酿酒酵母纤维二糖代谢途径的搭建

酒糟中存在着一些未能被酵母消耗的糖，含量较高的如纤维二糖、蜜二糖等，有效利用酒精发酵过程中产生的纤维二糖，具有一定理论和实际意义。采用异硫氰酸胍一酚一氯仿法提取里氏木霉总RNA，分离poly A^ mRNA，通过RT-PCR方法扩增得到β-葡萄糖苷酶基因。构建了重组质粒pYX-BGL，并在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W303-1A中获得表达，得到的转化子能以纤维二糖为唯一碳源生长。     

CRISPR/Cas9介导的果糖低消耗酿酒酵母工程菌的构建

利用酿酒酵母为宿主,以果糖为原料合成D-阿洛酮糖具有食品方面的先天优势。为了减少酿酒酵母宿主本身对果糖的消耗,对酿酒酵母的己糖激酶同工酶2(Hexokinaseisoenzyme2,hxk2)基因进行编辑。本研究采用CRISPR/Cas9技术,构建了Cas9和gRNA共表达质粒p YES2-CG-Δhxk2,以酿酒酵母BY4741为出发菌株,URA3为筛选标记,采用高效电击转化法和胞内同源重组技术,获得hxk2基因缺陷株BY4741-Δhxk2。在此基础上,进行果糖发酵实验以评估突变菌株的果糖消耗速率。实验结果显示,发酵培养14 h时,缺陷株BY4741-Δhxk2果糖消耗速率为3.35 mg/h;与野生型菌株相比其下降了6.42%。此外,发酵培养22 h,BY4741-Δhxk2的OD600nm值为8.65,相比于野生型提高了6.40%。研究表明,己糖激酶hxk2基因的缺陷编辑可以一定程度降低酿酒酵母对果糖的利用,同时缺陷株较野生型表现出一定的生长优势,这为后续以酿酒酵母为宿主生产D-阿洛酮糖奠定了初步基础。     

酿酒条件对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响

研究酿酒条件(氧气、pH值、温度、糖和乙醇等)对两株商业酿酒酵母β-葡萄糖苷酶的影响。结果显示:氧气促进酵母β-葡萄糖苷酶的合成,两株商业酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶最适pH值为5.0,最适温度为60℃,果糖、葡萄糖和蔗糖对两株酿酒酵母完整细胞的β-葡萄糖苷酶活性具有轻微抑制作用,乙醇(体积分数2%~20%)促进β-葡萄糖苷酶的酶活力。在葡萄酒发酵过程中,β-葡萄糖苷酶主要存在于完整细胞和透性化细胞中,上清液中酶较少。     

非酿酒酵母产生的β-葡萄糖苷酶在发酵酒中的应用研究进展

β-葡萄糖苷酶对糖苷键的水解作用已被广泛应用于酿酒、茶增香、保健品开发等领域.发酵环境中非酿酒酵母产生的β-葡萄糖苷酶活力高于酿酒酵母,可在酿酒酵母酶活力不足时进行补充.本文对发酵过程中不同的影响因素如酵母合成和释放β-葡萄糖苷酶的能力、发酵环境中的温度、酸碱度和可发酵糖浓度等对β-葡萄糖苷酶活力的影响进行了综述,并对...     

甘肃河西走廊葡萄酒产区高产糖苷酶非酿酒酵母菌株筛选及其酿酒适应性分析

为筛选高产糖苷酶的本土非酿酒酵母菌株,以甘肃河西走廊葡萄酒各子产区主栽酿酒葡萄为原料,在自然酒精发酵过程中分离得到912株酵母菌;采用七叶苷培养基进行产β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase, β-Glu)菌株初步筛选,通过对硝基苯酚(p-nitrophenol,p-NP)法分别定量测定初筛菌株的β-Glu、α-L-阿拉伯糖苷酶(α-L-arabinofuranosidase, α-L-Ara)、α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase, α-L-Rha)、β-D-木糖苷酶(β-D-xylosidase, β-Xyl)活力,并对优选菌株进行葡萄酒酿造条件适应性分析。结果表明,HX-1、HX-2、HX-3和HX-4具有较高的糖苷酶活力,经WL培养基形态特征及26S rDNA D1/D2区域序列分析鉴定,HX-1和HX-3为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),HX-2和HX-4为美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)。各糖苷酶的最适pH值为5.0～6.0,最适温度为40～50℃,高乙醇、高SO₂和...     

香格里拉葡萄酒产区野生酿酒酵母的分离鉴定和发酵性能研究

对香格里拉葡萄酒产区中的野生酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)进行分离鉴定,对鉴定出的98株酿酒酵母进行抗性评价以及发酵特性分析。运用杜氏管发酵法从98株酿酒酵母中选取16株起发早、发酵速度快、产香好的菌株,然后对这16株酿酒酵母进行耐糖、耐酒精、耐氯化钠以及耐高温等抗性评价,最终选出DW4-3、DS3-8、DS2-5、DS3-6、JP2-3等5株可以耐受500 g/L葡萄糖,120 g/L氯化钠,14%vol酒精和耐55℃高温的酿酒酵母菌株做下一步的模拟酒精发酵和酿酒试验。最后对不同菌株发酵葡萄酒的理化性质进行综合分析,菌株DS2-5所酿干红葡萄酒总糖、酒精度和总酸均符合干红葡萄酒国家标准,且在干浸出物,总酚和单宁含量等方面表现突出,干浸出物和总酚含量高于商业酵母F15,色调和商业酵母无显著性差异。     

贺兰山东麓中部产区优良抗逆葡萄酒乳酸菌的分离筛选及酿酒特性研究

宁夏贺兰山东麓产区具有优越的地理位置、独特的气候与风土特征,但其产区丰富的微生物资源尚待开发,以宁夏贺兰山东麓中部产区处于自然苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation, MLF)的葡萄酒为来源,筛选出具有本土特色的优良抗逆葡萄酒乳酸菌。通过胁迫酸性番茄(acid tomato juice medium, ATB)培养基筛选及种属特异性PCR鉴定得到乳酸菌,对这些乳酸菌进行苹果酸降解试验、菌株安全性分析及酿造试验,分析其苹果酸代谢能力及对葡萄酒基本理化指标和香气成分的影响。最终获得8株具有优良抗逆性及安全性的酒类酒球菌(Oenococcus oeni),其中O.oeni XMN18和BM68代谢苹果酸的速率显著快于O.oeni 31-DH与SD-2a,在发酵的第3天完成MLF,酒样中的残糖、挥发酸等基本理化指标符合国家标准,尤其是O.oeni XMN18发酵酒样的香气物质总含量显著高于对照及其他菌株。所筛选的菌株均可完成MLF且具有安全性,尤其是O.oeni XMN18对葡萄酒的香气品质有十分积极的影响。     

蚕豆β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其性质研究

本文利用硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-cellulose-50离子交换、SephadexG-100层析、MILLIPORE超滤浓缩法从蚕豆中分离纯化了β-葡萄糖苷酶,并对β-葡萄糖苷酶的酶学性质进行分析研究.     

酿酒葡萄品种及产区对贺兰山东麓葡萄酒香气质量的影响研究

为研究酿酒葡萄品种及产区对葡萄酒香气的影响,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术分析了贺兰山东麓产区四种不同品种葡萄酒、中国四个不同大产区以及贺兰山东麓四个小产区的赤霞珠葡萄酒品种香气差异并对结果进行主成分分析（PCA）。结果表明：四种不同品种葡萄酒中共检测出香气物质50种,其中酯类21种、醇类15种、酸类7种、醛类4种以及其他类3种,香气活性值（OAV）＞1的香气物质有11种,其中霞多丽、赤霞珠葡萄酒中OAV最高的风味物质均为乙酸异戊酯和异戊酸,而马瑟兰和北玫葡萄酒中OAV最高的风味物质为大马士酮。PCA结果显示,宁夏贺兰山东麓不同小产区赤霞珠葡萄酒香气成分之间无明显差异;中国不同酿酒葡萄产区的赤霞珠葡萄酒香气成分之间差异明显。     

产胞外β-葡萄糖苷酶乳酸菌的筛选及其酶学性质的初步研究

用荧光底物法从20种可利用纤维二糖的乳酸菌中筛选出10株产胞外β-葡萄糖苷酶的乳酸菌,在MRS培养基中筛选出粗酶液酶活较高的1株植物乳杆菌KLDS1.0320,进一步研究了其产酶的特点、酶学性质,结果表明,植物乳杆菌KLDS1.0320产生的胞外β-葡萄糖苷酶受底物纤维二糖的诱导,但与底物浓度有关。粗酶液酶活的最适pH为4.8,最适温度为37℃。在pH值为4.0,温度为48℃条件下仍具有酶活力。     

宁夏贺兰山东麓酿酒酵母分离筛选及菌株鉴定

为进一步探究宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄酵母菌的多样性,更好开发利用葡萄产区酵母菌资源。从宁夏贺兰山东麓的西夏王陵、红寺堡、玉泉营、青铜峡、张裕十五世酒庄地区的葡萄园土壤、葡萄浆果表皮以及葡萄自然发酵过程中进行酵母菌的分离筛选,对得到的122株酵母菌株运用WL营养琼脂培养基进行初步分类,同时结合26S r DNA D1/D2区序列分析。共鉴定出克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、大隐球酵母(Cryptococcus magnus)共5种酵母菌。进而初步确定宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄产区酵母菌的主要种类,为地方特色葡萄酒酵母菌的筛选和选育提供理论基础和研究依据。     

云南香格里拉高原葡萄酒产区风土特征综述

云南香格里拉地处横断山脉三江并流核心区域,形成“两江夹一山,两山夹一江”的“W”型地貌单元,加之雪山对印度洋季风的阻挡,形成了高原独特的河谷小气候,是建设绿色、生态、优质和高效酿酒葡萄基地的理想区域。空气清新,光照强,紫外线强,太阳辐射量为118.33～133.65 kcal/cm2,光合有效辐射占辐射总量的47%,有利于葡萄的充分成熟;全年降雨量300～600 mm,且蒸发量大于降雨量,葡萄病虫害很少,充分实现了有机绿色种植;河谷土质疏松通透,有机质含量高,土壤类型呈现多样性。结合香格里拉高原产区独特的生态条件,该文探索适合本产区的酿酒葡萄栽培技术和品质调控方法,为突破云南省高原葡萄酒产区发展的研究和技术瓶颈问题提供理论基础和科学支撑。     

The isolation of a dol-P-man synthase from Ustilago maydis that functions in Saccharomyces cerevisiae

Genomic DNAs from several fungi were screened for a homologous sequence to Saccharomyces cerevisiae DPM1, an essential gene which encodes dolichyl phosphoryl mannose synthase. The fungi examined included Aspergillus nidulans, Neurospora crassa, Schizophyllum commune and Ustilago maydis. Only U. maydis gave a significant signal after Southern hybridization using DPM1 as a probe. The Ustilago homolog was subsequently cloned and sequenced. The predicted protein of 294 amino acids has 60% identity to the S. cerevisiae protein, but lacks the putative ‘dolichol recognition sequence’. RNA of ca. 900 bp is transcribed in both yeast and filamentous cells of Ustilago. In Escherichia coli, the U. maydis sequence expressed a 35 kDa protein exhibiting dolichyl phosphoryl mannose synthase activity. The sequence was also shown to complement a haploid strain of S. cerevisiae containing a deletion of the DPM1 gene. The U. maydis sequence therefore, encodes a dolichyl phosphoryl mannose synthase that can support normal vegetative growth in S. cerevisiae. The GenBank accession number is U54797.     

Mitochondrial DNA restriction enzyme analysis and evaluation of the enological characteristics of Saccharomyces cerevisiae strains isolated from grapes of the wine-producing area of Collio (Italy)

A total of 70 strains of Saccharomyces cerevisiae were isolated from different grapes from the Collio Region. Chemical parameters and mitochondrial DNA (mtDNA) restriction patterns were determined. Higher alcohols were the main parameter useful for differentiating between strains, whereas the mtDNA analysis demonstrated a high genetic variability between strains. A weak correlation was observed when the dendrograms obtained from the chemical and genetic results were compared.     

优良耐酸酿酒酵母的筛选及发酵特性研究

该研究采用酸性选择培养基、氯化三苯基四氮唑（TTC）显色法、杜氏小管发酵法从实验室保藏的87株酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中筛选耐酸性强的优良菌株,并测定其最适生长条件、耐受性及发酵性能。结果表明,最终筛选出一株耐受性强及发酵性能优良的菌株SC-62,其最适生长温度为28 ℃、最适pH为4.0,可耐受乙醇体积分数14%、NaCl 100 g/L、葡萄糖500 g/L,具有发酵力[5.93 g CO2/（100 mL·24 h）]强,酒精产量（7.55%vol）高,延滞期（12 h）短、适应性强等优点。该菌株的成功筛选为后续高效生产酒精提供了良好的菌种来源。     

酵母菌FW-sc-08的生长及发酵特性研究

通过对影响菌体生长因素、发酵指标和香气成分的测定,研究了从自然发酵黑莓酒中筛选出的酵母菌FW-sc-08的生长和发酵特性。结果显示,酵母菌FM-sc-08对数生长期为3～9 h,对SO2最大耐受质量浓度为800 mg/L;酵母菌FM-sc-08适宜发酵的可发酵糖最大含量为30%,对糖最大耐受量为40%,可发酵酒精度最高16.3%vol。通过测定不同温度对发酵指标的影响,最终确定酵母菌FM-sc-08的最适发酵温度为25 ℃;对比20 ℃和25 ℃发酵的黑莓果酒酒样中的香气成分,可知酵母菌FM-sc-08在20 ℃发酵黑莓酒产香气成分较多（35种）。     

The Saccharomyces cerevisiae enolase‐related regions encode proteins that are active enolases

In addition to two genes (ENO1 and ENO2) known to code for enolase (EC4.2.1.11), the Saccharomyces cerevisiae genome contains three enolase‐related regions (ERR1, ERR2 and ERR3) which could potentially encode proteins with enolase function. Here, we show that products of these genes (Err2p and Err3p) have secondary and quaternary structures similar to those of yeast enolase (Eno1p). In addition, Err2p and Err3p can convert 2‐phosphoglycerate to phosphoenolpyruvate, with kinetic parameters similar to those of Eno1p, suggesting that these proteins could function as enolases in vivo. To address this possibility, we overexpressed the ERR2 and ERR3 genes individually in a double‐null yeast strain lacking ENO1 and ENO2, and showed that either ERR2 or ERR3 could complement the growth defect in this strain when cells are grown in medium with glucose as the carbon source. Taken together, these data suggest that the ERR genes in Saccharomyces cerevisiae encode a protein that could function in glycolysis as enolase. The presence of these enolase‐related regions in Saccharomyces cerevisiae and their absence in other related yeasts suggests that these genes may play some unique role in Saccharomyces cerevisiae. Further experiments will be required to determine whether these functions are related to glycolysis or other cellular processes. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

不同酿酒酵母发酵特性及抗氧化特性的比较

该文比较了不同来源的5株葡萄酒酿酒酵母(2株野生酿酒酵母CC17、SC5,2株实验室常用工程菌株BY4743、INVSC1,以及1株工业酿酒酵母菌株CICC1450)的生长曲线、泡沫产生能力、H2S产生能力、CO2产生能力,结果表明该实验室分离得到的野生酿酒酵母CC17具有良好的发酵特性.经不同浓度的氧化性物质H2O2和甲萘醌分别处理后得知,CC17在抗氧化性能上具有明显优势,说明该菌株在实际生产中具有开发利用的潜力.