自腹泻病例和家用冰箱分离的小肠结肠炎耶尔森菌病原特征分析

目的研究自腹泻病例和家用冰箱中分离的小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,Ye)的病原学特征,为科学防控Ye的污染提供依据。方法采集2017年北京市顺义区2家哨点医院肠道门诊腹泻患者病例粪便标本和顺义区83户家用冰箱中的涂抹拭子样品,对分离的Ye进行毒力基因、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型检测和耐药试验。结果腹泻病例粪便标本中Ye阳性率为0.27%(1/372),家用冰箱中Ye阳性率为6.02%(5/83);冰箱分离株仅携带ystB基因,腹泻病例分离株携带ail、ystA、virF、yadA基因;腹泻病例和冰箱分离株PFGE带型亲缘关系较远。全部Ye对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢唑林均耐药,腹泻病例分离株对萘啶酸耐药。结论 Ye在北京市顺义区腹泻病例中流行强度不高,家用冰箱受Ye污染较为严重,腹泻病例和冰箱中分离的Ye病原学特征具有一定差异。     

2019年江苏省部分地区儿童腹泻沙门氏菌的感染率及耐药状况研究

目的 了解江苏省部分地区2019年5岁以下食源性腹泻儿童中沙门氏菌感染的流行病学特征、血清分布及耐药性。方法 从江苏省各设区市哨点医院肠道门诊采集食源性腹泻患儿粪便标本,按照江苏省食源性疾病监测方案进行细菌的分离与鉴定、血清分型,用微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果共收集3582份腹泻儿童粪便,沙门氏菌的检出率为2.9％,1～2岁患儿居多。全年均有检出,夏季高发。共有24种血清型的沙门氏菌,优势血清型为鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌,分别占41.9％和18.1％。耐药检测结果显示,沙门氏菌对红霉素的耐药率最高,达96.1%。其次为氨苄西林、氨苄西林/ 舒巴坦、萘啶酸和四环素,分别为67.5%、56.6%、53.5%和51.3%;对甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲噁唑、氯霉素和环丙沙星呈现中度耐药,耐药率分别为33.3％,31.6％和26.8％;对一、二、三代头孢类抗生素的耐药率有显著性差异。对阿奇霉素和亚胺培南的耐药率较低,为7.5％和2.6％。多重耐药率达72.4％。结论 江苏省部分地区腹泻儿童沙门氏菌感染以1～2岁高发,男孩多于女孩。主要血清型是鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌,多重耐药现象严重,在临床用药时应选择较为敏感的药物。     

北京市售鸽肉中大肠杆菌和沙门氏菌分离鉴定及耐药性分析

目的对北京市售鸽肉中大肠杆菌和沙门氏菌进行分离鉴定,并对分离菌株进行抗生素耐药性分析。方法使用缓冲蛋白胨水增菌液淋洗肉鸽样品后,使用大肠杆菌(E.coli,EC)增菌肉汤和丹麦国家血清研究院(Statens Serum Institute, SSI)肠道细菌琼脂分离大肠杆菌,使用四硫磺酸盐(tetrasulfonate, TT)增菌肉汤和木糖赖氨酸脱氧胆盐(xyloselysinedeoxycholate,XLD)琼脂平板分离沙门氏菌,使用生化鉴定进行可疑菌确认。参照CLSI2016版推荐的肉汤稀释法,测定15种抗生素对所分离大肠杆菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度(minimalinhibitory concentrations,MICs)。结果样品(n=200)中大肠杆菌(n=104)检出率为52.0%,沙门氏菌(n=41)检出率为21.0%。所分离的42株沙门氏菌菌株均对头孢他啶、氨曲南、厄他培南和替加环素敏感,对氨苄西林、萘啶酸、环丙沙星、四环素、复方新诺明和氯霉素的耐药率在30%以上,部分菌株对头孢噻肟(4.8%)和黏菌素(2.4%)耐药。所分离的104株大肠杆菌菌株均对替加环素敏感,对氨苄西林、头孢噻肟、氨曲南、萘啶酸、环丙沙星、四环素、复方新诺明、氯霉素和卡那霉素的耐药率在30%以上,部分菌株对头孢他啶(2.9%)、厄他培南和(1.0%)和黏菌素(9.6%)耐药。结论北京市售鸽肉是耐药大肠杆菌和沙门菌的重要储存库,相较于我国其他地区市售猪肉,鸡肉,牛肉等分离的耐药菌株,表现出不同的耐药谱,耐药率相对较低,但是北京市售鸽肉所携带的菌株已经累积了复杂的耐药特征,有必要对其中存在的耐药机制进行系统研究。     

食品动物源沙门氏菌血清型及对β-内酰胺类耐药性调查

为了解我国食品动物源沙门氏菌血清型分布和对β-内酰胺类药物耐药情况。采用玻片凝集法和微量肉汤稀释法,对710株分离自食品动物源沙门氏菌进行了血清型鉴定和10种β-内酰胺类药物的敏感性实验。结果表明:710株沙门氏菌有15种血清型,主要血清型为鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)、德尔卑沙门氏菌(S.derby)、吉韦沙门氏菌(S.give)和菲利斯河沙门氏菌(S.fyris);菌株对10种β-内酰胺类药物呈不同程度的耐药性(耐药率13.66%~58.03%),66.19%菌株对3种及以上药物同时耐药,耐药谱型复杂;菌株分离年代与耐药率无明显相关性,但整体上菌株对该类药物耐药率随时间延长呈上升趋势;耐药现象广泛存在于各种血清型,其中鸡白痢沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、沙拉姆沙门氏菌和默尔斯沙门氏菌耐药菌株所占比例高达100%。以上结果说明,我国食品动物源沙门氏菌血清型呈多样性,对β-内酰胺类药物耐药现象严重,临床应谨慎使用该类药物,各动物中非致病性血清型菌株耐药现象严重,值得关注。     

新疆库尔勒市鸡肉源沙门氏菌的分离鉴定及 耐药性分析

目的了解新疆库尔勒市鸡肉沙门氏菌污染状况和沙门氏菌分离株对常用抗菌药物的耐药性。方法参考食品安全国家标准GB 4789.4-2010,利用生化反应与普通PCR方法结合进行沙门氏菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法进行常见抗菌药物敏感试验。结果 180份鸡肉样品共检出沙门氏菌阳性样品27份,分离鉴定到阳性沙门氏菌28株,污染率为15.00%;10种抗生素药物敏感试验表明:沙门氏菌分离菌株对甲氧苄啶的耐药率高达100%,氯霉素为89.30%、磺胺异噁唑为85.70%,四环素为78.60%、氨苄西林为71.40%、阿莫西林为71.40%、链霉素为64.30%、环丙沙星为53.60%,对诺氟沙星和氟苯尼考的耐药率低于50%,分别为32.10%和25.00%。结论新疆库尔勒市鸡肉中沙门氏菌存在一定程度的污染,耐药状况比较严重。     

肉鸡屠宰加工过程中沙门氏菌的污染情况及其耐药性分析

目的：了解四川某肉鸡屠宰加工过程不同环节沙门氏菌的污染情况、耐药性和耐药谱,为食品安全和临床用药提供理论依据。方法：根据GB 4789.4-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》、沙门氏菌科玛嘉显色培养基筛选疑似沙门氏菌,并针对沙门氏菌invA和hut基因的二重PCR方法对疑似沙门氏菌鉴定,再用纸片扩散法对其分离株进行10 种抗菌药物（组合）的药敏实验,参考临床和实验室标准化研究所（Clinical andLaboratory Standards Institute,CLSI）标准（2010）判定药敏结果。结果：从1 350 份样品中,分离鉴定出156 株沙门氏菌;肉鸡屠宰前沙门氏菌的污染率为13.53%;烫毛脱毛、开肛、净膛、冲淋4 个环节鸡胴体和分割鸡肉、冷冻鸡肉沙门氏菌的污染率分别为0、7.23%、9.80%、11.54%、14.50%、9.33%。沙门氏菌分离株对萘啶酸（100.00%）和氨苄西林（85.90%）的耐药率最高,对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑（44.23%）、庆大霉素（39.10%）、四环素（35.26%）的耐药率较高,对头孢曲松敏感,多重耐药率为53.85%,共有39 种耐药谱,从肉鸡屠宰前到分割鸡肉沙门氏菌分离株的耐药谱型先下降再上升。结论：四川某肉鸡屠宰生产链中沙门氏菌的污染率及其耐药情况比较严重,且可能存在从上游向下游生产链传播的情况,需要加强卫生和抗菌药物使用监督。     

武汉地区食源性沙门氏菌耐药特征分析

目的分析武汉市售肉类中分离的82株沙门氏菌的药物敏感性及耐药基因。方法根据美国临床和实验室标准协会(Clinical&Laboratory Standards Institute,CLSI)相应标准获得沙门氏菌耐药实验种类和浓度,定制药敏板,采用最低抑菌浓度法(minimum inhibitory concentration,MIC)进行药敏实验,并通过PCR方法检测耐药基因的携带情况。结果药物敏感性试验结果显示,82株沙门氏菌对四环素耐药率最高,有66株菌株对四环素耐药,耐药率高达79.52%,对复方磺胺和氨苄西林的耐药率较高,耐药率分别为49.40%和48.19%;对头孢类药物的耐药率较低,对亚胺培南未表现出耐药性。耐药基因检测结果显示,82株沙门氏菌中四环素耐药基因tetA的检出率最高,且有54株沙门氏菌携带多重耐药基因,头孢类药物耐药基因blaCTX检出率较低,仅为3.66%。结论武汉市食源性沙门氏菌耐药情况较为严重,部分常见抗生素耐药性较高,对临床用药治疗和食源性病菌预防造成巨大的影响。     

生鲜猪肉中沙门氏菌的分离、鉴定及耐药性检测

调查本地区生鲜猪肉中沙门氏菌的污染情况及耐药性情况,为进一步对肉及肉制品中耐药性沙门氏菌的风险评估奠定基础。采集超市和集贸市场的生鲜猪肉,采用实时荧光定量PCR对生鲜猪肉中沙门氏菌污染进行初筛,然后根据沙门氏菌检验国家标准进行分离鉴定,并对分离到的沙门氏菌进行耐药性检测。结果从83份肉样中分离到21株沙门氏菌,沙门氏菌检出率为25.3%。21株沙门氏菌中有7株对11种抗生素中的至少一种产生耐药性,耐药率33.3%。结果表明本地区生鲜猪肉微生物污染较为严重,沙门氏菌检出率较高且四环素耐药严重;另外在菌落总数和沙门氏菌检出率方面冷却肉的质量好于热鲜肉,超市和集贸出售的肉的质量无显著差异。     

生猪屠宰环节沙门氏菌携带状况、耐药性及其耐药基因分析

目的 调查河南省生猪屠宰环节沙门氏菌污染情况, 并分析其耐药性及耐药基因。方法 本研究从河南省不同规模的生猪屠宰企业共采集825份样品, 通过常规检测方法和分子生物学技术对样品进行沙门氏菌分离鉴定, 然后通过药敏实验检测沙门氏菌分离株对17种抗菌药的敏感性; 对部分沙门氏菌分离株进行了12种耐药基因检测。结果 样品中共分离出沙门氏菌241株, 总分离率为29.21%; 所有受试沙门氏菌分离株均对阿米卡星敏感, 而对多西环素耐受性最强(耐药率为95.00%), 其次对其他抗菌药都表现出不同程度的耐受性; 上述分离株存在着严重的多重耐药问题, 其中耐3种及以上药物的菌株占比高达98.34%。耐药基因检测结果显示, 受试菌株均含有针对全部5大类受试药物的抗性基因, 但aac(3)-Ⅰa、gurA、tetB 3个耐药基因均未有检出。结论 河南省生猪屠宰企业存在严重的沙门氏菌污染情况, 且菌株存在严重的耐药性。     

合肥市售鸡蛋壳表面与内容物沙门氏菌污染的 检测及其分离株耐药性分析

目的 了解市售鸡蛋壳表面、内容物中沙门氏菌的污染情况及分离菌株的血清型分布与耐药性。方法 采用沙门氏菌常规检测法并结合PCR技术, 对采自合肥市农贸市场、超市的100枚鸡蛋进行检测; 利用国标法和K-B 纸片法对分离株进行血清型鉴定和抗生素药物敏感试验。结果 蛋壳表面沙门氏菌检出率为10%(10/100), 蛋内容物沙门氏菌检出率为1%(1/100); 11株沙门氏菌分离株血清型均为鸭沙门氏菌; 14种抗生素药物敏感试验中, 对青霉素100%耐受, 链霉素18.2%耐药, 36.4%中等耐药率, 其余抗生素均敏感。 结论 合肥市售鸡蛋壳表面的沙门氏菌检出率高于蛋内容物, 抗生素选择压力导致不同地区沙门氏菌分离株的血清型和耐药性有所不同。     

2015—2020年安徽省腹泻病人沙门菌血清型分布及耐药性研究

目的 了解安徽省近年来沙门菌(Salmonella)的血清型分布及耐药特性,为本省沙门菌引起腹泻病的诊断和治疗提供科学依据。方法 对2015—2020年来自安徽省16个地市食源性疾病主动监测腹泻病例中分离出的980株沙门菌进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性实验。结果 980株沙门菌分为82种血清型,优势血清型为肠炎沙门菌[31.43%(308/980)]、鼠伤寒沙门菌[26.22%(257/980)]、阿贡纳沙门菌[7.35%(72/980)]、汤卜逊沙门菌[6.63%(65/980)]和伦敦沙门菌[3.37%(33/980)]。沙门菌对氨苄西林(AMP)、萘啶酸(NAL)、四环素(TET)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)耐药率较高,分别为62.35%、47.96%、47.86%、43.16%;对AMP、AMS、NAL、头孢西丁(CFX)、阿奇霉素(AZM)耐药率呈现明显上升趋势(P＜0.05)。沙门菌耐药性呈现区域性特点,皖北地区耐药情况较皖中、皖南更加严重。多重耐药率达40.41%,鼠伤寒沙门菌、伦敦沙门菌多重耐药严重。结论 2015—2020年安徽省腹泻病人沙门菌血清型主要为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、阿贡纳沙门菌、汤卜逊沙门菌和伦敦沙门菌。菌株耐药情况较严重,且对多数抗生素耐药率呈上升趋势,多重耐药水平较高。需密切关注并持续对本地区沙门菌的耐药情况进行监测。     

腹泻患儿粪便中沙门菌的血清型、药敏分析及脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 研究2019年北京市朝阳区0-10岁腹泻患儿粪便中分离出的沙门菌的血清型、PFGE分子分型研究及耐药特点。方法 对分离自腹泻患儿病例的47株沙门菌进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行27种抗生素的药敏实验;采用PFGE脉冲场凝胶电泳进行指纹图谱分型研究。结果 47株沙门分为9种血清型,优势血清型两种,分别为肠炎沙门菌23株占48.94%,鼠伤寒沙门菌14株占29.79%。47株沙门菌对磺胺异恶唑耐药率(57.45%)最高,其次为氨苄西林(48.94%)和链霉素(48.94%)。23株肠炎沙门菌可分成8个PFGE指纹图谱,15株鼠伤寒沙门菌可分成14个PFGE指纹图谱。结论 北京市朝阳区0-10岁儿童食源性沙门菌血清主要为肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌,各血清型的耐药性有所不同,PFGE指纹图谱呈多样性。     

四川部分地区鸭蛋沙门氏菌的分离鉴定及药敏实验

为了解四川部分地区不同饲养方式的鸭蛋沙门氏菌（Salmonella spp.）污染与耐药情况,本实验采集了集约化养殖（50枚）和农户散养（50枚）的100枚鸭蛋,采用国家标准GB 4789.4-2010对其蛋壳及内容物进行沙门氏菌检测,同时进行血清型鉴定和药物敏感实验。结果发现散养鸭蛋的蛋壳和内容物沙门氏菌污染率分别为28%和30%;集约化养殖的蛋壳污染率为24%,蛋内容物无污染。血清凝集实验共检测出8种血清型,流行菌株为鼠伤寒沙门氏菌（34.1%）,其次为肠炎沙门氏菌（22%）和鸭源沙门氏菌（14.6%）,其余菌株检出率较低。分离得到的41株沙门氏菌对青霉素（100%）、氨苄西林（87.80%）、阿莫西林（75.61%）、四环素（73.17%）耐药率较高,对链霉素呈现中等敏感,对其余抗生素表现不同程度的耐药。研究结果表明四川地区鸭蛋沙门氏菌污染情况和耐药性已较为严重,应加强沙门氏菌流行病学监测和抗生素的使用监管。      

青藏高原部分地区自由放牧与舍饲育肥牦牛食源性致病微生物污染的差异

肉中的致病微生物污染是危害人类健康的重要因素。本研究采集了青藏高原部分地区无腹泻症状的放牧型牦牛样品155份,舍饲育肥型牦牛样品122份,对其粪便及各组织中沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌进行分离,并对沙门氏菌进行血清学鉴定和抗生素药敏实验。结果发现,2种饲养方式下,牦牛组织病原微生物携带率统计学上无显著差异(P0.05),但放牧型牦牛的检出率绝对值都略高于舍饲育肥型牦牛;2种不同饲养方式的牦牛样品中分离出的沙门氏菌血清型差异较大,舍饲育肥型和放牧型牦牛肌肉中检出的血清型分别为纽波特沙门氏杆菌和肠炎沙门氏杆菌,放牧型牦牛粪便中的沙门氏菌为鼠伤寒沙门氏杆菌、肠炎沙门氏杆菌和圣保罗沙门氏菌,而舍饲育肥型牦牛仅有都柏林沙门氏菌;舍饲育肥型和放牧型牦牛源沙门氏菌对抗生素耐药性规律基本一致,对林可霉素(83.33%、81.82%)、四环素(66.67%、63.64%)和麦迪霉素(66.67%、72.73%)具有较高的耐药性。从实验结果可以得出,放牧型牦牛的微生物安全性和舍饲育肥型牦牛一致,沙门氏菌对抗生素的耐药性都较为严重。     

2004—2012年北京出入境口岸食品及饲料中沙门菌血清分型研究

目的 掌握2004—2012年北京出入境口岸食品和饲料中沙门菌的血清型分布。方法 对65株分离自2004—2012年北京出入境口岸食品及饲料中的沙门菌以及13株中国医学细菌菌种保藏管理中心(CMCC)的参比菌株,共78株沙门菌进行血清分型鉴定。结果 65株沙门菌分离株中有4株沙门菌未能鉴定血清群,其他61株沙门菌分属于9个群,38个血清型,其中B群和C1群较多,分别占29.2%(19/65)和26.2%(17/65)。分离出7株阿贡纳沙门菌,占分离株的10.8%(7/65);2株肠炎沙门菌,占分离株的3.1%(2/65)。本实验室首次分离出1株斯特拉福德沙门菌。结论 北京出入境口岸食品及饲料中的沙门菌血清群及血清型众多且分布广泛,开展沙门菌血清型监测,为预防北京市食源性疾病提供科学依据。     

中山市540株腹泻病例沙门菌血清型分布和耐药分析

目的研究2016—2017年中山市腹泻病例沙门菌血清型分布和耐药性。方法对2016—2017年中山市腹泻病例沙门菌监测分离的540株菌株进行血清学分型,并采用微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果 540株沙门菌涵盖59种血清型,两年有22种共同血清型,优势血清型为鼠伤寒沙门菌单相变体(41.9%,226/540)、肠炎沙门菌(13.1%,71/540)、鼠伤寒沙门菌(9.3%,50/540)和斯坦利沙门菌(9.3%,50/540),共占菌株总数的73.5%(397/540)。药敏结果显示沙门菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦和四环素的耐药率均50.0%,对头孢类抗生素的耐药性差异较大,头孢唑啉、头孢噻肟、头孢他啶和头孢西丁的耐药率分别为34.1%(184/540)、25.7%(139/540)、12.2%(66/540)和1.5%(8/540);所有菌株均对亚胺培南敏感,斯坦利沙门菌对6种抗生素敏感;菌株多重耐药率达65.4%(353/540),4种优势血清型中鼠伤寒沙门菌单相变体、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、斯坦利沙门菌的多重耐药率分别为82.7%(187/226)、56.3%(40/71)、72.0%(36/50)、16.0%(8/50)。结论中山市腹泻病例沙门菌血清型呈生物多样性,菌株多重耐药率较高,其中鼠伤寒沙门菌单相变体耐药情况最严重,应引起重视。     

四重荧光定量PCR法鉴定肠炎、鼠伤寒以及伤寒沙门氏菌

目的建立四重荧光定量PCR体系鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。方法针对沙门氏菌属特异性ompC基因、肠炎沙门氏菌sdf基因、鼠伤寒沙门氏菌STM4495和伤寒沙门氏菌STY2021序列设计引物和TaqMan探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究。结果 28株不同血清型的沙门氏菌均扩增出ompC基因,其他13株非沙门氏菌均未出现ompC的非特异性扩增。sdf、STM4495、STY2021的探针和引物分别特异性扩增出肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌,而25株其他血清型沙门氏菌以及13株非沙门氏菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系的最低检测限分别为48 pg/mL(ompC)、560 pg/mL(sdf)、530 pg/mL(STM4495)、35 pg/mL(STY2021)。结论该方法特异好、灵敏高、能够快速检测沙门氏菌并鉴定肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌以及伤寒沙门氏菌。     

内蒙古呼和浩特地区鸡源沙门氏菌分离鉴定、血清学鉴定及耐药性研究

目的 了解内蒙古呼和浩特地区市售整鸡的沙门氏菌污染状况,为建立食物污染及公共卫生安全提供数据支持。方法 2011～2012年仍呼和浩特地区采集冷冻、冷藏和现宰杀整鸡样品,迚行沙门氏菌的定性检测、血清分型及耐药性研究。结果 不同状态整鸡样品的沙门氏菌携带率明显不同,冷藏整鸡沙门氏菌检出率显著高于冷冻和现宰杀整鸡。血清型主要为肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。36株沙门氏菌均对头孢替坦、亚胺培南最为敏感,对氨苄西林、哌拉西林、呋喃妥因、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林等表现出不同程度的耐药性,多重耐药菌株中五耐最为严重(25%)。结论 内蒙古呼和浩特地区鸡肉中的沙门氏菌多重耐药现象比较严重。