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利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40 ℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4~60 ℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH3.5~8.5范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于60%,酸碱稳定性优于游离酶。反应进程试验结果表明,2 h时海藻糖得率达最大,为61.4%。 相似文献
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采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶,对载体进行筛选,以酶活力为指标,采用响应面法优化固定化条件,并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明:以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为:pH3.9,酶与载体比例为9.1mg/g,吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g,酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃,最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL,高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高,其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。 相似文献
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改性磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶 总被引:1,自引:0,他引:1
通过反相悬浮聚合法,以甲基丙烯酸2-羟乙酯(HE-MA)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,过硫酸铵为引发剂制备得到改性磁性壳聚糖微球。进一步以改性磁性壳聚糖微球为载体,通过吸附、共价结合以及戊二醛交联反应三方协同作用固定乳糖酶。对影响固定化的各种因素进行优化,确定固定化乳糖酶最适条件为:载体在0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸缓冲液中充分溶胀后,按2.0 U/mg载体的添加量加入乳糖酶,4℃吸附3 h,再添加0.1%戊二醛交联4 h;最终所得的固定化乳糖酶活为685 U/g载体,酶活回收率为34.3%。固定化后的乳糖酶的pH稳定性和热稳定性都较游离酶有明显提高;连续操作10次后,固定化酶活仍保持在70%以上,具有良好的操作稳定性。 相似文献
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通过共沉淀法和溶胶-凝胶法制备了Fe3O4-Si O2磁性纳米粒子,将Fe3O4-Si O2磁性纳米粒子表面进行氨基化修饰得到磁性纳米复合载体,用扫描电子显微镜和傅里叶变换红外光谱对载体进行了表征。通过考察加酶量、戊二醛浓度,固定化时间和温度等因素对蛋白固载率和脂肪酶活力的影响,获得了脂肪酶固定化的最适条件。在0.02g/m L脂肪酶液加入量为8.30m L,戊二醛浓度为8.20%时,在温度24℃条件下,固定化4h,制备的固定化脂肪酶酶活3449U/g。 相似文献
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采用化学共沉淀法,制备了Fe3O4粒子,并将带正电荷的PDDA吸附在其表面,形成PDDA-Fe3O4磁性复合体。为提高葡萄糖氧化酶的稳定性和重复利用率,以自制的PDDA-Fe3O4磁性复合体为载体,通过静电引力来固定葡萄糖氧化酶。研究结果表明,PDDA-Fe3O4磁性载体表面的Zeta电位为47.6mV,载体平均粒径为275d.nm。葡萄糖氧化酶固定化最佳条件为:温度15℃,pH=6,酶与载体质量比为15mg/g。固定化酶的热稳定性、pH稳定性及重复使用性能都有很大的提高。 相似文献
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以价格低廉的无纺布为固定化载体,添加聚丙烯酸酯作为交联剂,生产固定化脂肪酶。这种固定化方法对脂肪酶的纯度等性质要求不高,制备工艺操作简单。交联剂对酶液的活力没有影响,且具有一定的成膜特性,能够为脂肪酶分子催化提供良好的微环境。固定化脂肪酶酶活损失较少,在25%以内。制备的固定化脂肪酶在棕榈酸异辛酯酯化反应体系可以重复催化达到47批次,酯化率在80%以上;在酯交换生产脂肪酸甲酯反应体系可以连续反应25批次,转酯化率在90%以上。 相似文献
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壳聚糖涂层法固定化脂肪酶的研究 总被引:5,自引:1,他引:5
研究了壳聚糖涂层在纤维素滤纸上成膜后再固定化猪胰脂肪酶的最佳条件。结果表明,当戊二醛浓度为5%,活化12h,与pH7.6的酶的磷酸盐缓冲溶液于室温(15℃)交联12h,获得的固定化酶活最高,为0.26U/cm2。固定化酶最适温度40℃,比游离酶提高了5℃;最适pH8.5,与游离酶相比,向碱性偏移了0.5个pH 相似文献
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以复合修饰的纳米超顺磁性Fe3O4颗粒聚集体为载体固定化α-淀粉酶,比较分析固定化α-淀粉酶及游离α-淀粉酶的酶学性能。研究固定化及游离α-淀粉酶的最适温度、最适p H、操作稳定性及基本动力学等。结果表明,固定化α-淀粉酶最适p H为7,最适温度为60℃。固定化α-淀粉酶与游离α-淀粉酶相比,具有更好的温度和酸碱的耐受性。固定化α-淀粉酶重复催化反应10次,相对酶活力仍剩余72.09%,重复操作的半衰期为18.97次,具有良好的操作稳定性。固定化α-淀粉酶的米氏常数Km值为45.31 mg/m L,亲和性弱于游离α-淀粉酶。 相似文献
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研究了高碘酸钠氧化法在纤维素滤纸膜载体上固定化磷脂酶A1的最佳条件。结果表明,以固定化酶活力为指标,当高碘酸钠浓度为0.15mol/L,活化80min,与浓度为0.05g/mL酶的磷酸盐缓冲溶液(pH为5.8)于戊二醛浓度0.4%、温度4℃交联4h,获得的固定化磷脂酶A1酶活最高为4.8U/cm2。固定化酶膜的酶学性质为:最适温度35℃;最适pH为9.0。与游离酶相比,pH向碱性偏移1.0;经7次重复使用后,固定化酶膜活力为原酶活的65%以上。SEM结果显示,经高碘酸钠氧化后的纤维素滤纸膜能较好地固定磷脂酶A1。 相似文献
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脂肪酶膜固定化方法的研究 总被引:8,自引:2,他引:8
研究了以纤维素滤纸膜为载体的猪胰脂肪酶的四种固定方法,优化了固定化条件。结果表明,在适宜条件下,高磺酸钠氧化法获得的固定化酶活最高,达0.52u/cm^2,酶活回收率为20%。 相似文献
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采用磁性纳米Fe3O4为磁源,壳聚糖(Chitosan,CS)为高分子聚合物,利用凝聚/沉淀法制备磁性壳聚糖复合微粒(Fe3O4/CS),并进行了IR、VSM表征和粒度测试。采用交联结合法,以磁性Fe3O4/CS微粒为载体固定了超氧化物歧化酶(SOD)。研究了加酶量、固定化时间、pH、交联剂用量等对SOD固定化的影响。用正交实验法确定了SOD固定化的最佳条件:加酶量100mg,固定化时间240min,pH6.5,w=25%戊二醛用量0.20mL。固定化SOD重复使用4次后的酶活性及回收率仍能达到376U/g、56.5%,重复使用性能良好。 相似文献
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新型交联剂三羟甲基磷固定化脂肪酶的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
本试验研究了一种新型交联剂三羟甲基磷(THP)用于以纯棉浴巾载体、聚乙烯亚胺(PEI)为吸附剂的固定化脂肪酶制备新方法。通过单因子实验获得了固定化条件为:0.2 g浴巾使用0.5 mLPEI(浓度3.37 mg/mL,pH 7.0)、2 mLTHP(浓度为0.10%,V/V)、固定化温度为40℃、交联时间为20 min。制备的固定化脂肪酶催化正丁酸乙烯酯与戊醇酯交换反应,1 h底物转化率达92.1%,酶比活力达到15.80 U/g固定化酶。与戊二醛(GA)交联法制备的固定化酶相比,本固定化酶具有良好的重复使用稳定性、温度稳定性和高比活力,本试验采用的方法是一种低成本、实用性强的脂肪酶固定化新方法。 相似文献