电化学催化作用,提高了分子识别物质的固定量和电化学检测的灵敏度。工作电位为 0.030 V(vs.SCE)时,响应电流与IgG抗体浓度在0.30~10μg/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为0.11μg/mL。     

基于铜配合物和抗体包被化学镀纳米金共固定的癌胚抗原安培免疫传感器

研制了基于抗体包被化学镀纳米金(AuNPs)和[Cu (bpy) 2 (ONO)]NO3配合物(CuL）共固定修饰玻碳电极(GCE)的安培免疫传感器,并用于血清中癌胚抗原(CEA)的检测。首先将GCE电极表面氧化形成羧基,进而键合上乙二胺。将此胺化电极浸泡在CuL和化学镀金溶液后, CuL可通过π-π堆积作用吸附到GCE表面,并在电极表面还原成30~50 nm的纳米金层（GCE|CuL/AuNPs）。将上述电极浸泡在CEA抗体(anti CEA)溶液中,利用AuNPs固定anti CEA,并通过辣根过氧化物酶(HRP)封闭剩余的AuNPs位点,由此构建了一类快速检测 CEA的无试剂安培免疫传感器（GCE|CuL-AuNPs /anti CEA-HRP）。由于HRP可以催化CuL和过氧化脲（CP）的氧化还原反应,因此该电极在CP溶液中形成催化还原电流。当该传感器在37 ℃下,含CEA的pH 6.5PBS溶液中温育30 min后,随着温育液中CEA浓度的增加,电极表面形成的免疫复合物也增加,导致CuL 对CP 的催化电流下降。电流下降百分比I%与CEA浓度在0.1~80 ng/mL 成线性关系,检测限为0.052 ng/mL（3σ）。由于采用化学镀法可以方便地在GCE表面制备纳米金膜进而包被抗体,并通过π-π堆积作用吸附CuL作为电子媒介体,故该免疫电极制备简单;采用可催化CP还原的HRP封闭AuNPs层多余位点,大大提高了电极灵敏度,有望用血清中痕量CEA分析。     

基于抗体包被纳米金和铜配合物共固定修饰电极的癌胚抗原安培免疫传感器研究

研制了基于抗体包被化学镀纳米金(AuNPs)和[Cu(bpy)2(ONO)]NO3配合物(CuL)共固定修饰玻碳电极(GCE)的安培免疫传感器,并用于血清中癌胚抗原(CEA)的检测。首先将GCE电极表面氧化形成羧基,进而键合上乙二胺。将此胺化电极浸泡在CuL和化学镀金溶液后,CuL可通过π-π堆积作用吸附到GCE表面,并在电极表面还原成30~50nm的纳米金层(GCE|CuL/AuNPs)。将上述电极浸泡在CEA抗体(anti CEA)溶液中,利用AuNPs固定anti CEA,并通过辣根过氧化物酶(HRP)封闭剩余的AuNPs位点,由此构建了一类快速检测CEA的无试剂安培免疫传感器(GCE|CuL-AuNPs/anti CEA-HRP)。其中CuL作为电子媒介体对过氧化脲(CP)有催化还原作用,而且HRP可增强这种作用。当该传感器在37℃下,含CEA的pH6.5PBS溶液中温育30min后,随着温育液中CEA浓度的增加,电极表面形成的免疫复合物也增加,导致CuL对CP的催化电流下降。电流下降百分比1%与CEA浓度在0.1~80ng/mL之间成线性关系,检测限为0.052ng/mL(3σ)。由于采用化学镀法可...     

基于纳米二氧化钛为载体的新型荧光免疫流动体系测定补体3

研制了一种新的可更新荧光免疫流动体系用于补体3(C3)的测定.用纳米TiO2颗粒为固定抗体的载体,辣根过氧化物酶标记C3(HRP-C3),以HRP-C3与待测C3发生竞争免疫反应.辣根过氧化物酶(HRP)催化荧光底物3,3'5,5'-四甲基联苯胺(TMB)转化为无荧光物质,待测C3的浓度可由底物溶液的荧光降低值间接测定.通过简单的处理后,固定抗体的载体表面可以得到有效的再生.荧光响应与C3补体在6.5μg/L到75μg/L之间呈准线性关系.该方法检测限较低,重复性好,可满足临床检测的要求.     

兔抗原生物敏电极的研究

采用石墨电极作为基础电极 ,将待测兔抗原用丝素蛋白溶液固定在基础电极表面 ,根据抗原抗体的单一性识别原理 ,选用山羊抗兔IgG HRP抗体与其选择性结合制作而成 .利用H2 O2 将该生物敏传感器的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测兔抗原的浓度 .结果符合奈斯特响应 ,兔抗原的最低检测浓度 1.0× 10 -10 mol/L ,线性范围 1.0× 10 -8～ 1.0× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s .这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原浓度的新型酶免疫电极 ,在临床检测、生物医学研究等领域中有着广阔的应用前景     

基于纳米磁珠修饰印刷电极的牛奶中三聚氰胺检测安培免疫传感器

共固定氯代邻菲哕啉双核铜配合物(Cu2(phen)2Cl2(μ-Cl)2,简称CuzL)和包被三聚氰胺抗体(anti MA)的FbO4/Au胶(简称纳米磁珠)于丝网印刷电极(SPCE)表面,构建了一种测定牛奶中三聚氰胺(简称MA)含量的安培免疫传感器.当该传感器在含MA溶液中温育时,MA和同时加入的HRP标MA二抗(HRP-anti MA Ⅱ),与电极表面的anti MA形成三元免疫复合物.该复合物上的HRP能催化HzO2还原,并经过Cu2L传导在电极表面形成电流,电流强Ⅰ与MA浓度在0.5～40和60～100ng/mL范围内呈线性关系,检测限为0.25 ng/mL.在pH 6.2的PBS底液中,该传感器制作简单、可抛弃,对MA检测时间小于20 min,灵敏度为1μA·ng-1mL,明显高于酶联免疫吸附(ELISA)法;可实现牛奶中MA免分离现场分析.     

基于纳米金标记和银增强放大的血吸虫抗体的免疫分析

该文提出了一种新的、高灵敏的基于银增强放大和免疫胶体金技术的血吸虫抗体的免疫分析方法.免疫反应在聚苯乙烯微孔板中以间接分析模式(血吸虫抗原-兔抗血吸虫抗体-纳米金标记的羊抗兔IgG二抗)进行,通过反应上去的纳米金催化银离子的还原,使大量的银沉积在纳米金的周围,用酸将银溶解后,通过阳极溶出伏安法(ASV)对银离子进行检测,溶出峰电量的大小与待分析物血吸虫抗体(一抗)的浓度成正比.对免疫分析的一些实验条件如抗原与待测抗体的反应时间、纳米金标记二抗与待测抗体的反应时间、纳米金标记抗体稀释度以及银增强时间进行了优化.阳极溶出峰电量与日本血吸虫抗体的浓度在6.4μg/L～100mg/L范围内呈良好的线性关系,检测下限为3.0 μg/L.将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意的结果.     

电化学极化玻碳电极构建的葡萄糖生物传感器

在硝酸溶液中电化学极化处理玻碳电极(GCE),以硫堇(TH)为电子介体,通过金-硫、金-氮共价键作用和静电吸附作用将纳米金(GNPs)、葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)修饰于电极上,最后在电极上滴涂Nafion水溶液制备抗干扰膜并固定酶电极,构建了一种新型双酶葡萄糖生物传感器.实验结果表明:电化学极化处...     

MWNTs与GNPs—CHIT修饰的过氧化氢生物传感器

在玻碳电极（GCE）上自组装一层多壁碳纳米管（MWNTs）,构建负电荷的界面,然后,静电吸附一层阳离子电子媒介体硫堇（Thi）,再由共价键作用自组装一层纳米金（GNPs）,壳聚糖（CHIT）混合溶液的复合薄膜,通过静电吸附辣根过氧化物酶（HRP）制得过氧化氢（H2O2）生物传感器。采用循环伏安法和计时电流法考察了该生物传感器的电化学性质,并研究了该修饰电极对H2O2的催化还原作用。生物传感器的响应电流与H2O2浓度在8．2×10^-6～1．1×10^-3mol／L范围内呈现线性关系,检出限为5．8×10^-7mol／L,达到95％稳态响应时间约为15s。将此生物传感器用于H2O2的检测,结果令人满意。     

A label-free amperometric immunosensor based on horseradish peroxidase functionalized carbon nanotubes and bilayer gold nanoparticles

In this work, a novel label-free amperometric immunosensor has been constructed for detecting α-1-fetoprotein (AFP) based on nanocomposite of horseradish peroxidase (HRP) labeled carbon nanotubes (CNTs). First, the gold nanoparticles (AuNPs) were electrodeposited on the surface of the glass carbon electrode by electrochemical reduction of gold chloride tetrahydrate (HAuCl₄) to immobilize horseradish peroxidase labeled carbon nanotubes (HRP-CNTs). Then HRP-CNTs bioconjugate was immobilized on the surface of the electrodeposited AuNPs layer by the combination of forces (coordination and electrostatic force). Subsequently, it was immersed into gold colloidal nanoparticles (GNPs) solution, which was used to immobilize antibody biomolecules (anti-AFP). Enhanced sensitivity was obtained by using bioconjugates featuring HRP labeled (HRP-CNTs), which had lager specific surface area and good electronic catalysis (current response signal) compared to carbon nanotubes. Under optimized conditions, the linear ranges were from 0.2 to 200 ng mL⁻¹ with a detection limit of 0.067 ng mL⁻¹ (at an S/N of 3). The proposed immunosenor showed good precision, acceptable stability and reproducibility and could be used for the detection AFP in normal human serum, which provided a potential alternative tool for the detection of protein in clinical diagnosis.     

一次性免疫传感器快速检测阪崎肠杆菌的研究

为改善基于多壁碳纳米管/ Nafion生物传感器电化学信号及储存稳定性,采用[BMIM] PF6/Nafion复合物将辣根过氧化物酶标抗体包埋固定于MWCNT/Nafion修饰的丝网印刷碳电极上,构建了一种新的免疫传感器.用原子力显微镜表征电极各层修饰后的表面形态,用循环伏安法(CV)和交流阻抗法(EIS)考察修饰电极...     

电化学免疫法测定猪肉组织中青霉素的研究

将玻碳电极(GCE)表面氧化处理后,用戊二醛(GA)作交联剂,将新亚甲蓝(NMB)及辣根过氧化酶(HRP)标记的青霉素多克隆抗体(Abl修饰到电极表面,制成高灵敏电流型青霉素免疫传感器.通过循环伏安法考察了电极表面的电化学特性,并对猪肉中青霉素的残留进行了定量的研究.结果表明该传感器对猪肉中含有的青霉素检测的线性范围是5～50 ng,g,相关系数为0.977 9,检出限为2.45 ns/s.样品最高吸收率为69.4%.其中考查了蛋白沉淀刺的沉淀效果.发现运用三氯乙酸对猪肉中蛋白和脂类的沉淀效果最好.同时干扰性实验表明,交叉干扰较小.修饰的电极稳定性较好,可用于实际肉样中青霉素含量的测定.     

可再生使用的磁性纳米修饰C反应蛋白电流型免疫传感器

利用Fe3O4(核)/Au(壳)(简称GMPs)标记C反应蛋白酶标抗体(HRP-anti CRP),构建了一类新型的磁性纳米探针(HRP-anti CRP/GMPs),将其修饰在丝网印刷电极(SPCE)表面构建了可再生使用的CRP安培型酶联免疫传感器.首先将多壁碳纳米管(MCNTs) -硫堇(Thi) -Nafion复...     

Flexible and disposable immunosensors based on layer-by-layer self-assembled carbon nanotubes and biomolecules

A low-cost, flexible, and disposable immunosensor is presented in this paper. The single-walled carbon nanotubes (SWNTs) and biomolecules are self-assembled between two micro-patterned electrodes. The immuno-chip acts as a platform of a horseradish peroxidase (HRP) labeled sandwiched Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA). The pH change induced by the biochemical reactions influences the electrical conductance of SWNT. A detection resolution of 0.4 ng/ml (2.5 pM) for normal rabbit immunoglobulin G (IgG) is demonstrated. The new fabrication technique and the HRP labeled detection protocol can be extended to the recognition of other antigens for critical applications to clinical diagnosis, food toxin detection, and environment monitoring.     

基于辣根过氧化物酶及纳米钯的双重放大策略用于构建电化学凝血酶适体传感器

基于辣根过氧化物酶(HRP)及纳米钯(NanoPd)对过氧化氢(H2O2)的双重催化作用放大铁氰化镍(NiHCF)的电化学氧化还原信号构建了一种新型的电化学适体传感器。采用生物兼容性好的壳聚糖(CS)分散石墨烯-碳纳米管复合物(CS-Gra-CNTs)可以大大提高其导电性和比表面积,吸附更多电活性好、化学性质稳定的电子媒介体NiHCF。固定NanoPd并吸附凝血酶适体(TBA),用HRP封闭非特异性吸附位点后,在含有一定浓度的H2O2的磷酸缓冲溶液(PBS)中可用于高灵敏检测凝血酶(TB)。在最优条件下,采用循环伏安法考察该传感器的电化学特性,研究表明,峰电流值与TB浓度在1.0×10-5～3.0×10-2mol/L成线性关系,检出下限为3.0×10-6mol/L。并且,该传感器制备简单、操作简便、稳定性好、寿命长、灵敏度高、特异性强。     

多壁碳纳米管-Nafion/纳米金构建阻抗传感器研究

利用多壁碳纳米管（ MWNT）—Nafion和纳米金（ GNPs）修饰金电极构建了一种简单、灵敏检测人端粒DNA的电化学阻抗传感器。首先将Nafion分散的MWNT滴涂于Au电极表面,再利用电化学沉积法将GNPs沉积到MWNT—Nafion修饰Au电极表面,以GNPs为载体固定人端粒探针DNA制备DNA传感器。在最优实验条件下,将传感器用于人端粒DNA的检测中,结果表明：目标人端粒DNA的线性范围为1.0×10－13～5.0×10－11mol/L,检出限（S/N＝3）为2.5×10－14mol/L。采用MWNT为基底沉积GNPs修饰电极检测的灵敏度显著提高。