不同佐剂联合抗原表位融合蛋白对流感疫苗免疫原性的影响

目的 观察不同佐剂与抗原表位融合蛋白配伍后对季节性流感疫苗在小鼠体内免疫原性的影响.方法 流感病毒抗原表位融合蛋白(FP)分别辅以氢氧化铝、聚肌胞(PolyIC)+氢氧化铝以及阳离子佐剂免疫小鼠,再以四价流感病毒裂解疫苗(QIV)加强免疫,通过检测血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)...     

α-甘露糖肽作为佐剂对恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1免疫原性的影响

目的探讨α-甘露糖肽(α-mannatide)作为佐剂对恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1免疫原性的影响。方法将小鼠随机分为4组:疫苗组(M.RCAg-1)、疫苗佐剂组(M.RCAg-1+α-mannatide)、佐剂对照组(α-mannatide)、弗氏佐剂对照组(M.RCAg-1+Freund’s),分别于第0、14、28天经背部皮下免疫小鼠,0.1 ml/只。采用ELISA法检测3次免疫后小鼠血清Ig G抗体水平、抗体亚型以及血清抗体对单表位的识别,间接免疫荧光反应(IFA)检测抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别,ELISPOT检测其细胞因子的分泌水平。结果 3次免疫后,疫苗佐剂组GMT明显高于疫苗组(P0.05);疫苗佐剂组GMT与弗氏佐剂对照组持平(P0.05)。疫苗佐剂组产生的高水平Ig G主要以Ig G1为主。疫苗佐剂组抗体对单表位和天然虫体的识别效果显著。免疫小鼠各表位和蛋白诱发分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数高于分泌IFNγ的特异性淋巴细胞克隆数(P0.05)。结论α-mannatide作为恶性疟原虫多表位蛋白疫苗M.RCAg-1的佐剂能诱导其产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,具有一定的抗疟原虫感染保护作用。     

HCV多表位多克隆抗体的纯化及HCV-Ag的检测

目的：制备并纯化HCV复合多表位多克隆抗体,探讨其用于丙型肝炎抗原检测的潜在可行性。方法：将人工合成的HCV复合多表位抗原在大肠杆菌中表达融合蛋白后免疫小鼠分析表达产物的免疫特异性及免疫原性,免疫家兔获取多克隆抗体,利用盐析和亲和柱纯化多克隆抗体,利用该抗体用双抗夹心法检测HCV-Ag。结果：融合蛋白能在原核表达系统中高效表达,并可诱发小鼠及家兔产生高滴度的特异性HCV抗体,该HCV多表位复合抗原多克隆抗体,在用ELISA法检测HCV-Ag中表现出较高的灵敏性（90.63%）及特异性（78.13%）。结论：通过盐析和亲和柱可高效纯化HCV复合多表位多克隆抗体,纯化后的抗体用ELISA双抗体夹心法检测HCV-Ag具有灵敏、特异、快速的优点,有望用于HCV的抗原检测。     

水油微球/BCG复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响

目的探讨水油微球与热灭活BCG(heat-killed BCG,HKBCG)或无细胞BCG(acellular BCG,ABCG)复合佐剂对结核杆菌融合蛋白PstS1-LEP免疫原性的影响。方法制备水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,经皮下注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,末次免疫后2周采血,处死小鼠并无菌摘脾;ELISA法检测小鼠血清抗Pst S1-LEP的IgG、IgG1和IgG2a抗体,ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞经PstS1-LEP刺激分泌IFNγ、IL-4和IL-17的斑点形成细胞数(spots forming cell,SFC)。结果水油微球/HKBCG、水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠诱导Pst S1-LEP特异性IgG、IgG1和IgG2a水平比较,差异无统计学意义(P0.05);水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗免疫小鼠的IFNγ-SFC、IL-17-SFC及IL-17-SFC/IL-4-SFC均高于水油微球/HKBCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗,而两种疫苗免疫小鼠的IL-4-SFC、IFNγ-SFC/IL-4-SFC和IFNγ-SFC/IL-17-SFC比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗诱导偏向Th1和Th17型细胞免疫,IFNγ-SFC、IL-4-SFC和IL-17-SFC的两两比值显示,水油微球/ABCG复合佐剂PstS1-LEP疫苗更有利于诱导Th17型细胞免疫漂移。     

腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性

目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。     

HCV多表位抗原的选择及结构分析

目的：设计HCV复合多表位抗原,分析其空间结构,探讨其用于疫苗研究和HCV-Ag检测的潜在可行性。方法：选择HCV多表位抗原并将其串联成HCV复合多表位抗原基因B2,利用软件和网站分析其空间结构。结果：该HCV复合多表位抗原具备涵盖多种天然表位的抗原特性,且二级结构提示具有形成T细胞位点的倾向,易于诱导T细胞介导的细胞免疫应答,三级结构有良好的亲水性,可能激发良好的体液免疫应答。结论：该HCV复合多表位抗原选择合理,空间结构分析能激发良好的免疫反应,有望用于疫苗研究和HCV-Ag检测。     

HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性

目的原核表达、纯化HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白,并分析其免疫原性。方法生物信息学方法预测鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的B细胞抗原表位,采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)法将VEGF抗原表位基因插入到HBcAg基因的免疫优势区内,合成HBcAg-VEGF基因序列,克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-HBcAg-VEGF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经羟基磷灰石CHT层析、Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析纯化后,与A(lOH)3佐剂混合,分别于第0、7、14、21天经肌肉免疫BALB/c小鼠1次,第28天采血,ELISA法检测血清中抗VEGF抗原表位抗体,VEGF受体结合抑制试验筛选具有良好免疫原性的VEGF优势抗原表位。对筛选出的优势抗原表位融合蛋白进行表达及纯化条件的优化。结果生物信息学软件预测了6个VEGF的B细胞抗原表位;6个重组表达质粒经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白相对分子质量为14 400²0 100,纯度均在85%以上,除HBcAg-VEGF3以单体形式存在、不形成颗粒外,其他融合蛋白均能形成VLP;各组HBcAg-VEGF融合蛋白免疫小鼠后,均刺激机体产生了针对VEGF抗原表位肽的特异性抗体,其中HBcAg-VEGF1组抗体水平最高,且抑制VEGF与VEGFR结合的能力最强;采用优化的条件表达、纯化的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白纯度达95%以上。结论筛选得到的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白显示出较好的免疫原性,为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。     

丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答

目的探讨乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗的体液免疫应答效果。方法用壳聚糖制备乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体微球疫苗,经腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性IgG抗体水平。结果3种途径免疫的小鼠均能产生针对各表位的特异性IgG抗体,鼻腔免疫效果最好;多表位噬菌体微球疫苗的抗体水平明显高于多表位噬菌体疫苗。结论壳聚糖微球疫苗投递系统可以提高多表位噬菌体疫苗的体液免疫效果。鼻腔免疫是多表位噬菌体微球疫苗的最佳免疫途径。     

乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗的构建及其免疫原性

目的构建乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗,并检测其免疫原性。方法将PCR方法合成的乙肝乙脑麻疹多表位基因COM插入T7噬菌体基因组中,使其与噬菌体10B蛋白融合,展示在T7噬菌体表面,构建成多表位噬菌体疫苗COM/T7。分别以1010pfu/只和1012pfu/只两种剂量,通过腹腔、皮下和鼻腔3种途径免疫昆明小鼠,ELISA检测小鼠特异性抗体水平。结果重组噬菌体COM/T7经PCR鉴定证明构建正确。乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗能诱导小鼠产生针对各表位的特异性IgG抗体。在3种免疫途径中,腹腔免疫效果最好。免疫剂量与诱导的抗体水平在一定范围内呈正相关。多表位噬菌体疫苗诱导的抗-HBs和抗-JEV水平高于常规疫苗,而抗-MV水平低于常规疫苗。结论构建的乙肝乙脑麻疹多表位噬菌体疫苗具有良好的免疫原性。     

阿仑膦酸钠作为口服佐剂对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响

目的评价口服阿仑膦酸钠(alendronate,ALD)对恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1免疫原性的影响。方法分别用不同剂量的ALD(0.05、0.1、1 mg)和M.RCAg-1配伍后免疫BALB/c小鼠,M.RCAg-1蛋白经背部皮下注射免疫,20μg/只,同时经灌胃给药ALD,共免疫3次,每次间隔14 d,于末次免疫后10 d经小鼠尾静脉采血,分离血清。ELISA法测定小鼠血清中抗M.RCAg-1蛋白的抗体滴度、IgG抗体分型及血清抗体对M.RCAg-1单表位的识别滴度;间接免疫荧光反应(IFA)检测小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度;ELISPOT法检测小鼠脾淋巴细胞免疫水平。结果 0.05 mg ALD+M.RCAg-1及0.1 mg ALD+M.RCAg-1组小鼠血清中抗M.RCAg-1的抗体水平均可达1∶10~8;IgG抗体主要以IgG1为主;对M.RCAg-1的11个单个抗原表位(E1~E11)可全部识别;由各表位抗原(除E2外)诱导分泌IL-4的特异性淋巴细胞克隆数明显高于分泌IFNγ的特异性淋巴细胞克隆数(P<0.0001)。0.1 mg ALD+M.RCAg-1组小鼠血清抗体对恶性疟原虫天然蛋白的识别滴度明显高于0.05 mg ALD+M.RCAg-1组(P<0.000 1)。结论 ALD作为恶性疟原虫多表位嵌合抗原M.RCAg-1的佐剂可显著提高其体液免疫及细胞免疫水平。     

结核分枝杆菌Rv0057-Rv1352融合蛋白的制备及其初步应用

目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值。方法根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv1352/pET30aSETB。用NheⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,SpeⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较。结果构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致;表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95%;以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70%和90.00%,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00%和63.33%;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0%,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景。     

人呼吸道合胞病毒与结核分枝杆菌融合蛋白TB10.4-F1的免疫原性

目的在大肠杆菌中表达并纯化人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,HRSV)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的融合蛋白TB10.4-F1,检测其免疫原性。方法将重组工程菌TB10.4/pET28a/BL21和TB10.4-F1/pET30a/BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达形式;表达的融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1经His TrapTMHP层析柱进行亲和层析一步纯化后,免疫BALB/c小鼠。小鼠分为TB10.4(30μg/只)、TB10.4-F1(30μg/只)及PBS(200μl)组,分别于0、2、4周免疫小鼠,于每次免疫前1 d经尾部取血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中特异性的IgG水平;于末次免疫2周后摘眼球取血,分离血清,ELISA法检测特异性IgG水平及中和抗体滴度。结果表达的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1的相对分子质量分别约13 300和59 600,均以包涵体形式表达,表达量分别占菌体总蛋白的53.9%和12%;纯化后的重组融合蛋白TB10.4和TB10.4-F1纯度分别可达95%和80%;与TB10.4组相比,TB10.4-F1组IgG水平明显升高,IgG1/IgG2a值明显降低,但仍大于1;TB10.4-F1组小鼠血清中RSV特异性中和抗体滴度可达log102.699。结论融合蛋白TB10.4-F1免疫原性强,能激发出较为平衡的Th1/Th2反应,并产生抗HRSV的中和抗体。融合蛋白TB10.4-F1有望成为预防HRSV感染的候选疫苗。     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65融合蛋白的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中融合表达绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas exotoxin A,PEA)受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65),并进行纯化。方法从含PEA的质粒中扩增PEA受体结合区亚基PEAⅠ,克隆至pET-28a-HSP65质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-HSP65-PEAⅠ,转化大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析;利用抗PEA受体结合区单抗杂交瘤细胞制备抗PEA受体结合亚基单抗,偶联免疫亲和层析介质,将表达的重组蛋白经DEAE Sepharose 4FF阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析和免疫亲和层析进行纯化。结果重组质粒经PCR鉴定及测序,证明构建正确;表达的重组HSP65-PEAⅠ蛋白相对分子质量约93 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;抗PEA受体结合亚基单抗效价可达1∶10 000。纯化的重组HSP65-PEAⅠ蛋白纯度达90%以上。结论已成功在大肠埃希菌中表达并纯化了重组融合蛋白HSP65-PEAⅠ,为防止PA感染后多器官衰竭综合征的免疫制剂的研究奠定了基础。     

不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品免疫原性的影响

目的评价不同储存条件对结核亚单位疫苗参考品(简称参考品)免疫原性的影响。方法按以下抗原与佐剂比例配制1人份疫苗参考品:[10μg Ag85b蛋白+10μg EC蛋白+50μg Ploy IC+0.2 mg Al(OH)3]/0.2 ml。将疫苗参考品于-70及4℃分别保存1、6、9、12个月,并于每个时间点免疫BALB/c小鼠,实验分4组:PBS组、冷藏组(4℃保存参考品)、冻存组(-70℃保存参考品)及现配组,均经小鼠后肢内侧肌肉注射,0.2 ml/只,共免疫3次,每次间隔10 d,末次注射10 d后,收集小鼠脾淋巴细胞,并经眼球采血,分离血清。ELISPOT法检测抗原特异性的IL-2、IFNγ水平,CCK-8法检测细胞增殖水平,间接ELISA法检测血清Ig G抗体效价。结果经Ag85b和EC刺激,现配组各月间的斑点形成细胞数(spot forming cells,SFCs)及脾细胞增殖指数(stimulating indox,SI)差异无统计学意义(P0.05),且均显著高于PBS组(P0.05),表明免疫学检验模型成立且稳定,各试验组与现配组结果具有可比性。经4℃冷藏12个月,参考品的Ag85b及EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平均显著低于冷藏1个月的参考品(P0.01),经-70℃冻存12个月,参考品的Ag85b、EC特异性IL-2、IFNγ相对水平及脾淋巴细胞相对增殖水平与冻存1个月的参考品差异无统计学意义(P0.05)。与现配组比较,冷藏组及冻存组Ag85b和EC特异性抗体水平相对平稳,各月间差异均无统计学意义(P0.05),且两组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 -70℃冻存12个月内的参考品的细胞及体液免疫水平均未明显降低,可作为该参考品的长期保存条件。不同保存条件对疫苗免疫保护力的影响需进一步考察。     

结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白的原核表达及其表达条件的优化

目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuber-culosis,MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白(recombinant ESAT6-CFP10,rEC),并优化表达条件。方法以(GGGGS)3为linker将ESAT6和CFP10两个基因连接,合成rEC全基因,插入至载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-rEC,转化至感受态E. coli BL21(DE3),筛选优势菌株进行诱导表达,并对诱导温度(25、30、37℃)、诱导剂种类及浓度(0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1. 0 mmol/L IPTG及0. 5、1、5、10、15、20 g/L乳糖)、诱导时间(2、3、4、5、6 h)、诱导起始A600(0. 4、0. 6、0. 8、1. 0)进行优化。菌种经5 L发酵罐发酵培养后,采用亲和层析及离子交换层析纯化rEC融合蛋白,于-20℃分别储存0、2、4、6个月,12. 5%SDS-PAGE分析rEC融合蛋白,并对保存0、6月的样品进行HPLC-SEC分析。结果重组质粒pET-28a-rEC经双酶切及测序鉴定,构建正确。rEC融合蛋白最适...     

重组CFP10-PPE68融合蛋白检测结核分枝杆菌感染的初步应用

目的以结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)RD1区特异性培养滤液蛋白10(culture filtrate pro-tein10,CFP10)与戊糖-5-磷酸-3-差异构象酶68(pentose-5-phosphate-3-epimerase68,PPE68)的融合蛋白CFP10-PPE68作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB抗体的间接ELISA法。方法采用亲和层析法纯化重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白;分别以3种蛋白作为包被抗原,建立检测结核病患者血清中MTB特异性抗体的间接ELISA法;采用方阵滴定法对建立的间接ELISA法的条件进行优化;并以临床诊断为金标准,对间接ELISA法的特异性、敏感性和准确性进行验证。结果纯化的重组CFP10-PPE68融合蛋白纯度约为70%。分别以重组CFP10-PPE68、CFP10和PPE68蛋白作为包被抗原的最佳包被浓度分别为2、4、4μg/ml,血清最佳稀释度均为1∶1 000,酶标二抗最佳稀释度均为1∶5 000。3种蛋白对肺外结核的诊断效果均优于肺结核,且重组CFP10-PPE68融合蛋白检测肺外结核的特异性、敏感性及准确性均最佳;3种蛋白诊断结核病的特异性较高,而敏感性相对较低。结论以重组CFP10-PPE68融合蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA法诊断MTB感染具有较高的敏感性和特异性,特别是对难以诊断的肺外结核病的诊断有一定的参考价值。     

重组弓形虫热休克蛋白70不同途径免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞及sIgA抗体的动态变化

目的分析重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)鼻内或皮下免疫小鼠诱导的小肠黏膜IgA抗体分泌细胞(IgA antibody-secreting cells,IgA-ASCs)与小肠冲洗液sIgA抗体的动态变化及二者的相关性,探讨其上调小肠黏膜免疫应答的作用机制。方法 BALB/c小鼠90只,随机均分3组:鼻内组(20μg rTgHSP70/只,滴鼻,免疫2次,间隔2周)、皮下组(80μg rTgHSP70/只,背部皮下注射,免疫2次,间隔2周)、对照组(不免疫)。分别于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组取小鼠5只,脱颈椎处死,免疫组化法检测十二指肠、空肠及回肠黏膜IgA-ASCs数量,ELISA法检测小肠冲洗液sIgA水平。结果 IgA-ASCs分布于小肠黏膜的固有层中,且鼻内组小肠黏膜IgA-ASCs数量明显高于皮下组和对照组(P<0.001),鼻内组小肠冲洗液sIgA水平在免后1～4周均处于上升阶段,第4周达到高峰,显著高于皮下组和对照组,差异有统计学意义(P<0.001);鼻内组和皮下组小肠冲洗液sIgA水平与十二指肠、空肠、回肠黏膜固有层IgA-ASCs的数量呈正相关(P<0.05)。结论 rTgHSP70经鼻内或皮下免疫小鼠均可诱导小肠黏膜固有层IgA-ASCs和小肠冲洗液sIgA水平的持续高表达,且二者呈正相关,鼻内免疫上调小肠黏膜免疫的作用优于皮下免疫。     

甲型H7N9流感病毒疫苗经不同途径免疫小鼠长期保护效果的比较

目的比较甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗经3种免疫途径免疫小鼠的长期保护效果。方法采用不同剂量(0. 15和1. 5μg)的甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗及裂解疫苗单独免疫或辅以Al(OH)_3佐剂共同免疫,分别经腹腔、肌肉及皮下注射免疫小鼠1次,免疫后不同时间点(3～360 d)收集血清,通过ELISA法检测血清IgG抗体水平。免疫后365 d,用含10×LD_(50)致死量的甲型H7N9流感病毒同源鼠肺适应株A/Shanghai/2/2013(H7N9)经滴鼻攻毒,20μL/只,攻毒3 d,检测小鼠肺洗液的病毒滴度,攻毒21 d,观察小鼠存活和体重丢失情况。结果甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗和裂解疫苗接种1次均可诱导小鼠产生较高水平的血清IgG抗体,全病毒灭活疫苗比裂解疫苗IgG抗体滴度峰值高2～8倍,且Al(OH)_3佐剂可有效提高两种疫苗诱导的血清IgG抗体水平。免疫后365 d,全病毒灭活疫苗及含佐剂裂解疫苗免疫均可保护小鼠抵抗同源流感病毒的致死量攻击,且Al(OH)_3佐剂可有效提高H7N9裂解疫苗的保护效果。3种免疫途径中腹腔注射和肌肉注射较皮下注射产生的IgG抗体维持时间更长,免疫剂量相同时,肌肉免疫途径对小鼠的保护效果略优于腹腔和皮下免疫途径。结论 3种途径1次免疫甲型H7N9流感全病毒灭活疫苗或辅以Al(OH)_3佐剂的裂解疫苗,在小鼠模型中可提供至少365 d的保护,腹腔和肌肉免疫途径血清抗体持续时间较皮下途径更长,肌肉免疫途径保护效果略优于另两种途径。