韦伯灵芝漆酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级盐析、透析、聚乙二醇浓缩和高效液相色谱柱层析从韦伯灵芝TZC-1 发酵液中分离纯化得到电泳纯漆酶,其纯化倍数为37.1 倍,酶活性回收率为21.3%。活性-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)结果表明该漆酶由一种同工酶组成,纯化漆酶经SDS-PAGE 检测显示为单一条带,其分子质量约为40kD。该漆酶催化底物ABTS 的最适反应温度为50～60℃,最适反应pH 值为4.6,在60℃以下和pH3.0～5.0 范围内保持稳定,以ABTS为底物的表观Km 值为13.8μmol/L。Fe2+ 完全抑制酶活,Al3+ 和Mn2+ 对该漆酶也有明显抑制作用,Hg+、Cu2+ 和Mg2+ 对该酶有明显激活作用,而Zn2+、Ba2+ 及K+ 对该酶活性影响不大。     

灵芝高静水压诱变及其漆酶发酵的研究

研究了高静水压处理对灵芝生长及其产漆酶的影响,实验压力为0.1￣400MPa,保压时间为15￣60min。实验结果表明,灵芝致死率随处理压力的增大而增加,在150MPa下处理30min获得了一株生物量和漆酶产量都大幅增加的突变株G1502,其最大生物量及酶活分别比出发菌株提高了19.3%和283%,发酵时间也缩短了1d。      

灵芝高静水压诱变及其漆酶发酵的研究

研究了高静水压处理对灵芝生长及其产漆酶的影响,实验压力为0.1￣400MPa,保压时间为15￣60min。实验结果表明,灵芝致死率随处理压力的增大而增加,在150MPa下处理30min获得了一株生物量和漆酶产量都大幅增加的突变株G1502,其最大生物量及酶活分别比出发菌株提高了19.3%和283%,发酵时间也缩短了1d。     

灵芝固态发酵三七渣产漆酶的培养基配方优化

该试验通过单因素试验考察了酵母浸出粉添加量、硫酸铜添加量、培养基初始水含量、磷酸二氢钾添加量、硫酸镁添加量对灵芝固态发酵三七渣产漆酶的影响,并采用正交试验对培养基配方进行了优化。研究结果表明,优化的培养基配方为采用过60目筛的三七渣10 g,酵母浸出粉添加量3%,磷酸二氢钠添加量0.15%,硫酸铜添加量0.02%,硫酸镁添加量0.2%,培养基初始水含量60%,pH自然。在此优化条件下,灵芝固态发酵三七渣产生的漆酶活性可达8.69 U/g。     

灵芝漆酶高产菌株的筛选及产酶诱导

通过对灵芝1个野生菌株和9个栽培菌株进行平板初筛和液体发酵复筛,得到一株漆酶高产菌株。以该菌株为研究对象,分别考察了不同浓度Cu2+和真菌诱导子对其产漆酶的影响。结果表明:在一定浓度范围内,Cu2+能够促进该灵芝菌株漆酶的生产,当Cu2+浓度为1.0 mmol/L时,灵芝漆酶的活性达到最高;真菌诱导子同样能够显著促进灵芝漆酶的生产,随着真菌诱导子浓度的升高,灵芝漆酶的活性也逐渐升高,当真菌诱导子浓度达到120μg/mL时,灵芝漆酶活性达到最高。     

灵芝漆酶对茶多酚染色羊毛织物性能的影响

为提升天然染料染色的染深性和色牢度,采用灵芝漆酶对茶多酚染色羊毛织物进行处理,研究漆酶对直接染色和媒染染色羊毛织物的影响。结果表明：漆酶处理可明显提高茶多酚染色羊毛织物的色深值和色牢度,羊毛织物的耐皂洗和耐汗渍色牢度均达到4～5级,耐光色牢度达到4级;灵芝漆酶处理茶多酚染色织物具有更加优异的紫外线防护能力;织物表面亲水性下降,体现出疏水性能。     

灵芝原生质体诱变选育高产漆酶突变株的研究

对一株产漆酶活性较高的灵芝(Ganoderma.lucidumKarstNo.1)原生质体的制备、再生及紫外诱变育种进行了研究,获得了1株漆酶活性比对照菌株提高2.83倍的突变株G301。实验所确定的原生质体最佳制备条件为:以蔗糖为稳渗剂,采用4%(W/V)溶壁酶与2%(W/V)蜗牛酶等体积混合酶液,在30℃、pH6.0下,对液体培养48h的灵芝菌丝体酶解1h;同时实验所确定的原生质体诱变的适宜条件为:30W紫外灯距离40cm照射30s。     

灵芝TR6号菌株液体培养产漆酶条件的研究

分别用碳源、氮源、铜离子、诱导剂等不同的培养方式优化液体培养条件,并研究其对灵芝TR6号菌株漆酶分泌能力的影响.结果表明:与静止培养相比较,摇床培养能明显促进灵芝TR6号漆酶的分泌.以可溶性淀粉(25g/L)为碳源,胰蛋白胨为氮源(2 g/L),培养7 d后添加硫酸铜使铜,使离子浓度达到1.0mmol/L.以0.03 mmol/L ABTS作诱导剂.灵芝TR6号菌株分泌漆酶最多,漆酶活性可迭11 000 U/L.     

紫外和超高压诱导漆酶产生菌变异的对比研究

分别利用紫外线和超高压诱变漆酶产生菌灵芝(Ganoderma.lucidum Karst),发现超高压的诱变幅度较大.经初步筛选和发酵,获得了2株具有较大应用潜力的漆酶超高压突变株G1502和G2001,前者漆酶活力比出发菌株提高了2.83倍,发酵时间缩短了1 d;后者漆酶活力提高了0.89倍,发酵时间缩短了3 d.     

红芝固态发酵产漆酶条件研究

对红芝固态发酵产漆酶的培养基和培养条件进行了研究。结果表明,适宜的固态发酵培养基为:以1.5∶1甘蔗渣和麦麸为基质,葡萄糖0.5%、硫酸铵5%、CuSO4.5H2O 0.01%、培养基含水率73%;适宜的固态培养条件为:初始pH值4.0,接种量20%(V∶W),28℃静置培养8 d,酶活达到最高23803 U/g干曲。     

L-Gln高产突变株发酵中试过程的研究

以诱变筛选得到的高产Gln突变株C.glutamicum N-U-6为研究对象,对其进行了5L发酵罐的中试实验。在采用搅拌速率为850r/min和通气量为1.5vvm的条件下,在发酵中后期流加30%的尿素达到控制pH维持6.2和补充氮源的双重目的,进一步提高了产量,最高达56.67g/L,发酵周期缩短到44h。此外还进行了氮饥饿处理的实验:初期脲量减少为原来的60%,后期补加尿素以补充氮源同时也起到控制pH的作用,谷氨酰胺的产量达到62.52g/L,比氮饥饿处理前（56.67g/L）提高了约6%,其发酵周期缩短到40h。      

白腐菌发酵培养及诱导剂对漆酶合成的影响

研究了碳源、氮源及诱导剂添加方式对白腐菌P.conchatus液体培养产漆酶的影响.结果表明,当碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏,C/N比为15∶1时,P.conchatus合成漆酶酶活达到8795U·L-1;在初始培养基中,添加1.5％麦麸与1 mmol/L Cu2+共同诱导漆酶合成,酶活可达到51004U·L-1;将Cu2的添加时间改在发酵后第4d,添加量为3mmol/L,其他条件不变,漆酶酶活达到101968U·L-1,比在初始培养基中添加1 mmol/L Cu2+所达到的酶活高了近两倍.     

白腐菌发酵培养及诱导剂对漆酶合成的影响

研究了碳源、氮源及诱导剂添加方式对白腐菌P.conchatus液体培养产漆酶的影响。结果表明,当碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏,C/N比为15∶1时,P.conchatus合成漆酶酶活达到8795U·L-1;在初始培养基中,添加1.5%麦麸与1mmol/LCu2+共同诱导漆酶合成,酶活可达到51004U·L-1;将Cu2+的添加时间改在发酵后第4d,添加量为3mmol/L,其他条件不变,漆酶酶活达到101968U·L-1,比在初始培养基中添加1mmol/LCu2+所达到的酶活高了近两倍。      

灵芝菌丝液体深层发酵培养基的研究

利用液体深层发酵方法进行灵芝菌丝发酵最佳培养基的确定。通过单因素实验研究了可溶性淀粉、葡萄糖、蛋白胨、麸皮、MgSO4·7H2O、KH2PO4对液体深层发酵灵芝菌丝生长的影响,并通过单因素试验和正交试验确定了灵芝液体深层发酵的最适培养基配比为可溶性淀粉1%,葡萄糖2.5%,蛋白胨0.1%,麸皮0.5%,MgSO4·7H2O0.015%,KH2PO40.1%。发酵6d干菌体得率为19.91g/L。     

灵芝小试发酵生产灵芝多糖的培养基配方的优化

研究了灵芝菌株(5.542)液态发酵生产灵芝多糖的培养基配方,通过对比试验和正交试验,其最佳液体培养基配方为:蔗糖3%,葡萄糖1%,玉米粉2%,蛋白胨0.2%,酵母粉0.1%,磷酸二氢钾0.15%,硫酸镁0.075%.     

优化灵芝真菌发酵条件的研究

通过摇瓶试验研究确定转速、接种量、通气量为影响灵芝真菌罐上发酵培养的影响因素,以菌体量、胞外多糖产量为目的产物,利用L9（34）正交试验进行7L发酵罐发酵条件优化,分析得出灵芝真菌培养的最佳工艺条件为：转速200r／min、接种量15％、通气量200L／h;菌丝体最大产量为7．35g／L,胞外多糖干重最高产量为0．92g／L。菌体量与胞体多糖产量存在线性关系,得到回归方程为y=0．0275x＋0．5968。     

液体发酵生产灵芝三萜酸的过程调控研究进展

灵芝三萜酸是灵芝发挥免疫调节功能的特征性成分之一.目前三萜酸的来源包括子实体提取、灵芝孢子粉破壁提取、液体发酵等,其中液体发酵工艺因具有周期短、发酵条件易精确控制,并可实现工业化生产等优点,成为国内外研究的热点.该文从过程发酵条件和外源诱导子2个方面对三萜酸液体发酵调控进行综述,为提高三萜酸产量提供发酵技术参考,并对相...