冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平

目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组(24℃,正常饲喂7 d)和冷应激组(置4℃,应激12 h),提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8~2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组(P0.01),正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组(P0.05)。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。     

α-烯醇化酶在籽鹅不同级别卵泡壁的定位及定量

目的对籽鹅不同级别卵泡壁中的α-烯醇化酶(α-enolase)进行定位及定量检测。方法分离产蛋期籽鹅等级卵泡(F1、F2、F3、F4、F5)、小黄卵泡(small yellow follicle,SYF)、大白卵泡(large white follicle,LWF)的卵泡壁;应用免疫组化方法检测不同级别卵泡壁的α-烯醇化酶的定位,采用Western blot及实时荧光定量PCR双标准曲线法检测α-烯醇化酶蛋白表达量及mRNA转录水平。结果不同级别卵泡壁均存在α-烯醇化酶表达,颗粒细胞层表达量总体高于膜层,SYF颗粒细胞层α-烯醇化酶表达量较高;F2级卵泡壁α-烯醇化酶mRNA转录水平显著高于LWF、F3及F4级别卵泡,差异有统计学意义(P 0. 01),F1、F5及SYF级卵泡壁α-烯醇化酶m RNA转录水平显著高于其他级别卵泡壁,差异有统计学意义(P 0. 01);SYF级卵泡壁α-烯醇化酶蛋白表达量显著高于其他级别卵泡,差异有统计学意义(P 0. 01)。结论α-烯醇化酶及糖酵解途径可能在卵泡发育中发挥重要功能,为α-烯醇化酶在禽类卵泡选择及生长发育中的功能研究奠定了基础。     

籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶基因RNA干扰表达质粒的构建及鉴定

目的构建籽鹅卵泡颗粒细胞α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因RNA干扰表达质粒,并进行鉴定。方法利用RNAi Designer等网络在线RNA干扰设计软件设计3条可能会干扰籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因表达的插入DNA序列:shRNA-ENO1-350、shRNA-ENO1-892、shRNA-ENO1-591,将体外合成的3条干扰序列分别与线性化的pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建ENO1 RNA干扰表达质粒,在Lipofectamine 2000的介导下转染原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞,转染48 h后,荧光倒置显微镜下观察GFP的表达;实时荧光定量PCR和Western blot法检测转染细胞中ENO1基因mRNA的水平及蛋白的表达水平。结果 pGPU6/GFP/Neo-shDNA重组质粒经单酶切及测序证实构建正确;转染后48 h,转染重组质粒的颗粒细胞在荧光倒置显微镜下可见较强的绿色荧光,转染效率可达60%;与培养液组、转染试剂组和无关序列干扰组(shNC)相比,shRNA-ENO1-350组颗粒细胞中ENO1基因mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低(P0.01),其他各组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功构建了籽鹅卵泡颗粒细胞ENO1基因RNA干扰表达质粒,在原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞中,其表达量显著下降,为后续有关ENO1功能的研究奠定了基础。     

α-烯基磺酸盐的合成、性能及应用研究进展

介绍了α-烯基磺酸盐表面活性剂的结构,综述了其合成工艺,并从反应温和度、副反应以及后处理等方面对合成工艺进行了分析比较,总结了各工艺路线的优缺点。最后介绍了α-烯基磺酸盐的性质以及在各个领域的应用。     

α-烯基磺酸盐的应用发展及生产工艺控制

介绍了α-烯基磺酸盐(AOS)的特性及其应用发展历程,阐述了AOS的磺化反应机理。通过对AOS的生产工艺特点进行分析,阐明了其生产工艺控制关键点,并列举了典型的工艺数据。     

α-蒎烯衍生物发光配体的合成及性能研究

以α-蒎烯为原料,制备3种新型有机发光材料.由α-蒎烯合成桃金娘烯醛后,分别与邻氨基苯酚、邻苯二胺、邻氨基苯硫酚缩合得到3种α-蒎烯衍生物的发光配体,即:(1-苯并禸唑)-α-蒎烯,(1-苯并咪唑)-α-蒎烯,(1-苯并噻唑)-α-蒎烯.以四氢呋喃为溶剂,对它们的光谱性能进行了测试.1-(苯并禸唑)-α-蒎烯的最大吸收峰为466 nm,最大发射波长为441 nm,呈黄色光;1-(苯并咪唑)-α-蒎烯的最大吸收峰为299 nm,最大发射波长为384 nm,呈蓝绿色光;1-(苯并噻唑)-α-蒎烯的最大吸收峰为302 nm,最大发射波长为368 nm,呈蓝绿色光,可作为发光材料应用于有机电致发光器件中.     

冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化及其功能的预测分析

目的探讨冷应激大鼠体内miR-383-5p表达的变化,并对其功能进行预测分析。方法将大鼠置(4±0. 05)℃冷暴露12 h,同时设对照组(24℃常温饲养),qRT-PCR法检测miR-383-5p在血清和肝脏中的表达水平。应用miRanda、TargetScan和miRDB 3种软件同时对miR-383-5p进行靶基因预测,并通过DAVID 6. 8软件对miR-383-5p肝脏靶基因进行GO和KEGG分析。qRT-PCR和Western blot法检测下调BRL-3A细胞中miR-383-5p表达对部分代谢相关靶基因mRNA转录及蛋白表达的影响。结果冷应激后小鼠血清及肝脏中的miR-383-5p相对表达量均显著下降(P 0. 05)。生物信息学方法预测出733个在大鼠肝脏表达的靶基因,GO富集分析结果显示这些靶基因主要与细胞氧化还原过程、增殖和凋亡相关,KEGG分析结果显示富集靶基因最多的信号通路是代谢通路。下调miR-383-5p表达使BRL-3A细胞中Mtor、Pfkfb1和Apbb3基因的mRNA的转录水平显著升高(P 0. 05),Pfkfb1蛋白的表达量显著升高(P 0. 05)。结论冷应激可降低大鼠肝脏中miR-383-5p的表达量,进而通过调节Pfkfb1等靶基因的表达参与细胞的代谢、增殖和凋亡。     

α-烯烃磺酸盐(AOS)的性质及生产现状分析

详细介绍α-烯烃磺酸盐(AOS)的溶解性、表面活性以及对人体的安全性等性质,并概述了α-烯烃磺酸盐的生产工艺及其典型生产参数。最后对国内α-烯烃磺酸盐的生产现状进行了分析,对国内的主要生产企业的生产装置进行了总结。目前我国的AOS统计生产能力将达到23万t/a。     

脂肪醇脱水制C8、C8/C10α-烯烃的研究

采用催化剂催化脂肪醇脱水制成了C8-C10α-烯烃,通过改进催化剂和开发先进工艺,在脱水装置上进行脂肪醇脱水实验,得出较为理想的烯烃产品。产品经过了气相色谱法分析和蒸馏分离。实验结果表明,Ba、H/γ-Al2O3为较好的催化剂,并得出Ba负载量为12%、催化剂焙烧温度550℃、装置反应温度310℃、空速0.3h^-1时的C8、C8/C10烯烃选择性均达到最大值98.1%和97.5%。     

α-蒎烯催化异构化的产物分布及催化剂的研究进展

概述了近年来国内外对α-蒎烯催化异构化反应过程中SO42 /MxOy、沸石分子筛、杂多酸等催化剂的应用及其对异构化产物分布情况的影响,并在此基础上给予初步的展望.     

长侧链聚α-烯烃减阻剂的合成及性能

以Ziegler-Natta催化剂TiCl₄/Al(i-Bu)₃为催化体系,己烯、辛烯、癸烯和十二烯4种长链α-烯烃为聚合单体,制备得到超高相对分子质量聚烯烃减阻剂,考察了聚合反应条件对聚合物相对分子质量的影响,以及单体侧链长度对聚合物结晶性和减阻性能的影响。得到的最佳聚合反应条件为:主催化剂Ti Cl4浓度为5.2×10^–4 mol/L,聚合单体与环己烷体积比为1∶1,反应时间至少为1440 min,此时,聚合产物重均相对分子质量达到3.50×10⁶;通过13CNMR对聚合物进行分子结构表征,证明聚合完全且为目标产物;DSC曲线和XRD谱图表明,随着聚烯烃侧链长度的增加,聚合物结晶性增强,影响聚合物减阻剂溶解性。采用旋转圆盘测试方法表征了聚合物减阻率,结果表明,在相同相对分子质量条件下,随着聚合物的侧链长度增加,减阻率明显提高。     

由α-蒎烯制取对伞花烃液相反应条件的确定及催化剂的选择

通过对从 α-蒎烯制取对伞花烃的反应原理的讨论 ,初选了液相反应的主要试验条件 ,采用L9(34 )正交表设计出试验方案及对比试验 ,确定了α-蒎烯制取对伞花烃的液相反应条件及对氢转移催化剂进行了比较。     

十二指肠贾第虫α-6贾第素的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化十二指肠贾第虫α-6贾第素(α-6 Giardin)。方法以十二指肠贾第虫的c DNA为模板,PCR扩增α-6 Giardin基因片段,连接至p MD18-T载体,得到重组克隆质粒p MD18-T-α-6,将双酶切后得到的目的片段连接至p ET-28a表达载体中,得到重组表达质粒p ET-28a-α-6,转化至E.coli Rosetta感受态细胞中,IPTG诱导表达目的蛋白α-6 Giardin,收集菌体,离心后进行SDS-PAGE及Western blot鉴定,并利用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合的α-6 Giardin蛋白。结果质粒p ET-28a-α-6经双酶切鉴定,证明构建正确;表达的目的蛋白α-6 Giardin为带His标签的包涵体蛋白,相对分子质量约40 000,可与鼠抗His单抗特异性结合,具有良好的反应原性;纯化的重组α-6Giardin融合蛋白相对分子质量约40 000,纯度可达80%。结论成功克隆、表达并纯化了十二指肠贾第虫α-6Giardin蛋白,为十二指肠贾第虫α-6 Giardin进一步的功能研究奠定了基础。     

SO42-/SnO2固体超强酸的共沸除氯法制备、表征及其催化α-蒎烯异构化

采用共沸除氯法制备SO42-/SnO2固体超强酸,将其应用于α-蒎烯异构化。该催化剂的最佳制备条件：浸渍液硫酸浓度为1.5 mol/L,焙烧温度为550 ℃下焙烧3.0 h;反应最佳条件为：反应温度为110 ℃下反应3.0 h,催化剂用量为松节油中α-蒎烯质量分数的5%;在该条件下,α-蒎烯转化率为100%,莰烯选择性为64.85%。采用FT-IR、XRD、TG-DTA、SEM、BET对催化剂进行表征。结果表明：相同制备条件下,共沸除氯法制备的SO42-/SnO2较溶胶凝胶法与沉淀法制备的SO42-/SnO2催化活性高,超强酸中心多,颗粒小且均匀,团聚少。     

聚α-烯烃合成油制备过程中BF3络合物的分离及回收

阐述了聚-烯烃合成油制备过程中BF3络合物的分离及回收方法,包括吸附法、萃取法、吸收法、沉降法和裂解法。吸附法中SiO2和金属氟化物容易制备,适于小规模应用。萃取法中醇类萃取剂价格便宜、毒性小,优于氟代烷烃类萃取剂。吸收法产生副产物酸性化合物,腐蚀性强,已逐渐被淘汰。沉降法耗能较大,适于小规模应用。本文还介绍了裂解法的4种工艺,包括闪蒸/蒸发工艺、闪蒸-络合工艺、蒸馏-相分离工艺和裂解-气液分离工艺。综合4种工艺的优点,本实验室设计出真空蒸馏与BF3络合相结合的工艺,此工艺裂解充分,裂解后的BF3气体能够得到充分分离回收,具有一定的应用前景。     

山西酸枣嫩叶醇提物清除DPPH自由基及对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究

以山西酸枣嫩叶为试验材料,测定其醇提物各萃取组分清除自由基的能力,并将其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行初步研究。方法：将山西酸枣幼嫩叶片醇提物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,各萃取组分都配制成相当于原药材1 g/mL的萃取物水溶液,通过DPPH法测定清除DPPH的能力,并计算各萃取组分的IC₅₀。参照王贺研究方法、结合96微孔板法,然后以阿卡波糖为阳性对照,以PNPG为底物的酶-抑制剂筛选模型稍作改动,测定山西酸枣嫩叶醇提物各组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明：醇提物各组分清除DPPH自由基能力的强弱顺序是乙酸乙酯层>正丁醇层>萃后水层>石油醚层,其IC₅₀分别为0.73,3.13,3.46,55.37 mg/mL。山西酸枣叶醇提物各组分对α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,在试验浓度范围内,随着浓度升高,抑制效果增强,表现出明显的剂量依赖关系。阿卡波糖的抑制率最强,然后依次是乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、萃后水层萃取物、石油醚萃取物。     

SWA/TiO_2微球的制备及催化α-蒎烯异构化性能

采用溶胶-凝胶法和浸渍法,制备了纳米负载型H4SiW12O40（SWA）催化剂,考察了载体种类、SWA浸渍浓度对催化剂性能的影响。结果表明,用TiO2固载、8%SWA浸渍所得催化剂SWA/TiO2的催化性能较佳。利用XRD、TEM和BET比表面测定技术对其结构进行了表征。结果显示,该催化剂颗粒为圆球形,粒径为40～50 nm,具有较好的分散性。载体TiO2的引入明显增大了SWA的比表面积。将纳米SWA/TiO2用于催化α-蒎烯异构化反应,实验结果表明,该催化剂具有较好的催化活性和选择性,异构化反应的主产物是莰烯。在适宜的实验条件下,α-蒎烯的转化率达98%,莰烯的产率达58%。与其它负载型催化剂比较,SWA/TiO2具有用量少、活性高、反应时间短等特点。     

SO42-/SnOz固体超强酸的共沸除氯法制备、表征及其催化α-蒎烯异构化

采用共沸除氯法制备SO42-/SnO2固体超强酸,将其应用于α-蒎烯异构化.该催化剂的最佳制备条件:浸渍液硫酸浓度为1.5 mol/L,焙烧温度550℃,焙烧时间3.0h;反应最佳条件为:反应温度110℃,反应时间3.0h,催化剂用量为松节油中α-蒎烯质量的5％;在该条件下,α-蒎烯转化率为100％,莰烯选择性为64.85％.采用FTIR、XRD、TG-DTA、SEM、BET对催化剂进行了表征.结果表明:相同制备条件下,共沸除氯法制备的SO42-/SnO2较溶胶凝胶法与沉淀法制备的SO42-/SnO2催化活性高,超强酸中心多,颗粒小且均匀,团聚少.     

南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5产碱性α-淀粉 酶Amy172的克隆表达及酶学性质研究

对具有淀粉降解活性的南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5进行测序分析,根据基因注释结果,获得了一条基因序列为2 139 bp的淀粉酶基因,命名为amy172;通过特异性引物克隆获得Amy172的基因序列并进行异源表达;采用Ni-NTA层析柱对重组α-淀粉酶Amy172进行纯化,采用DNS法测定其酶学性质,采用薄层层析(TLC)技术对其酶解产物进行分析。结果表明:SDS-PAGE显示在分子量为79 kDa左右有一条明显的目的蛋白条带;重组α-淀粉酶Amy172最适温度为50℃,最适pH值为10.0,且在pH值5.0～10.0的范围内仍能保持80%以上的酶活,金属离子Fe~(3+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Ca~(2+)、K~+、Sr~(2+)、Ni~(2+)和Ba~(2+)对酶活性具有抑制作用;TLC分析Amy172的酶解产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖和麦芽四糖。     

非晶态α-烯烃共聚物/丁苯橡胶复合改性沥青的流变性能及微观分布状态

为改善丁苯橡胶（SBR）改性沥青的高温性能,选取非晶态α-烯烃共聚物（APAO）作为改性剂,制备了高低温性能良好兼顾流变性能的APAO/SBR复合改性沥青。研究了不同掺量APAO/SBR复合改性沥青的高中低温流变性能;利用荧光电子显微镜观察了沥青中聚合物的分布状态,以从微观上反应流变性能。结果表明,APAO的加入降低了沥青的不可恢复蠕变柔量和高温区温度敏感性,提高了沥青的软化点、抗车辙因子、弹性恢复率及疲劳破坏加载次数,说明APAO提高了沥青的高温性能和耐疲劳性能。尽管APAO对沥青的低温蠕变劲度模量（S）和蠕变速率（m）都有负面影响,但APAO掺量不大于5％（质量分数,下同）时基于K（S/m）指标的低温性能仍好于苯乙烯-丁二烯-苯乙烯嵌段共聚物改性沥青。综合考虑各项性能,建议选用APAO掺量为5％,在此掺量下APAO与SBR的相容性较好。