一株产酯酶海洋细菌的筛选及酯酶性质的研究

在培养基中添加三丁酸甘油酯和橄榄油等特异底物,以罗丹明B作指示剂,从海水中筛选出产酯酶的菌株LJ-7。生理生化鉴定该菌株为芽孢杆菌。发酵Bacillus LJ-7,研究其酯酶的酶学性质表明:此酯酶为碱性酯酶,最适作用温度和pH分别为40℃和8.0,K+和Mn2+对酯酶酶活力有强烈的抑制作用,而Cu2+和Fe2+对酶活的促进作用明显。     

热稳定性磷脂酶生产菌的分离鉴定及酶学性质研究

采用卵黄平板法从不同来源土壤样品中分离到25株磷脂酶生产菌株,经复筛得到1株磷脂酶产量较高的菌株JYSY1。根据培养特征、生理生化分析及16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定菌株JYSY1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌最适生长及产酶温度分别为25℃、30℃,最适生长及产酶初始pH值均为7.0。采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换、Sephadex G-100凝胶层析从菌株JYSY1的发酵上清液中分离纯化了磷脂酶,其分子质量约为48 kDa,最适作用温度为50℃,最适作用的pH为8.0,Co2+和Ca2+对酶促反应有促进作用,酶活力分别提高到111.59%和110.11%。Zn2+、Mg2+对酶有一定的抑制作用。SDS、PMSF、EDTA、EGTA均对酶有一定的抑制作用,该酶热稳定性较好,65℃下酶活力能保持55%以上,纯化的酶是一金属磷脂酶,属于磷脂酶C。     

产木聚糖酶菌株的筛选、鉴定及其酶学性质研究

以木聚糖为唯一碳源,采用平板筛选和摇瓶发酵相结合的方法,从腐朽木头中分离、筛选到一株高产木聚糖酶菌株XE-13-1,根据菌株的形态特征,并结合18S rDNA序列分析,初步鉴定菌株XE-13-1为桔绿木霉（Trichoderma citrinoviride）。经测定,菌株XE-13-1所产木聚糖酶的最适反应温度为50 ℃,最适反应pH值7,具有较好的pH稳定性。在30 ℃、pH 5～10的条件下保温2 h,该酶仍具有78%以上的酶活力。Mg2+、Fe2+、K+、Zn2+对该酶具有明显的促进作用,Cu2+对该酶具有明显的抑制作用。酶学性质研究结果表明,该酶在工业应用上具有较好的前景。     

根霉凝乳酶的分离纯化及其酶学特性研究

采用70%乙醇对凝乳酶进行粗提,回收率为52.65%.采用DE-52和Sephadex G-75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力1813.74 U/mg,回收率为11.25%.该酶的最适反应pH为5.7,在pH 5～7.5范围酶活力保持稳定;最适反应温度45℃,60℃保持20min,酶完全失活.Ca2+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Zn2+、Al3+对该酶的活力有不同程度的促进作用,其中以Al3+和Ca2+的促进作用最显著,Na+和K+对该酶的活力有抑制作用.通过SDS-PAGE测定,该酶的分子质量约35kDa.     

一株产高活性多酚氧化酶菌株筛选鉴定及其酶学性质

采用变色圈法从土壤样品中分离筛选产多酚氧化酶的菌株,对其进行形态学观察、分子生物学鉴定,并对其所产多酚氧化酶的酶学性质进行研究。结果表明,筛选得到1株产多酚氧化酶活性较高的菌株,命名为ZL-2,其被鉴定为竹黄菌属（Shiraia sp.）。菌株ZL-2发酵8 d产多酚氧化酶酶活最高,达到521 U/mL。菌株ZL-2产多酚氧化酶最适底物为邻苯二酚,其最适pH值为6、最适温度为30 ℃;酶活在温度20～40 ℃及pH 3～6范围内稳定。金属离子Cu2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Zn2+对多酚氧化酶都有激活作用,其中Cu2+激活作用最强;Ca2+、Al3+对酶活有一定抑制作用;L-抗坏血酸和亚硫酸氢钠对该酶抑制作用较强。     

一株产壳聚糖酶海洋真菌MF-08的分离鉴定及酶学性质研究

从实验室保存的海洋产壳聚糖酶真菌中分离纯化出一株产壳聚糖酶活性较高的菌株,命名为MF-08。通过26S r DNA序列分析并结合形态学鉴定,将海洋真菌MF-08归为黄曲霉群。壳聚糖酶的最适作用温度为40℃;最适反应p H为5.2;酶活在p H4.0~6.0和小于40℃范围内相对稳定;Cu2+、Fe3+和Hg2+对壳聚糖酶活性有明显的抑制作用。     

酒曲根霉F34菌株凝乳酶的初步纯化及部分酶学性质的研究

采用50%和75%乙醇分级沉淀的方法,对凝乳酶进行粗提,得率为43.9%.然后采用Sephadex G75柱进行纯化,经冷冻干燥成酶粉,其活力达到13008SU/g.F34菌株凝乳酶的最适反应温度为50℃,在40℃保持60min凝乳酶活力保持稳定,在60℃保持5min则完全失活.在pH为5.5～7.2的范围内,随着pH的降低,凝乳酶活力逐渐升高,F34菌株凝乳酶活力保持稳定的pH在3.5左右.Ca2 、Zn2 、Fe3 、Fe2 对凝乳酶活力表现明显的促进作用,K 、Mg2 对凝乳酶活力表现微弱的促进作用,Na 、Cu2 、Co2 、Li2 对凝乳酶活力表现明显的抑制作用.     

中性植酸酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质

从土壤中分离到一株高产中性植酸酶的菌株,酶活力达12.52U/mL。对其进行形态、生理、生化、分子生物学鉴定,初步鉴定为放射型根瘤杆菌(Agrobacterium radiobacter)。酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应温度为45℃;最适反应pH 值为7.0;65℃处理60min 酶活力保持80% 左右,有一定耐热性;在pH5.5～8.0 之间,稳定性较好;Ba2+ 对酶活力有一定的激活作用,Fe2+、Mg2+、Zn2+ 和Cu2+ 对酶活力均有一定程度的抑制作用,其中Fe2+ 的抑制作用最强。     

一种来源于青霉的β-半乳糖苷酶酶学性质研究

从土壤里筛选到20株产β-半乳糖苷酶的菌株,其中β-半乳糖苷酶活力最高的是菌株L7,通过形态学观察和18SrDNA序列分析,得出该菌株为斜卧青霉;并研究了其β-半乳糖苷酶的酶学性质。结果表明:β-半乳糖苷酶最适作用温度为60℃,最适pH为6.0,在60℃以下和pH3.0 7.0有较高的稳定性;Mg2+、Mn2+对β-半乳糖苷酶活性有显著的激活作用,Cu2+、Fe2+、和Zn+对酶活有较强的抑制作用;以ONPG为底物采用双倒数做图法测得Km为6.25mmol/L;经过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,该酶蛋白的分子量约为110kDa。     

生淀粉酶细菌菌株的筛选及其酶学性质研究

分离筛选到一株生淀粉酶酶活较高的菌株QD006,通过形态和常规生理生化鉴定,初步确定该菌为Staphylococcus intermedius。该菌产生的生淀粉酶最适温度为50℃,最适pH为6.5,该酶具有良好的热稳定性。Na+、K+、Ca2+对该酶有激活作用,Fe3+、Zn2+和Cu2+对该酶有抑制作用。     

蓝圆鲹肝脏酯酶的分离纯化与性质分析

以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶.该酶的回收率为0.69％,纯化倍数为1150倍.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Superdex G75凝...     

绿色木霉β-葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质

针对绿色木霉AS3.3711产生的β-葡萄糖苷酶组分,先后运用包括乙酸铵沉淀、透析、Sephadex G-150葡聚糖凝胶柱层析在内的一系列分离纯化技术对该纤维素酶进行纯化,得到β-葡萄糖苷酶纯化组分,并对该酶的酶学性质进行研究。纯化后酶液的蛋白质量浓度为8.12 mg/mL、酶活力为4.08 U/mL,纯化倍数达到18.48,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）测定分子质量为66.0 kD。绿色木霉β-葡萄糖苷酶在酸性条件下稳定性良好,最适pH值为5.0;在温度60～70 ℃能长时间保持较高酶活力,最适反应温度为60 ℃。金属离子中,Ca2+、Mg2+、K+对绿色木霉AS3.3711 β-葡萄糖苷酶活力起到促进作用,Ca2+促进作用最强;而Zn2+、Fe3+对该酶有抑制作用,Ag+、Cu2+、Hg2+重金属离子使β-葡萄糖苷酶几乎丧失了全部活性。     

韦伯灵芝漆酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级盐析、透析、聚乙二醇浓缩和高效液相色谱柱层析从韦伯灵芝TZC-1 发酵液中分离纯化得到电泳纯漆酶,其纯化倍数为37.1 倍,酶活性回收率为21.3%。活性-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)结果表明该漆酶由一种同工酶组成,纯化漆酶经SDS-PAGE 检测显示为单一条带,其分子质量约为40kD。该漆酶催化底物ABTS 的最适反应温度为50～60℃,最适反应pH 值为4.6,在60℃以下和pH3.0～5.0 范围内保持稳定,以ABTS为底物的表观Km 值为13.8μmol/L。Fe2+ 完全抑制酶活,Al3+ 和Mn2+ 对该漆酶也有明显抑制作用,Hg+、Cu2+ 和Mg2+ 对该酶有明显激活作用,而Zn2+、Ba2+ 及K+ 对该酶活性影响不大。     

淫羊藿苷糖苷酶的纯化及其酶学性质的研究

对由菌株Absidiasp.E9r在发酵培养中产生的淫羊藿苷糖苷酶进行了分离纯化并对其酶性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为65ku,酶反应的最适温度和pH值分别为50℃和4.0,在20～60℃,pH3.0～6.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究,Vmax=3.012mmol/(L.h),km=58.59mmol/L。     

托柄菝葜果色素提取及其性质研究

以民族药托柄菝葜的成熟果实为材料,对其红色素的提取条件及理化性质进行研究.结果表明,托柄菝葜果色素提取的最佳条件为:40％vol乙醇水溶液、浸提温度60℃、浸提时间lh.托柄菝葜果色素在自然光照下稳定,但添加金属离子的色素溶液对光不稳定;色素溶液在酸性环境中呈现鲜艳的橙红色,在中性及碱性环境中变为褐绿色.VC对托柄菝葜色素具有增色作用;柠檬酸、EDTA对色素无明显影响;亚硫酸钠、高锰酸钾及苯甲酸钠对色素具有减色作用.金属离子Ca2+、Mn2+、Zn2+、K+、Na+、Fe2+、Mg2+、Cu2+、Co2+、Al3+、Pb2+等离子能减弱托柄菝葜果色素对光的稳定性;Sn2+、Fe3+影响色素稳定性.     

高产β-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选、产酶条件优化及酶学性质研究

豉香型白酒肥猪肉浸制和酝浸阶段会析出脂肪油。该研究通过定量分析脂肪油样本中的长链、中链脂肪酸和二元酸含量，推论其氧化产物的产生机理。结果表明，脂肪油的主要成分为饱和脂肪酸（SFA）和单不饱和脂肪酸（MUFA），而多不饱和脂肪酸（PUFA）含量均少于70 g/kg。脂肪油氧化程度越深，PUFA含量越少，中链脂肪酸和二元酸等氧化产物的含量越多，其最高含量分别达4.52 g/kg和3.02 g/kg。随着脂肪油氧化程度的加深，油酸氧化产物如辛酸和癸酸逐渐成为主要的中链脂肪酸，而壬二酸则始终是含量最多的二元酸。该成果可为后续肥肉浸制工艺创新提供理论基础。     

重组大肠杆菌耐热α - 淀粉酶的分离纯化及其酶学性质研究

对重组大肠杆菌耐热α- 淀粉酶分离纯化及其酶学性质进行研究,结果表明：该酶分子量约为90kD,最适温度为60～70℃,最适pH 值为6.6,酶学动力学常数Km 值为143.52mmol/L;酶活力在pH5.4～7.8 较为稳定;4℃保存2 周酶活力仅下降一半,35℃保温3d 有50% 以上的酶活力,70℃以上酶失活很快;Mn2+ 对酶催化作用有较大的促进,K+、Ca2+ 有微弱的促进作用,Mg2+ 对催化反应无影响,Cu2+ 的抑制作用最强,其他金属离子Co2+、Zn2+、Fe2+ 对酶催化作用有不同程度的抑制作用;有机离子对酶催化作用均是抑制作用,其中抑制作用最强的是SDS。