刺糖多孢菌生长特性及培养条件的优化

研究了多杀菌素生产菌株的生长特性及种子培养条件对其发酵产量的影响。采用单因素试验确定刺糖多孢菌C3-10-4的最优种子培养基和最佳培养温度,同时采用正交设计对刺糖多孢菌C3-10-4培养基装量、摇床转速和添加玻璃珠个数进行了优化,并运用Gompertz模型拟合其生长曲线。结果表明:最佳种子培养基为:胰蛋白酶大豆肉汤30 g、酵母提取物3 g、硫酸镁2 g、葡萄糖10 g、去离子水1 L;最优种子培养条件为:培养温度为29℃,摇床转速240 r/min、玻璃珠6个、培养基装量30 mL/250 mL,在该培养条件下,可获得最大生物量。     

基于玉米黄浆及淀粉培养的罗耳阿太菌发酵多糖工艺研究

从君子兰（Clivia miniata Regel）上筛选出一株罗耳阿太菌（Athelia rolfsii）AY6657741。通过响应面分析试验确定其较适发酵条件为：培养温度29 ℃、pH 4.55、接种量7%、转速200 r/min、发酵培养5.5 d;较适培养基成分为：玉米淀粉35 g/L、玉米黄浆50 mL/L、NaNO3 3.1 g/L、KH2PO4 1.0 g/L、KCl 0.5 g/L、MgSO4•7H2O 0.25 g/L、柠檬酸1.4 g/L,结果表明,在最适条件下菌株粗多糖产量达16.135 g/L。     

重组乳酸克鲁维酵母产磷脂酶A2发酵条件的优化

利用重组乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）GG799表达磷脂酶A2,对其产酶发酵条件进行研究。采用单因素试验和正交试验对培养基及培养条件进行优化,确定了重组菌产酶的最佳发酵条件。结果表明：最优培养基组成为葡萄糖30 g/L、酵母粉20 g/L、蛋白胨30 g/L、KH2PO4 3 g/L;最优培养条件为：发酵温度30 ℃、接种量2%（V/V）、初始pH?7.0、装液量90 mL/250 mL三角瓶、摇床转速220 r/min,在此条件下发酵培养,酶活力由（1.87±0.12）U提高到（5.35±0.27）U。     

双孢蘑菇AS2796液体菌种培养基和培养条件的优化

通过单因素和正交试验对双孢蘑菇AS2796的培养条件和培养基进行了优化,优化后的培养基为蔗糖15.0g/L,玉米淀粉30.0g/L,蛋白胨2.0g/L,黄豆粉30.0g/L,MgSO4.7H2O 1.0g/L,KH2PO4 1.5g/L;培养条件:初始pH值为6.5,发酵温度25℃,时间7d,摇床转速180r/min,装液量50mL,接种量5%(v/v)。     

盖姆斯木霉分离鉴定及菌丝体发酵条件的研究

在对野生牛肝菌分离母种菌丝的过程中获得1株内生真菌（Trg-12）,经对其菌落、菌丝、孢子形态显微镜观察及rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分子生物学鉴定,明确其为盖姆斯木霉（Trichoderma gamsii）。进一步对菌株在综合马铃薯液态培养基中的菌丝量进行研究,采用L9（34）正交试验设计,接种量5%,发酵时间8 d时,对装液量、摇床转速、初始pH值及培养温度进行优化,结果显示：250 mL三角瓶装液量100 mL,摇床转速160 r/min,初始pH6,培养温度29℃,菌丝量为4.43 g/L。用平板对峙培养法测定该菌株与牛肝菌常见腐败菌尖孢镰刀菌和黄瘤孢菌的抑制率分别为（53.7±1.9）%和（74.7±1.6）%,表明牛肝菌内生真菌盖姆斯木霉Trg-12对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防治提供优良的菌株。     

木蹄层孔菌胞外多糖的深层培养工艺优化及体外抗氧化研究

从野生木蹄层孔菌子实体中分离得到药用真菌木蹄层孔菌。基于菌丝体生物量和胞外多糖的含量,通过正交优化确定了木蹄层孔菌深层培养的培养基及培养条件。结果表明,最适培养基配方为蔗糖10.0 g/L、蛋白胨5.0 g/L、CaCl_2 1.0 g/L、MgSO_4 0.25 g/L、V_(B2) 0.5 mg/L,培养条件为25℃,初始pH6.5,摇床转速150 r/min,培养时间为7 d。在此条件下,木蹄层孔菌多糖的产量为3.52g/L,比未优化前提高了4倍,通过检测确定木蹄层孔菌胞外多糖具有一定的体外抗氧化活性。     

色褐链霉菌产磷脂酶D的发酵条件研究

采用单因素试验,对色褐链霉菌产磷脂酶D(PLD)的发酵培养条件和培养基组成进行了优化。结果表明,色褐链霉菌摇瓶发酵最佳条件为:发酵周期7 d,发酵温度28℃,发酵培养基初始pH 6.0,接种量3%,发酵培养基装液量10 mL(100 mL三角瓶),摇床转速200 r/min;培养基最佳组成为:蛋白胨20.0 g/L,可溶性淀粉25.0 g/L,MgSO4.7H2O 0.5 g/L,CaCO3 1.0 g/L,Tween 8020.0 g/L。     

响应曲面法优化灵芝大盖G9菌丝体干重和胞外粗多糖的发酵条件

为了提高大盖G9的菌丝体量和胞外多糖的含量,在单因素试验基础上,考察培养基种类、培养时间、摇床转速和培养温度对菌丝体干质量和胞外粗多糖的影响,并通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法确定大盖G9的菌丝体和胞外粗多糖的最优发酵条件。结果表明,大盖G9在马铃薯培养基中培养,培养时间为10 d,摇床转速为122 r/min,培养温度在26.7℃下,菌丝体干重为1.0405 g/100 mL;而在马铃薯培养基中培养,培养时间为9.5 d,摇床转速为121 r/min和培养温度在30℃下,胞外粗多糖为1.0003 g/100 mL。采用优化工艺可以提高灵芝大盖G9的菌丝体干质量和胞外粗多糖的含量。     

一株冬虫夏草菌的液态发酵条件研究

以菌丝体干质量、胞内多糖含量及腺苷含量为评价指标,研究了一株冬虫夏草菌的液态发酵条件。确定利用葡萄糖蛋白胨液体培养基发酵生产菌丝体、胞内多糖及腺苷的最佳条件为装液量100 mL/500 mL,接种量3%,温度24 ℃,培养时间4 d,摇床转速140 r/min;试验得菌丝体干质量为17.232 g/L;胞内多糖含量为78.34 mg/g;腺苷含量为633.7 μg/g。     

葡萄状枝瑚菌菌丝液体培养条件优化

为了研究液体培养条件对葡萄状枝瑚菌菌丝生长量的影响,通过单因素实验和正交试验分别考察了碳源、氮源、无机离子组合、生长因子、培养基初始pH、培养温度、摇床转速和光照这8个因素对菌丝生长量的影响,结果表明,最佳培养条件为:在23℃、摇床转速为220 r/min时,培养基初始pH6.5,装瓶量50 mL/250 mL锥形瓶,接种量10%(V/V),全黑暗培养7 d,1 L液体培养最佳培养基为25 g可溶性淀粉,3.5 g酵母粉,4.4 g(1.2 g KH₂PO₄+1.6 g FeSO₄·7H₂O+1.6 g MgSO₄·7H₂O)无机离子,0.01 g VB₁,在此条件下葡萄状枝瑚菌菌丝生长量为(26.8±0.29)g/L。此研究结果为葡萄状枝瑚菌的液体发酵奠定了基础。     

响应面法优化镰刀霉菌JN158 产色素培养基

用Plackett-Burman试验设计和响应面法（response surface methodology,RSM）对镰刀霉菌JN158产色素的发酵培养基7种营养物质配比进行优化。结果表明：蔗糖、花生饼粉和FeSO4·7H2O的添加量显著影响色素产量;用最陡爬坡试验使这3个显著因素的添加量接近最大响应区域,优化后,镰刀霉菌产色素的培养基添加量分别为：蔗糖30.18 g/L、花生饼粉4.86 g/L、K2HPO4·3H2O 1 g/L、NaCl 0.5 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、CaCl20.5 g/L、FeSO4·7H2O 0.0122 g/L,预测的最大色素产量是1.268 g/L,验证实验得到的色素产量为（1.252±0.011）g/L,与预测值相近,优化后色素的产量是以前的2.9倍。     

响应面法优化链霉菌A0901产几丁质酶抑制剂的发酵条件

用响应面法优化链霉菌A0901产几丁质酶抑制剂的发酵条件,以提高几丁质酶抑制剂的产率。利用单因素试验筛选出最佳碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3。采用两水平Plackett-Burman法筛选出对产几丁质酶抑制剂有重要影响的3 个因素：可溶性淀粉、ZnCl2和培养温度,通过最陡爬坡试验逼近最佳响应面区域,最后通过中心组合试验设计,利用SAS软件进行回归分析,得到最佳发酵培养条件：可溶性淀粉3.76 g/100 mL、NaCl 0.05 g/100 mL、KNO30.1 g/100 mL、K2HPO4·3H2O 0.05 g/100 mL、MgSO4·7H2O 0.04 g/100 mL、ZnCl2 0.024 g/100 mL、FeSO4·7H2O 0.001 g/100 mL、初始pH 6、温度28.54 ℃、转速250 r/min。在最优培养条件下,发酵液对几丁质酶的抑制率达到67.58%,较原发酵培养基的几丁质酶抑制率提高36.8%。     

γ-氨基丁酸产生菌的筛选及培养基优化

采用纸层析法对南京地区多个不同场所采集的土样进行了菌种分离纯化,筛选到一株产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）的菌株X-1,经形态特征与16S rDNA序列分析鉴定为巨大芽孢杆菌。通过单因素和正交试验对其发酵培养基进行优化,得到最佳培养基成分为葡萄糖30.0 g/L、蛋白胨30.0 g/L、K2HPO4 0.6 g/L、磷酸吡哆醇0.3 g/L、L-谷氨酸钠10.0 g/L、NaNO3 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L。在此条件下,GABA浓度可达21.57 mmol/L,比优化前GABA浓度提高了3.83 倍。     

响应面法优化枯草芽孢杆菌产γ-聚谷氨酸发酵工艺

以1 株谷氨酸依赖型γ-聚谷氨酸（poly-γ-glutamic acid,γ-PGA）产生菌Bacillus subtilis GXA-28为研究对象,利用响应面法系统优化其γ-聚谷氨酸发酵培养基成分。通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验以及Box-Behnken试验构建响应方程,利用该方程预测得到最优培养基：蔗糖33.65 g/L、酵母膏0.4 g/L、NH4Cl 1.6 g/L、谷氨酸钠15 g/L、 KH2PO4 0.4 g/L、K2HPO4·3H2O 1.68 g/L、MgSO4·7 H2O 0.1 g/L、MnSO4·H2O 0.04 g/L。利用优化培养基,在40.2 ℃、160 r/min条件下摇瓶发酵22 h,γ-PGA产量达到16.63 g/L,底物谷氨酸钠转化率比优化前提高了20%,达到100%。     

米根霉发酵产L-苹果酸的工艺优化

以米根霉（Rhizopus oryzae）突变株CICC40503-JST为菌种,葡萄糖为碳源,对其发酵工艺及葡萄糖代谢途径进行初步研究,从而提高L-苹果酸的产量。采用单因素试验和响应曲面法（Box-Behnken设计）对培养基和发酵条件进行优化,研究发酵罐实验对产酸的影响。结果获得最佳培养基配方为：葡萄糖100 g/L、(NH4)2SO4 4.0 g/L、MgSO4 0.3 g/L、FeSO4•7H2O 0.025 g/L、KH2PO4 0.5 g/L、ZnSO4 0.1 g/L、CaCO3 80 g/L。发酵条件较好组合为：发酵设备为Sartorius发酵罐、发酵温度32 ℃、通气量0.20 L/（min·L）、转速500 r/min、孢子悬浮液单独培养48 h、发酵进行48 h后添加培养基进行补料发酵,发酵周期为72 h、L-苹果酸的产量为57.71 g/L。结论：米根霉能够较好地利用葡萄糖发酵产L-苹果酸,其产量得到明显提高。     

产褐藻胶裂解酶菌种的筛选、鉴定及发酵条件优化

以褐藻酸钠为唯一碳源,经多次富集和驯化,从养殖场腐烂海带中筛选到一株高产褐藻胶裂解酶的菌株Alg07。依据菌体形态、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,归属于芽孢杆菌属（Bacillus）,命名为Bacillusweihaiensis Alg07。通过单因素试验和正交试验,确定菌株Alg07的最佳发酵产酶培养基成分：褐藻酸钠9 g/L、蛋白胨1 g/L、酵母粉3 g/L、NaCl 5 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、KCl 5 g/L、CaCl2 4 g/L;最佳发酵产酶条件为：250 mL三角瓶装液量40 mL、培养温度30 ℃、初始发酵pH 6.5、接种量0.5%、摇床转速180 r/min、培养时间24 h。在优化后的培养条件下,褐藻胶裂解酶活力由35 U/mL提高到563 U/mL。     

Effect of cycling temperatures on the production of deoxynivalenol and zearalenone by Fusarium graminearum NRRL 5883

The effects of three regimens of cycling incubation temperatures and incubation at constant 25 degrees C on the growth of Fusarium graminearum NRRL 5883 and production of deoxynivalenol (DON) and zearalenone (ZEN) on rice were compared. The effects of low-temperature stress were also studied by incubating rice cultures at a constant 15 degrees C for 4 weeks following incubation at constant 25 degrees C for 2 weeks. Both incubation temperature and time significantly (P < or = 0.05) affected growth of F. graminearum NRRL 5883 and production of DON and ZEN. The highest amount of free ergosterol (640 microg/g culture material) that was used as a measure of fungal growth was found in cultures incubated at temperatures cycling between 15 and 30 degrees C during a 6-week period. The highest amounts of DON (1,679 microg/g culture material) and ZEN (603 microg/g culture material) were produced in cultures incubated at a constant 25 degrees C for 2 weeks prior to incubation at a constant 15 degrees C for an additional 4 weeks. Under cycling incubation temperatures, maximum amounts of DON (850 microg/g culture material) and ZEN (98 microg/g culture material) were produced in cultures incubated at temperatures cycling between 15 and 30 degrees C for 6 weeks. Overall, there was no correlation between mold growth and production of either DON or ZEN. However, DON production and ZEN production were correlated.     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化产物的培养提取及制备

以禾谷镰刀菌Fusarium graminearum大型分生孢子定量接种大米培养物,制备毒素粗提液,采用硅胶柱一步洗脱分离、分段收集可同时获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）和乙酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇（acetyldeoxynivalenol,AcDON）,采用一步结晶法即可分别制备获得毒素纯品,并经红外光谱法、液相色谱-质谱联用技术及核磁共振氢谱等分析确证,液相色谱分析表明两种毒素纯度均大于98%。该培养提取及分离制备方法改变了常规多步骤繁琐过程,提供了一种切实有效的、大量制备纯化DON及乙酰化DON毒素的简便方法。     

响应面法优化假丝酵母Y6产γ-氨基丁酸发酵工艺

从火龙果果实表面上筛选出一株发酵产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)假丝酵母菌菌株Y6(Candida sp.)。用反相高效液相色谱测定发酵液中GABA含量。响应面试验确定其最适培养基成分为:蔗糖23 g/L、麸皮65 g/L、L-谷氨酸6 g/L、磷酸吡哆醛0.5 mmol/L。最适培养条件为初始p H 4.5、培养温度28℃、转速200 r/min、培养时间3.5 d。结果表明:优化之后GABA的产量提高了72%。