Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子肽的工艺研究

以绿豆为原料,用Alcalase碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备小分子多肽.采用单因素及多因素试验方法优化酶解条件.考察酶解过程中绿豆分离蛋白预处理、料液比、酶解温度、加酶量、酶解时间等对小肽得率的影响.测定水解产物的功能特性,并用液质联用技术(LC-MS)考察酶解得到的小肽的分子量分布范围.结果表明:绿豆分离蛋白预处理条件为95℃处理20 min.酶解最佳条件为:65℃、pH8.5、底物浓度9%、加酶量6 000 U/g、酶解240 min,水解度可达35.86%.经液质联用(HPLC-MS)分析证明水解产物的分子量集中在1 000 u以下.绿豆分离蛋白各功能特性得到很好地改善,表明该酶对绿豆分离蛋白水解效果良好,完全能达到制备多肽的水解度要求.     

Protex-6L碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白的工艺研究

选用Protex-6L蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成肽和氨基酸。以水解度为考察指标,对其酶解工艺进行优化。基于单因素实验,考察了酶解参数:pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用designexpert软件设计响应面对酶解条件进行优化分析,并在最优条件下通过SephadexG-75分析水解产物的分子量分布。结果表明:pH8.85、酶解温度57.34℃、底物质量分数7.00%、加酶量6884.36U/g、酶解时间4.19h,此条件下的绿豆分离蛋白的水解度(DH)为36.60%。水解得到的小肽分子量大部分都小于4000u。     

雄蚕蛾蛋白制备功能性多肽酶解条件优化研究

以水解度(DH)和肽得率为指标,分别考察温度、pH值、底物浓度、加酶量对碱性蛋白酶酶解雄蚕蛾蛋白制备功能性多肽的影响,通过二次回归正交旋转组合设计确定碱性蛋白酶酶解反应的最佳优化参数为:温度64.5℃、pH9.36、底物浓度4.46%、加酶量6660U/ml、反应时间300min。在此条件下,酶解液水解度达到21.65%、肽得率达到34.81%。     

酶解玉米黄粉制备多肽的工艺研究

对酶法水解玉米黄粉蛋白制备多肽的工艺进行了研究试验以水解度DH%和酸溶性肽得率YASP%为指标确定了最佳酶解工艺条件。结果表明,在pH6.8,酶解温度54℃,加酶量1.2ml,底物浓度1%的条件下酶解2h,可使水解度和酸溶性肽得率分别达到28.94%和54.18%。酶解液经分离、脱盐、脱苦、脱色、浓缩和干燥等工序,可制成颜色淡黄、无异味的玉米黄粉多肽,是很有前景的功能性食品。     

超声波辅助分步酶解法制备菜籽肽及复合酶筛选

以反胶束法萃取得到的菜籽粕蛋白液为原料,以酶解产物的水解度、三氯乙酸氮溶解指数和肽得率为评价指标,并参照酶解液肽的分子量分布,考察超声波辅助分步酶解法对原料水解的影响。从木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、碱性蛋白酶、复合风味酶、胰蛋白酶组成的6 个复合酶中,筛选出制备优质小分子量菜籽肽的适宜复合酶。结果表明,木瓜蛋白酶与复合风味酶、胰蛋白酶与复合风味酶组成的两种复合酶均比较适合酶解此种菜籽粕蛋白,它们的酶解产物水解度和多肽得率较高,所含小分子量肽也较多。     

绿豆抗氧化肽的酶法制备及其抗氧化活性

为提高绿豆淀粉生产过程中产生的废弃物绿豆蛋白的资源利用率,研究了酶法制备绿豆抗氧化肽的最佳条件,并探究其抗氧化活性。通过选用不同蛋白酶及其复合酶,对绿豆蛋白进行水解,综合考虑反应时间、加酶量等因素,对酶解反应进行优化。通过体外抗氧化实验对水解制得的多肽溶液进行抗氧化能力检测,最终确立了最佳的反应条件,具体如下：选用中性蛋白酶进行酶解,底物质量分数3%,酶解时间3 h,加酶量质量分数2%,pH 7,温度50 ℃。按照该条件所制得的绿豆多肽溶液,质量浓度为5 mg/mL时,DPPH自由基清除率可达（91.58±2.44）%,同时还具有较强的还原能力。经凝胶层析柱分离纯化后得到5个分离组分,其中小分子肽段组分5的抗氧化能力最强,高于其他大分子肽段以及未分离多肽。     

鹰嘴豆降胆固醇肽的制备及活性

为了获得降胆固醇肽,本试验以鹰嘴豆为原料,将提取的分离蛋白通过碱性蛋白酶水解,选择加酶量、料液比、酶解时间3个因素,以水解度和胆固醇抑制率为考察指标,进行单因素试验,并在此基础上,以胆固醇抑制率为评价指标,采用Box-Behnken响应面分析法优化酶解鹰嘴豆蛋白,制备降胆固醇活性肽的条件;并将制备的鹰嘴豆肽对Wister大鼠进行试验。结果表明:鹰嘴豆蛋白最佳酶解工艺为:p H 8.0,加酶量2%,料液比2%,酶解温度50℃,酶解时间80 min,在此条件下鹰嘴豆多肽体外胆固醇抑制率可达到71.55%;动物试验显示灌胃100 mg/kg bw剂量的鹰嘴豆肽可使大鼠体内胆固醇含量降低22.39%。     

磁化水结合超声波辅助Alcalase 2.4L FG酶水解绿豆蛋白的工艺研究

利用Alcalase 2.4L FG酶制备绿豆肽时对绿豆蛋白进行磁化水溶解、超声波预处理。以可溶性蛋白含量为检测指标,研究磁化水、超声波处理时间、超声波功率、超声波处理温度对绿豆可溶性蛋白含量的影响,进而以水解度为指标,研究底物浓度、温度、酶浓度和p H对Alcalase 2.4L FG酶水解效果的影响,Laemmli-SDS-PAGE电泳表征水解肽的分子量分布。结果表明:磁化水溶解可提高绿豆可溶性蛋白含量,超声波预处理的最佳工艺参数为:45℃、20min、225W;Alcalase 2.4L FG碱性蛋白酶水解的最适条件为:底物浓度5.27%、加酶量3.01%、p H8.5、温度60℃。Laemmli-SDS-PAGE分析结果显示,该方法得到的水解肽分子量分布范围广,6.5KDa以下含量较高,水解效果较好。     

碱性蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备多肽的工艺研究

选用Protex-6L碱性蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解生成多肽,以多肽肽得率为考察指标．对其酶解工艺进行研究。基于单因素实验,考察了酶解条件：pH、酶解温度、底物浓度、加酶量、酶解时间等对酶解的影响,利用DesignExpert7．1．1软件设计响应面对酶解条件进行优化分析。结果表明：pH9．37、酶解温度55℃、底物质量分数7．0％、加酶量5000．02U／g条件下酶解4．76h,多肽得率可达到91．37％。     

酶解制备高得率大豆肽工艺条件优化

用Alcalage碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽.通过单因素实验研究了底物质量分数、酶解pH、酶解温度、加酶量对蛋白水解度和大豆肽得率的影响,并通过响应面分析法对酶解条件进行了优化,得出最佳条件为:底物质量分数5%,酶解pH9.5,酶解温度55℃,加酶量5 400 U/g蛋白.在此条件下,大豆分离蛋白水解度为20.16%,大豆肽得率为92.30%.     

核桃粕中多肽的酶法制备工艺

探索生物酶法水解核桃蛋白制备核桃多肽的工艺。以酶解蛋白的水解度和氮溶指数作为考察指标,单因素筛选核桃蛋白水解酶、反应底物的液料比、酶解时间等条件,优化酶水解核桃蛋白及制备核桃多肽的提取的工艺参数。选用胰蛋白酶作为核桃蛋白的水解酶,酶解条件为:pH 7.0,温度45℃,液料比10∶1 (mL/g),酶解时间240 min,添加量4 000 U/g。该条件下改性后的核桃蛋白氮溶指数为69.61%,水解度为39.31%,提取的多肽分子量小于1 450 Da的含量为36.33%。基于酶水解法,此次试验的提取工艺合理可行,为核桃多肽的提取提供了理论依据。     

菜籽粕分步酶解制备水解产物的研究

以脱脂菜籽粕为原料,水解度为考察指标,采用碱性蛋白酶与中性蛋白酶分步酶解法制备复合氨基酸及小肽等水解产物。通过正交试验确定碱性蛋白酶的最佳酶解工艺参数为：温度50℃、pH10.5、加酶量3250U/g、液料比15:1、时间1.5h;中性蛋白酶的最佳酶解工艺参数为：温度45℃、pH9、加酶量4500U/g、时间2h。制备的复合氨基酸及小肽等水解产物总水解度和氮收率可达25.66% 和86.8%;水解产物在pH3～7 范围内,氮溶解指数高于72.19％。三氯乙酸氮溶解指数达85.67%,且产物中植酸、单宁等主要的抗营养因子的含量明显降低。     

微波辅助酶解提取硫酸软骨素下脚料中胶原蛋白肽的工艺研究

以生产硫酸软骨素的下脚料为原料,采用微波辅助酶解制备胶原蛋白肽,以水解度、相对分子量分布为指标确定最佳水解条件。通过对酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶及风味蛋白酶进行筛选,确定风味蛋白酶水解产物的水解度最高;研究了加酶量、底物浓度、反应温度、pH对酶解反应的影响,确定酶解的最优工艺条件为:加酶量6%,底物浓度10%,反应温度50℃,pH7.0。此外,与单独的酶解相比,微波辅助酶解缩短了酶解时间近50%,分子量小于1 000的胶原蛋白肽比例占91.2%。     

动物蛋白酶酶解制备广西产牡蛎肉抗肿瘤活性肽的实验研究

目的:采用动物蛋白酶作为工具酶对牡蛎蛋白质进行酶解,并对酶解条件采用正交实验进行优化.以期获得具有抑制肿瘤细胞生长的活性肽.方法:利用正交实验L9(33),以氨基氮生成率和肿瘤细胞生长抑制率为观察指标,确定动物蛋白水解酶水解广西产牡蛎肉的水解条件如温度、酶量、水解时间,并对最佳水解产物进行柱层析和超滤分离获得不同分子量的多肽,采用MTT法检测了各组分对鼻咽癌细胞CNE-1生长的抑制作用.结果:动物蛋白水解酶在60℃、酶的质量分数2.0‰、水解时间为4h的水解条件下获得的水解氧基氮含量最高;水解产物在分子量为小于3000Da多肽具有明显地抑制鼻咽癌CNE-1细胞的生长作用.结论:选取动物蛋白水解酶作用的最佳条件,可以获得具有抗肿瘤细胞生长的牡蛎蛋白活性肽,具有进一步开发应用的价值.     

茶渣蛋白抗氧化肽制备及其活性研究

以茶渣蛋白为原料,采用酶解法制备茶渣蛋白抗氧化肽。分别以抗氧化肽的还原力和水解度为考察指标,通过单因素实验和响应面优化酶解法制备茶渣蛋白抗氧化肽的制备工艺,采用超滤法对酶解液进行初步分离纯化,并考察了温度、酸碱度、金属离子、食品添加剂以及体外消化环境对分子量小于3 kDa的茶渣蛋白抗氧化肽的还原力稳定性的影响。结果表明,酶解法制备茶渣蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为底物浓度2%、酶解时间3 h、温度51 ℃、pH8.0、加酶量3034 U/g,在此条件下,茶渣抗氧化肽的还原力为0.316;当分子量小于3 kDa时,抗氧化肽的还原力为0.412,比纯化前提高了30.77%。温度从30 ℃升温至90 ℃,还原力从0.410降低至0.360;在酸碱及食品添加剂环境中仍能保持较好的还原力;在模拟消化环境中8 h后,还原力从0.412降为0.327。     

Flavourzyme蛋白酶酶解绿豆分离蛋白制备低聚肽的工艺研究

本文选用Flavourzyme蛋白酶对绿豆分离蛋白进行酶法水解以制备低聚肽。在单因素考察的基础上,采用四因素、三水平的正交试验设计优化酶解条件。得到最适的工艺条件为:温度60℃、pH7.0、底物浓度9%、酶浓度6000U/g,水解时间180min。在此条件下,绿豆分离蛋白水解度的平均值可达22.77%。     

罗非鱼排酶解工艺的研究

选用中性蛋白酶酶解罗非鱼排,制备蛋白水解液。以水解度为优化指标,考察初始pH值、酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间对水解度的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合设计和响应面分析法,确定最佳工艺条件;并在最佳工艺条件下,考察水浴、高压蒸汽、超声波和微波等预处理方式对水解度的影响。结果表明:最佳工艺条件为温度49℃,加酶量1 824U/g,水解时间6h,此时罗非鱼排水解度(DH)可达33.7%;除了110℃的高压蒸汽和180w功率的超声波预处理有助于罗非鱼排的进一步水解,其它的预处理方式均不利于罗非鱼排的后续水解。     

Alcalase酶解制备大豆肽工艺条件的优化

以大豆分离蛋白为原料,研究了用Alcalase碱性蛋白酶水解制备大豆肽。以蛋白水解度和蛋白水解液等电点溶解度为指标,通过单因素试验及正交试验得出最佳水解条件为：料液比1：20,酶解pH8．5,酶解温度60℃,加酶量5400U／g蛋白。此条件下,蛋白水解度为18．79％,等电点溶解度是86．32％。     

鸡胚多肽分子量分布研究比较

采用Sephadex G-25层析、SDS-PAGE电泳等分析方法对鸡胚多肽水解产物的分子量分布进行分析,结果表明,蛋白酶所得到的水解产物肽分子是连续分布的,不同的酶酶解液所得的多肽分子量分布不同。TR-菠萝复合酶酶解液中酶解得到较多低于MW30000不同分子量的低分子小肽,因此选择其作为酶解鸡胚蛋白的最佳作用酶。     

小黑豆多肽加工工艺的研究

本研究采用双酶分步水解法制备小黑豆多肽.最佳工艺条件为:先用枯草杆菌碱性蛋白酶,在50℃、 pH9.0下水解经预处理的小黑豆分离蛋白4h;再用霉菌中性蛋白酶在pH 7.0、50℃水解4h,加酶量均为4000U/g.该工艺的多肽得率可以达到80%以上,水解度(DH%)为 32.75% .凝胶色谱分析表明,小于10000D的多肽可达到总多肽的91.61%.