超高压协同碱性蛋白酶制备玉米黄粉ACE抑制肽

为增加玉米黄粉酶解产物的血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制活性,并提高酶解效率,采用超高压协同碱性蛋白酶制备玉米黄粉ACE抑制肽,实验比较分析了超高压协同酶解、超高压预处理后酶解、常压酶解对ACE抑制率的影响;探讨超高压协同酶解的底物质量分数、时间、压力、pH值、温度对ACE抑制率的影响;采用响应面分析法优化制备条件。结果表明,与常压相比,超高压协同碱性蛋白酶酶解产物的ACE抑制率(酶解时间15 min)提高了55%;与超高压预处理后再酶解相比,ACE抑制率提高了30%。在超高压协同酶解时,影响ACE抑制率的主要因素为pH值,其次为压力、底物质量分数和时间,温度影响不明显。在底物质量分数4.78%、高压时间14 min、压力372 MPa、pH 8.4、温度35℃条件下,ACE抑制率可达74.30%。超高压协同碱性蛋白酶制备玉米黄粉ACE抑制肽,不仅提高了ACE抑制率,且酶解时间缩短到15 min以内,为玉米功能肽的绿色高效制备提供了参考。     

超滤法制备高ACE抑制活性玉米肽

为了获得高降血压活性的玉米肽,采用截留分子质量为5、3、1 ku超滤膜对玉米蛋白酶解液进行分级分离,比较了各级份及未分级玉米肽的肽含量及血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性;并采用正交试验对最佳膜分离条件进行了优化。结果显示:经截留分子质量3 ku的膜滤过肽液的ACE抑制活性最高,其最佳膜分离条件为:原液浓缩比3∶1,pH值为5.5,温度为35℃时,此玉米肽滤过液的ACE抑制率大于82.27%。截留分子质量为3 ku的超滤膜为分离玉米ACE抑制肽的最佳超滤膜。     

利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化

运用正交试验和响应面法优化牡蛎血管紧张素转换酶(angiotensin-Ⅰconverting enzyme,ACE)抑制肽的分步酶解制备工艺。采用复合蛋白酶和碱性蛋白酶对牡蛎进行分步酶解,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析和ACE抑制率为考核指标优化工艺参数。结果表明,第1步复合蛋白酶最佳工艺参数为:料液比1∶4、加酶量1.2%、pH 7.0、反应温度50℃、酶解时间1 h;第2步碱性蛋白酶最佳工艺参数为:加酶量0.42%、pH 8.3、反应温度53℃、酶解时间73 min。凝胶过滤色谱法测得牡蛎酶解液分子质量在3 000 D以下小肽所占比例为99.72%,其ACE抑制活性IC50为0.8 mg/mL。同时,氨基酸组成分析表明,牡蛎肽中Glu含量最高,Cys含量最低;必需氨基酸和疏水性氨基酸含量分别占总氨基酸的36.6%和37.2%。本研究制备的低分子质量、高ACE抑制活性牡蛎肽,可为牡蛎资源的开发利用提供理论参考。     

酶法制备高抑制ACE活性蜂王浆的水解肽工艺优化

筛选制备高抑制血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性蜂王浆的酶制剂并确定其最佳酶解条件。在比较5种蛋白酶酶解蜂王浆产物抑制ACE酶活性基础上,选定日本天野公司生产的天野蛋白酶P为最适酶制剂,通过单因素试验和Box-Behnken二次旋转正交试验,并采用响应面分析得到天野蛋白酶P最佳酶解条件为水解时间196min、蜂王浆质量浓度0.0653g/mL、加酶量1503U/g。水解时间和蜂王浆质量浓度对抑制率有极显著影响(P＜0.01),加酶量对抑制率有显著影响(P＜0.05)。此条件下,蜂王浆酶解液对ACE的抑制率达到79.75%,为理论预测值的98.08%。蜂王浆几乎没有抗高血压活性,而天野蛋白酶P酶解蜂王浆产物有显著的抗高血压活性。     

玉米ACE抑制肽水解酶的筛选及酶解条件的优化

酶解玉米蛋白粉(蛋白含量为70%)制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,通过酶的筛选实验确定了AS.1398中性蛋白酶作为最佳水解酶,在此基础上,进行pH、温度、底物浓度、加酶量[E]∶[S]的单因素实验,并且确定4种因素的参数值进行L9(34)正交实验,采用体外检测ACE抑制率和肽得率为指标来确定最佳工艺条件。研究结果表明,选用AS.1398中性蛋白酶作为水解酶,水解时间在2h时,pH7.0,温度50℃,底物浓度5%,加酶量[E]∶[S]为1.5∶100,得到的最大ACE抑制率为85.65%,肽得率为58.64%。     

酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺优化及其抑制机制

为优化酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺条件以及筛选和鉴定一种新的ACE抑制肽,选用5种蛋白酶水解酪蛋白,以水解度、分子质量分布和ACE抑制率为指标筛选最适蛋白酶,采用单因素和响应面试验优化工艺,采用三合一质谱仪(Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS)方法鉴定分子质量小于3 ku组分的氨基酸序列,筛选潜在ACE抑制肽,进行人工合成,测定其IC50值。采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接解析肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件为pH 6、底物含量8%、酶添加量4%、温度55 ℃、水解时间90 min,此时酪蛋白水解液ACE抑制率为99.1%。验证具有ACE抑制活性的肽段10条,筛选出一条新颖的降血压肽——LFRQFY(源自αs1-酪蛋白),其ACE抑制活性的IC50为(7.9±1.7)μmol/L,酶抑制动力学为混合抑制模式。分子对接结果表明:LFRQFY能与ACE的氨基酸残基Ala354(活性口袋S1)、His353(活性口袋S2)形成氢键,具有显著的体外降血压活性。     

杜仲翅果籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

以杜仲翅果籽粕蛋白为原料,采用复合酶法酶解制备ACE抑制肽。考察pH值、酶用量、酶比例、底物质量分数、酶解时间、酶解温度对ACE抑制率和水解度的影响。在单因素试验基础上采用响应面法优化ACE抑制肽制备工艺。结果表明,ACE抑制肽酶解制备最佳条件为底物质量分数6%(m/V),pH 9.4,酶用量13 300U/g,酶比例(碱性蛋白酶∶胰蛋白酶)2∶1,酶解时间4.4h,酶解温度44℃。该条件下,ACE抑制率达67.91%。     

酶解法制备榛子粕ACE抑制肽工艺研究

以榛子粕为原料,利用中性蛋白酶酶解制备ACE抑制肽。以酶解产物的ACE抑制率为指标,采用单因素试验分别考察底物质量分数、酶用量、酶解温度、pH和酶解时间的影响。在单因素试验基础上设计响应面Box-Behnken中心组合试验对酶解条件进行优化。结果表明:榛子粕最佳酶解工艺条件为底物质量分数5%、酶用量0.3%、酶解温度40℃、pH7.5、酶解时间1.5h,在此条件下榛子粕酶解产物的ACE抑制率达到91.76%。     

酶解玉米黄粉制备活性玉米肽

玉米黄粉是玉米提取淀粉的副产物,没有被充分利用.以此为原料制备玉米肽提高附价值,探讨水解的最佳条件.结果表明:酶与底物之比为1000U/g、温度50℃、pH值为10.0,水解4h为最佳条件.     

分步酶解酪蛋白制备小分子ACE抑制肽

通过模拟胃肠道消化,采用单酶和复合酶分步水解酪蛋白获得小分子的血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。首先通过胃蛋白酶水解条件的优化获得具有高ACE抑制活性肽。然后以此为底物通过胰蛋白酶和胰凝乳蛋白复合酶水解条件优化获得具有高ACE抑制活性的小分子肽。结果表明：第一步的胃蛋白酶水解最优条件为：[E]/[S]=6%、[S]=0.015g/mL、pH=1.8、t=37℃、t=2h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为84.5%,分子质量集中在2000D以下;第二步的复合酶水解最优条件为：m胰蛋白酶(6%):m胰凝乳蛋白酶(3%)=2:1、pH=7.8、t=48℃、t=5h,水解产物稀释10倍后ACE抑制率为85.9%,分子质量集中在500D以下。研究表明,通过分步酶解选择合适的酶解条件可以获具有较高ACE抑制活性的小分子肽。     

酶解王米蛋白粉制备抗氧化肽

以玉米蛋白粉为原料,2709碱性蛋白酶为水解酶,采用正交实验设计优化水解条件,用NBT法和D2-脱氧核糖法测定水解所得玉米肽的抗氧化活性.结果表明,制备玉米抗氧化肽的最佳酶解条件为pH9.5,[E]/[S]=10%,时间4h,温度55℃,该条件下制备的玉米抗氧化肽对O2-·和·OH有很强的清除作用,清除率分别为54.42%和82.31%.     

利用碱提酸沉法从膨化玉米黄粉中提取谷蛋白

采用碱提酸沉法提取膨化的玉米黄粉谷蛋白,选择碱液浓度、温度、料液比和浸提时间作为因素进行试验。确定最佳提取条件:碱液浓度0.55%(m/V),浸提时间100min,温度65℃,料液比1∶16(m∶V)。该条件下玉米谷蛋白的提取率为50.14%。     

玉米蛋白粉的综合利用

玉米蛋白粉是玉米淀粉加工的副产物之一,其中含有蛋白质、淀粉以及玉米黄色素。玉米醇溶蛋白是一种理想的天然保鲜剂,可以采用乙醇或是超声波提取;玉米黄色素可用于食品的着色,通常采用有机溶剂、酶或是超声波提取;玉米蛋白水用酶解制得具有生物活性的肽,具有保健功能。     

Purification and identification of antioxidant peptides from corn gluten meal

Corn gluten meal was hydrolyzed by alkaline protease and Flavourzyme to obtain the antioxidant peptides. The antioxidant activities of the hydrolysates or peptides were evaluated by free radical scavenging capacity (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl/2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) diammonium salt/hydroxyl radical/superoxide radical anion), metal ion (Fe²⁺/Cu²⁺) chelating activity and lipid peroxidation inhibitory capacity. The hydrolysates were separated by ultrafiltration, and those with molecular weight <10 kDa exhibited highest antioxidant activity in all relevant assays. The hydrolysates were subsequently purified by gel filtration chromatography, and fraction F3 showed the highest antioxidant activity. Three peptides were identified from fraction F3 using LC–ESI–Q–TOF MS/MS as Leu-Pro-Phe (375.46 Da), Leu-Leu-Pro-Phe (488.64 Da) and Phe-Leu-Pro-Phe (522.64 Da). These peptides exhibited good free radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effect. Thus, corn gluten meal may be used as a potential source of antioxidant peptides for food and nutraceutical applications.     

玉米蛋白水解物免疫活性的研究

为拓展玉米蛋白粉在功能食品领域的应用,研究了玉米蛋白双酶水解产物(corn gluten hygrolysate,CGH)的体外脾淋巴细胞增殖活性,以及其对免疫抑制小鼠免疫调节作用及体内抗氧化活性的影响.利用复合蛋白酶和碱性蛋白酶协同作用于玉米蛋白粉制备CGH,进行体外脾淋巴细胞增殖活性测定,初步确定其免疫增强活性,然...     

玉米黄粉蛋白成分提取研究进展

该文阐述玉米黄粉中各蛋白组分性质及提取方法,指出超声波乙醇法提取醇溶蛋白和超声波辅助碱法提取谷蛋白是目前较有推广应用价值提取法;且玉米黄粉中各蛋白组分提取及应用要根据其性质确定。     

玉米渣中蛋白质的酶水解

玉米面筋粉（玉米渣）被２７０９地衣形芽孢杆菌碱性蛋白酶水解，对酶解的最佳ｐＨ、温度、固液比、时间和加酶量进行了研究。酶解后酸可溶性肽的含量明显升高。经过ＨＰＬＣ对酶解产物的分析，发现经酶解后玉米面筋中蛋白质的分子量明显下降，且主要分布在１０，０００～３，０００道尔顿左右。本文还对该酶的水解曲线进行了描述。     

枯草芽孢杆菌发酵玉米黄粉制备可溶性肽

采用枯草芽孢杆菌发酵玉米湿法生产淀粉的副产物来制备玉米可溶性肽。通过单因素和响应面试验对发酵培养基及培养条件进行了系统优化,得到最佳发酵培养基为:脱淀粉玉米黄粉(destarch corn gluten meal,DCGM)添加量100 g/L、蔗糖添加量8 g/L、Na Cl添加量1. 0 g/L。最佳发酵条件为:发酵时间42 h、培养基初始p H 9. 0、发酵温度37℃、接种量4%、发酵转速180 r/min。在此优化条件下,摇瓶发酵获得可溶性肽含量为22. 7 g/L,是优化前的13. 3倍。理化分析显示,该可溶性肽以分子质量<1 000 Da的低聚肽为主(将近80%),具有突出的抗氧化活性,尤其是O2-·清除率达60%,DPPH·清除率达80%,远优于目前的商品肽。该研究表明,利用枯草芽孢杆菌发酵玉米黄粉产可溶性肽是可行的,为玉米黄粉的高值化利用提供技术依据。