长岛海洋生物内生真菌的分离及其抗老年痴呆活性筛选

目的:从长岛海洋生物中分离内生真菌,通过抑制乙酰胆碱酯酶活性和抗氧化活性筛选获得活性菌株。方法:从几种海洋生物中分离、纯化内生真菌,并测定其发酵液和菌丝体提取物抑制乙酰胆碱脂酶活性和清除二苯代苦味酰基自由基DPPH.的能力。结果:从长岛海域采集到的9种生物中分离内生真菌42株,其中具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的24株,具有清除DPPH.活性的33株,兼具2种活性的15株。乙酰胆碱酯酶抑制率最高达到61.98%,DPPH.自由基清除率最高达到92.94%。结论:海洋内生真菌是寻找抗老年痴呆活性物质的重要资源。     

发酵生产脂肪酶的菌株筛选及其应用

采用从大庆日月星油厂附近的土壤中筛选得到产脂肪酶的菌株xjA,在固态发酵的条件下生产脂肪酶,并将所产脂肪酶应用于合成共轭亚油酸甘油酯。本实验利用单因素和正交试验方法确定产脂肪酶的最佳固态发酵条件：在种龄36h的情况下,碳源(麸皮)与氮源(豆粕)质量比(m麸皮:m豆粕)为1:4、V培养基:V加水量 1:1、接种量0.3%、发酵温度29℃、发酵时间3d。在此条件下进行固态发酵,固态培养基中脂肪酶的活力最高,可达1450U/g;所得脂肪酶用于合成共轭亚油酸甘油酯,产物中共轭亚油酸(CLA)接入率可达到13.6%。     

水菖蒲内生菌分离与抗菌活性菌株筛选

对水菖蒲内生真菌进行分离,并进行抗菌活性的筛选。采用改良氯化三苯四氮唑显色(TTC)微量稀释法筛选抗菌活性菌株。以18 种常见导致食品腐败的细菌、酵母菌和霉菌为指示菌研究活性菌株的抗菌能力。结果显示,水菖蒲内存在广泛的具有抗菌活性的内生菌,占内生菌总数的40.7%,高活性菌株占内生菌总数的12.39%。其中S9 菌株发酵液具有抗细菌、酵母菌和丝状真菌的广谱抗菌能力,是潜在的食品防腐抗菌资源。     

食（药）用蕈菌中高抑菌活性菌株筛选及培养基优化

对4个不同属24株食(药)用蕈菌对11株指示菌抑菌活性进行研究,通过初筛模型,从中筛选出3株功能菌,6株指示菌。对初筛菌株进一步复筛,确定功能菌株H2与枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌为培养基优化的出发菌株和指示菌。通过响应面分析优化培养基配方,结果表明,当麦芽糖40.9g/L、蛋白胨11.2g/L、KH2PO4 2.1g/L、MgSO4 ·7H2O 1.1g/L时,H2对枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的抑菌活性均较理想,其抑菌圈半径分别达到3.513、4.610、8.800mm。     

耐有机溶剂脂肪酶产生菌的筛选及其粗酶酶学性质

以体积分数2%苯为筛选压力,利用罗丹明B平板显色法和摇瓶发酵法,从采集的花生地土壤样品中分离筛选得到1株中度耐热、耐碱脂肪酶产生菌,编号为H2。通过形态观察、生理生化特性实验及其16S rDNA基因序列对菌种进行鉴定。结果表明,H2菌株与短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的亲缘关系最紧密。通过研究得到该菌株的摇瓶发酵条件:产酶培养基为:蛋白胨3%、酵母膏1%、NaCl 0.5%、橄榄油1%,pH7.0,摇瓶发酵温度为28℃,摇床转速为180r/min,发酵周期为48～60h。所产脂肪酶在40℃、pH9.0时酶活性最高,对pH值和温度的适应范围较宽,pH6.0～10.0比较稳定,35～50℃具有较高酶活性。     

木素降解菌——白腐菌的筛选

真菌中的白腐菌(white-rotfungi),是自然界中唯一一类具有独立降解木素能力的微生物。本研究通过Bavendamm反应和选择性培养基从自然环境中筛选白腐菌的纯菌种。15天左右培养得到子实体,对木素的降解能力在12天可达到74%左右。     

一株海洋梅久兰链霉菌的分离鉴定及其抗真菌作用研究

采用梯度稀释分离法从连云港海域海水、海泥、近海土壤、海洋动物以及海洋植物样品中,分离出海洋放线菌22株,采用平板对峙培养法测定不同放线菌菌株的抑菌作用,有9个放线菌菌株有抑菌作用。其中ZW-1菌株的抑制活性最强,该菌株及其发酵液对供试的小麦雪腐镰刀菌(Fusarium nivale)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)等8种植物病原真菌都有较强的抑制作用,可导致病原真菌菌丝细胞壁膨大,原生质体收缩,同时可抑制菠菜早疫病菌(A. solani)分生孢子的萌发和芽管的伸长。通过培养特性、细胞形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,将海洋放线菌ZW-1菌株鉴定为梅久兰链霉菌(Streptomyces mediolani)。     

野生甘草内生真菌的分离及其次级代谢产物活性研究

目的:分离野生甘草内生真菌并就其次生代谢产物的抑菌和抗氧化活性进行评价。方法:以新鲜野生甘草为材料,选取甘草不同组织部位,采用组织切块法,以9种培养基分离纯化其内生真菌并进行分子生物学鉴定;以纸片扩散法评价其代谢物对5种测试菌株的抑菌活性;以DPPH自由基和·OH清除能力评价代谢物的抗氧化活性。结果:从植物甘草中分离得到128株真菌,经分子生物学鉴定归属于5个不同的属。其中,YS-6发酵液样品对金黄色葡萄球菌显示一定的抑菌活性;GS-6a发酵液样品对DPPH自由基清除率达97.54 %,其菌丝体样品对·OH清除率达98.83%。结论:甘草内生真菌丰富多样,是筛选抗菌和抗氧化活性物质的良好来源。     

芒果采后病原菌的分离及天然抗菌物质的筛选

以云南省元江县的三年芒果为材料,分离并鉴定贮藏过程中引起腐烂的主要病害及病原真菌,同时采用滤纸片扩散法,用25种植物提取液对病原菌进行抑菌实验,以找到对病原菌有抑制作用的天然物质.结果表明,从贮藏中的芒果上分离、鉴定出盘长孢状刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides Penz)、色二孢(Diplodia mangiferae)、大茎点霉(Macrophoma mangiferae Hingoroai & Sharma)、拟茎点霉(Phomposis mangiferae Ahmad)4种病原真菌;确定了对4种病原真菌有抑制作用的天然植物提取液及其最低抑制浓度(MIC),其中对盘长孢状刺盘孢有抑制作用的提取液有100g/L的黄连水提取液、1OOg/L的高良姜水提取液、6.25g/L的连翘乙醇提取液、50g/L的丁香乙醇提取液和25g/L广霍香乙醇提取液;对色二孢有抑制作用的有100g/L的百部水提取液和12.5g/L的广霍香乙醇提取液;对大茎点霉有抑制作用的是12.5g/L的连翘乙醇提取液、25g/L的广霍香乙醇提取液和50g/L的桉叶乙醇提取液:对拟茎点霉有抑制作用的有25g/L的连翘乙醇提取液、50g/L的丁香乙醇提取液和6.25 g/L的广霍香乙醇提取液.     

Effect of Treatment with Compressed Propane on Lipases Hydrolytic Activity

The objective of this work was to assess the influence of compressed propane treatment on the hydrolytic activity of three lipases (Amano PS, Amano AY30, and a non-commercial lipase from Yarrowia lipolytica) free, resuspended, and in immobilized form. To evaluate the effect of process variables on the lipase activity, a semi-factorial experimental design with two levels and four variables was employed for free and immobilized lipases and a full 2² experimental design was carried out for lipases in solution. The residual activity was defined as the ratio of lipase activity before and after treatment with pressurized propane. For free and immobilized lipases, an enhancement in residual lipase activity in most of the experimental conditions investigated was observed. In the case of resuspended lipases, it is shown that enzyme kinetics is sensitive to treatment with compressed propane resulting in remarkable gains and losses of enzyme activity. In a general way, the results showed that the enzyme activity changes significantly depending on the enzyme, the presentation form, and the experimental conditions investigated, allowing the selection of operational conditions in terms of temperature, pressure, exposure time, and depressurization rate for advantageous application of these biocatalysts in hydrolysis reactions.     

苍耳内生真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从植物苍耳中分离内生真菌,选出8株进行抑菌活性测定,有6株对番茄早疫病菌抑制率大于50%。菌株SC008对5种植物病原菌的抑制率均大于50%。对内生真菌SC008进行形态学观察及ITS序列鉴定,初步判定菌株SC008归属于黑孢霉属(Nigrospora Zim.)。碳氮源实验表明,SC008在以乳糖和蔗糖为碳源及以酵母提取物和牛肉膏为氮源的培养基上生长良好。     

产几丁质酶菌的分离、筛选及其对烟草病原真菌的抑制作用

从福建、河南、安徽、云南、湖北采集了烟草根际土样100份,用几丁质选择培养基法共分离出产几丁质酶菌株62株,其中真菌32株、细菌22株、放线菌8株。通过透明圈法和还原糖法对分离的菌株进行了筛选,结果表明链霉菌属(Streplomycessp)产几丁质酶活性最高。并测定了几丁质酶活性较高的菌株对烟草赤星病菌和黑胫病菌的抑制效果,其中菌株9-1-1、9-2-1和19-2-1对黑胫病菌均有不同程度的抑制作用,以菌株9-1-1的抑菌效果最好,而这3种菌株对赤星病菌的抑制效果不明显。因此,菌株9-1-1有开发成为生防制剂用于防治烟草黑胫病的潜力。     

1 株广谱抗菌活性菌株的筛选鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化

从湖南传统腊肉中分离筛选得到1 株具有广谱抑菌活性的菌株HLR13,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、荧光假单胞菌、藤黄微球菌和肠炎沙门菌等食品中常见的致病菌具有较强的抑制活性。通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌斯皮兹仁亚种（Bacillus subtilis subsp. spizienii）。采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析（Q Sepharose FF）和凝胶过滤层析（Sephadex G-75）等方法对该菌株所产抗菌蛋白进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示纯化后的蛋白为单一条带,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析和NCBI/nr蛋白数据库比对初步确定该抗菌蛋白分子质量为31?494?Da,是枯草芽孢杆菌产生的一种假定蛋白。本实验可为新型天然防腐剂的开发提供一定理论依据。     

抗青霉芽孢杆菌优良菌株的分离、筛选及鉴定

为了获得一株对青霉有强烈拮抗作用的芽孢杆菌以应用于食品的防腐保鲜中,从木瓜、柑橘、葡萄、全麦面包、太子参、陈皮等食品及中草药共计30个样品中分离得到132株芽孢杆菌。通过平板对峙法,筛选出18株对青霉有较强拮抗作用的芽孢杆菌。对其中3株抑菌效果显著的芽孢杆菌利用杯碟法测定其发酵液的抑菌效果,最终筛选出一株芽孢杆菌LPL40,其发酵上清液对青霉的抑菌圈直径达到(13.94±1.90)mm。通过形态学、生理生化及16S rDNA鉴定,最终将该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌LPL40(Bacillus amyloliquefaciens LPL40)。     

产剑麻皂苷水解酶菌株的筛选与鉴定

目的筛选能酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌株。方法用薄层色谱法（TLC）初筛能酶解剑麻皂苷游离出剑麻皂素的菌株,再用酶活性比色测定和高效液相色谱法（HPLC）复筛目的菌株。通过形态学观察和ITS序列测定,初步鉴定菌种。结果筛选到31株目的菌株,其中丝状真菌13株,细菌18株。丝状真菌的酶活性高于细菌。鉴定其中酶活性较高的4株真菌：菌种T1为黑曲霉,T2、T3为链孢霉属,T4为青霉属。结论 TLC可快速筛选酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌种。黑曲霉、链孢霉和青霉均有较强的酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的能力。     

湖光岩水体与泥层中真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从湖光岩的湖水、泥土中分离出30株真菌,根据形态特征确定其种属,通过管碟法测定其抗菌活性。结果表明青霉属15株、曲霉属4株、酵母属4株、木霉属2株、毛霉属1株、粘帚霉属1株、根霉属1株。具有抗菌活性的菌株11株:9株具有抗金黄色葡萄球菌活性;1株具抗金黄色葡萄球菌活性及抗枯草芽孢杆菌活性;1株有抗大肠埃希氏菌活性、抗金黄色葡萄球菌活性及抗枯草芽孢杆菌活性。     

烟草种子携带病原真菌的分离与鉴定

采用无菌滤纸培养烟苗的方法对贵州主栽的4个烤烟品种裸种进行了带菌检测,并对种子携带真菌进行了分离与鉴定。结果表明,K326、贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号的种子带菌率分别为15%、77.78%、21.67%和61.39%。分离和鉴定发现种子携带的真菌有链格孢菌属（Alternaria sp.）、拟茎点霉属（Phomopsis sp.）、支顶孢属（Acremonium sp.）、柄孢壳属（Zopfiella sp.）、曲霉属（Aspergillus sp.）、镰孢菌属（Fusarium sp.）、青霉菌属（Penicillium sp.）、赤霉菌属（Gibberella sp.）、芽枝孢菌属（Cladosporium sp.）、离蠕孢属（Bipolaris sp.）和Stagonosporopsis cucurbitacearum等。获得40株真菌中共有22种真菌,优势菌群主要为链格孢属、芽枝孢菌属、镰孢菌属和赤霉菌属。链格孢菌属在4个烤烟品种上均有发现。镰孢菌属主要来自于贵烟4号、韭菜坪2号和南江3号,其中南江3号种子上最多。芽枝孢菌属仅来自贵烟4号。贵烟4号和南江3号种子上的真菌种类和数量较多。这些种子携带真菌的发现对烤烟种子的生产与加工具有重要的意义。     

高耐性高产酒精酵母的分离和筛选

采用含高浓度酒精培养基从自然界中分离到63株酵母,经过四级筛选,得到高耐性、高产酒精的酵母菌株Cor-01.该菌株耐酒精度20%vol,耐糖度22°Bix,致死温度为55℃.以红薯淀粉为原料,在料水比1:2、30℃、100 r/min、发酵72 h的条件下,生料发酵,成熟醪酒精的体积分数达到16.2%.     

产纤维素酶霉菌筛选及发酵条件优化

从江苏淮安清江浦区柳树湾树林获取土样为菌种来源,以羧甲基纤维素钠（carboxymethyl cellulose sodium,CMC-Na）为唯一碳源,通过富集培养、初筛、复筛获得3株产纤维素酶能力较强的菌株（Strain-1、Strain-2、Strain-3,S-1、S-2、S-3）,其中S-2产纤维素酶能力最强,其滤纸酶（filter paper enzyme,FPA）酶活力可达0.21 U/mL。对 S-2菌株进行紫外（ultraviolet,UV）诱变,筛选获得菌株SUV2-1。通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行发酵培养基优化,得到该菌株产纤维素酶培养基配方：秸秆粉11.63 g/L,蛋白胨2.33 g/L、吐温-80 2.71 mL/L。利用上述培养基在摇瓶发酵条件下得到的FPA酶活力为0.45 U/mL,与优化前菌株的FPA酶活力相比,提高了51.15%;与诱变前的出发菌株相比,酶活力提高了113.00%。     

金线莲菌根真菌的分离与鉴定

从38株野生金线莲中共分离获得29株菌根真菌,其中丝核菌类(Rhizoctnia sp.)真菌7株,结合菌株形态、融合群测定及5.8S rDNA-ITS序列分析,鉴定结果如下:J1、F1、F7属于双核丝核菌AG-P融合群,F1、F7为AG-P融合群中的同一亚群,J1为不同的亚群;G1、G3、G5、G6为多核丝核菌,初步推断为兰科丝核菌类的念珠菌根菌(Moniliopsis)。