食用油脂中DNA高效快速提取方法及实时荧光PCR检测技术的研究

针对食用油脂中提取高纯度和高得率DNA比较难的问题,通过与CTAB法比较研究,并用改良的试剂盒法从食用油脂中高效快速提取到了高纯度和高浓度的DNA,并用实时荧光PCR技术成功地检测出了食用油脂中的内源基因和外源基因.     

水果果肉中总DNA提取方法的比较研究

为了获得高效通用的水果果肉DNA提取方法,本研究以11种水果为试验材料,从前处理方法、裂解液成分、异丙醇沉淀时间等方面对CTAB法进行了改进,并比较了行业标准法、试剂盒法、改良CTAB法3种方法的提取效果,发现改良CTAB法提取的水果果肉DNA浓度都在46.25μg/m L以上,纯度都在1.8左右,且能扩增出137 bp的18Sr DNA条带,从而确定了高效通用的水果果肉DNA提取方法:改良CTAB法。     

食用植物油DNA提取方法的优化

目的建立可从不同种类食用植物油中提取得到高质量的、可用于分子生物学检测的DNA的提取方法。方法使用2种改进十六烷基三甲基溴化铵法(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)和2种商用试剂盒提取6种食用植物油的DNA,通过紫外分光光度计检测所得DNA样品的浓度和纯度。设计特异性引物,并通过普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测DNA样品是否可用于分子生物学分析。结果使用改良CTAB法1及2种商业试剂盒无法有效提取得到的6种食用植物油的DNA,样品无法满足分子生物学检测的需要,使用改良CTAB法2提取得到的6种食用植物油DNA纯度和浓度检测结果均为最佳,其提取的橄榄油、菜籽油、花生油DNA样品可用于后续实时荧光定量PCR检测。结论该方法可为橄榄油、菜籽油、花生油DNA提取提供有效手段,为食用植物油检测和研究奠定基础。     

果汁DNA提取方法的比较

为了获得高效通用的果汁DNA提取方法,以7种浑浊果汁和6种澄清果汁为研究对象,从前处理方法、裂解液成分、异丙醇沉淀时间等方面对CTAB法进行了改进,并比较了CTAB法、试剂盒法、改良CTAB法的提取效果,结果发现:改良CTAB法提取的浑浊果汁DNA,浓度都在24.10μg/m L以上,澄清果汁的DNA,浓度都在5.72μg/m L以上,且两类果汁的DNA纯度均为1.8左右,同时都能扩增出18Sr DNA的137 bp的条带,从而确定了高效通用的果汁DNA提取方法——改良CTAB法。     

大豆卵磷脂DNA的提取方法及应用

以大豆卵磷脂为研究对象,比较了CTAB法、磁珠试剂盒法以及硅胶膜试剂盒法等3种DNA提取纯化方法。通过大豆内源基因Lectin实时荧光PCR检测,发现CTAB法提取的大豆卵磷脂DNA质量优于其它两种方法,并以CTAB法为基础进行条件优化,进一步提高DNA纯度。采用该方法对6个不同品牌的市售大豆卵磷脂产品进行转基因成分(CAMV35S启动子及NOS终止子)检测,结果证实均不含转基因成分。     

适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量。方法用酚-氯仿法、改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量。结果改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带。结论改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法。     

4种方法提取牛肉干DNA的效果比较

目的探求熟肉干制品最佳的DNA提取方案。方法采用4种不同的方法:CTAB法及3种市售试剂盒法,提取11种不同牛肉干样品的DNA,通过对方法的提取耗时,提取DNA的质量及提取DNA用于实时荧光PCR扩增的效果3方面进行比较。结果 TAKARA试剂盒法提取DNA耗时最短仅需要0.5 h,OMEGA试剂盒法提取的DNA的纯度较好,A 260/A 280比值最接近1.8,Tiangen的深加工食品DNA提取试剂盒法提取的DNA做实时荧光PCR的CT值最小,扩增效果最佳。结论 Tiangen试剂盒法对于熟肉干制品DNA的提取效果更为理想。     

不同核酸提取方法用于检测明胶动物源性成分的比较分析

为筛选适用于食用明胶核酸提取的方法,用标准推荐方法、改良十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)法、QIAGEN食品基因组脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)提取试剂盒法和TIANGEN深加工食品因组DNA提取试剂盒法这4种方法提取牛皮明胶、牛骨明胶、猪皮明胶和鱼皮明胶的DNA。通过所提DNA纯度、浓度和物种来源荧光(Polymerase chain reaction, PCR)的扩增效率比较各种方法的提取效果。结果表明,标准推荐方法提取的DNA纯度较低,蛋白污染严重,荧光PCR扩增成功率低。TIANGEN试剂盒法提取DNA纯度高,但仅对皮来源明胶有较好的检测效果,适用范围有限。改良CTAB法和QIAGEN试剂盒法提取DNA纯度高、杂质少,对荧光PCR的抑制小。除鱼皮明胶外,所有样品均检测到了相应的动物源性,可用于大多数明胶样品的DNA提取。