三阴性乳腺癌化疗及放疗增敏作用研究进展

三阴性乳腺癌是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2的表达均为阴性的乳腺癌,具有预后差、复发率高、侵袭转移快和死亡率高等特点。化疗是临床治疗三阴性乳腺癌的主要手段之一,但随着治疗的进展,三阴性乳腺癌患者易产生不同程度的耐药反应,从而使治疗效果大大降低。因此,寻找有效的增敏靶点和制剂具有十分重要的治疗价值。本文将从三阴性乳腺癌放疗及化疗现状,已知的增敏靶点研究进展以及具有潜在增敏作用靶点的研究进展方面予以综述,旨在为三阴性乳腺癌化疗提供借鉴和参考。     

膀胱癌化疗药物增敏机制研究进展

近年来化疗耐药严重制约着膀胱癌的治疗效果,术后复发率和转移率居高不下。因此,逆转膀胱癌化疗耐药性,寻找有效的化疗增敏靶点并探究其机制十分重要。目前临床上多采用经尿道膀胱肿瘤切除术,术后选择辅助化疗药物进行治疗,常用化疗药物包括顺铂、吉西他滨、阿霉素、表柔比星等。目前实现这些药物化疗增敏的靶点基因和分子在膀胱癌细胞中呈现不同的表达状态,且通过这些靶点实现增敏的机制也各有不同。本文将就膀胱癌化疗药物增敏靶点及机制的研究进展进行综述,以期为膀胱癌的化疗增敏探索新的思路。     

槐米中槲皮素提纯、鉴定以及诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用

目的 研究从槐米中槲皮素(Quercetin,Que)提取、鉴定和对人乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制以及诱导凋亡作用。方法 采用碱溶解酸沉淀法提纯槐米中槲皮素,并进行红外光谱分析;采用体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,用不同浓度槲皮素处理;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长抑制率;采用细胞凋亡DNA Ladder和FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞仪检测,槲皮素作用后MCF-7细胞凋亡情况。结果 不同浓度槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);10.0 mmol/L 槲皮素作用MCF-7细胞 2 d,DNA电泳出现特征性的凋亡条带;10.0 mmol/L 槲皮素处理MCF-7细胞 1 d、2 d 和 3 d,细胞凋亡率分别为(9.2±1.5)%、(30.0±11.8)%和(60.8±10.6)%。结论 用碱溶解酸沉淀法可从槐米中提纯槲皮素,提取的槲皮素对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制和诱导凋亡作用。     

姜黄素对乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白表达的影响及其机制研究

目的: 研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P糖蛋白表达的影响及其作用机制。方法: MTS比色法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的影响;实时定量PCR与Western Blot方法检测姜黄素处理后,MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白在mRNA与蛋白质水平的表达变化;流式荧光法检测姜黄素对MCF-7与MCF-7/DOX细胞中多柔比星药物浓度的影响;亚硫酸氢盐处理后测序（bisulfite sequencing PCR, BSP）法检测姜黄素处理前后MCF-7与MCF-7/DOX细胞中P-糖蛋白编码基因多药耐药基因1（multidrug resistance protein 1, MDR1）启动子区甲基化状态的改变。结果: 与对照组相比,姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星IC₅₀值显著下降（P＜0.05）;姜黄素处理后,MCF-7和MCF-7/DOX细胞中的P-糖蛋白在mRNA及蛋白质水平的表达均有显著上调（P＜0.05）,而细胞内多柔比星的药物浓度下降;MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1基因启动子区域的甲基化程度在姜黄素处理后明显降低（P＜0.05）。结论: 姜黄素可增强乳腺癌MCF-7与MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性,但同时可显著诱导P-糖蛋白表达水平增高,从而降低细胞内多柔比星药物浓度,此作用与其对MDR1基因去甲基化功能密切相关。     

表面活性剂在原子吸收光度法中增敏作用的研究

研究了阴离子表面活性剂十二烷基磺酸钠(简称SDS)在空气-乙炔火焰中对钢中微量Cr、Ni、Cu的增敏作用,初步探讨了其增敏机理,并用于钢中微量Cr、Ni、Cu的连续测定,结果令人满意。     

双PI3K/mTOR抑制剂NVPBEZ235对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用

目的: 探讨双PI3K/mTOR 抑制剂 NVPBEZ235对宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用。方法: 四甲基偶氮唑盐（MTT）及集落克隆法测定各因素对Hela细胞的抑制作用。通过流式细胞仪检测药物联合射线（irradiation,IR）对宫颈癌细胞周期的影响。结果: 与对照组相比,NVPBEZ235在体外能够抑制人宫颈癌细胞的生长。NVPBEZ235、IR联合作用细胞,在体外可以使细胞周期阻滞于G2/M期,二者具有协同作用,联合作用效果显著大于单药作用。结论: 20% IC50 NVPBEZ235在体外能够促进细胞对射线照射的敏感性,抑制细胞的增殖从而实现对宫颈癌细胞的放射增敏作用。     

胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬的影响及其作用机制研究

目的:探讨胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞自噬及PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法:50只裸鼠随机分为5组,每组10只,分为模型组、3-MA组、胡黄连苷Ⅱ高剂量（100 mg/kg）、中剂量(10 mg/kg)、低剂量(1 mg/kg)组。体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,随后移植于裸鼠体内,建立MCF-7乳腺癌皮下移植瘤模型。测量各组裸鼠体质量;测量乳腺肿瘤体积并计算出肿瘤抑制率;HE染色法观察肿瘤细胞形态;TUNEL法检测MCF-7细胞凋亡情况;Western blot检测Beclin1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果:胡黄连苷Ⅱ能显著抑制乳腺癌裸鼠体质量的降低（P<0.01）;提高肿瘤抑制率（P<0.01）;改善病理组织结果;促进MCF-7细胞凋亡;增加Beclin1蛋白的表达;降低PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达（P<0.01）。结论:胡黄连苷Ⅱ对MCF-7乳腺癌细胞具有显著抑制作用,其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR通路从而增强MCF-7细胞自噬有关。     

miR-106 b在乳腺癌组织中的表达及其增强乳腺癌细胞顺铂化疗敏感性的机制研究

目的:探讨miR-106 b在乳腺癌组织中的表达及其增强乳腺癌细胞顺铂化疗敏感性的机制。方法:随机选取2015年10月至2018年5月在本院进行手术切除的乳腺癌患者58例,取乳腺癌组织和癌旁组织提取细胞DNA,用荧光定量PCR的方法检测miR-106 b的表达量。购买乳腺癌MCF-7细胞系,构建促进miR-106 b表达的高表达组、抑制miR-106 b表达的低表达组细胞系。用不同浓度的顺铂处理,48 h后观察在体外和裸鼠皮下肿瘤的受抑制情况。荧光定量PCR法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路相关基因的表达。结果:荧光定量PCR显示乳腺癌组织中miR-106 b的相对表达量高于癌旁组织（P<0.05）。在20、30和40 μmol/L浓度时,对照组和高表达组的相应浓度下的细胞抑制率均显著高于低表达组,对照组相应浓度下的细胞抑制率均显著高于低表达组（P<0.05）。在20、30和40 μmol/L浓度时,对照组和高表达组的相应浓度下的荧光强度均低于低表达组,且高表达组均显著低于对照组（P<0.05）。低表达组PTEN的相对表达量显著低于对照组,而高表达组PTEN的相对表达量显著高于对照组（P<0.05）。低表达组的PI3K和AKT的相对表达量显著高于对照组,高表达组的PI3K和AKT的相对表达量显著低于对照组（P<0.05）。结论:miR-106 b在乳腺癌中高表达,且表达量越高,乳腺癌细胞对顺铂的化疗敏感性越强。     

Livin mRNA 的反义核酸诱导MCF-7 乳癌细胞凋亡作用

目的: 以livin mRNA 为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸(PS-ODNs), 探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法: 设计以livin mRNA 为靶点的反义核酸并作用于MCF-7 乳癌细胞, 用MTT、RT-PCR 和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果: 在设计的一些反义核酸中, YMZ05 能够有效地抑制livin 基因的表达, 增加caspase-3 的活性, 诱导MCF-7细胞凋亡, 明显抑制其生长, 结论: 通过抑制livin 基因的表达能够抑制MCF-7 乳癌细胞生长、诱导其凋亡, livin 可能会成为抗肿瘤的新靶点。     

赫赛汀对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的: 探讨赫赛汀对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。 方法: 体外培养人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,采用MTT方法检测不同浓度的赫赛汀(50、100、150 μg/mL)对MCF-7细胞增殖活性的影响,并筛选出最适浓度,依此浓度分别通过细胞划痕实验、Transwell小室模型实验检测MCF-7细胞的运动、迁移及侵袭能力的改变情况。使用最佳浓度的赫赛汀分别处理MCF-7细胞12、24、36和48 h后,采用免疫印迹法检测MCF-7细胞内Akt、p-Akt蛋白水平的变化。结果: MTT实验结果显示不同浓度赫赛汀均能抑制MCF-7细胞增殖活性,且呈浓度依赖性。经赫赛汀处理MCF-7细胞48 h后,划痕愈合能力、迁移活力以及侵袭能力明显下降,细胞内p-Akt的表达量也明显下降。结论: 赫赛汀抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞的增殖、迁移以及侵袭能力,其机制可能与赫赛汀抑制Akt的磷酸活化有关。     

尿多酸肽对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究尿多酸肽(CDA-II) 对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法: 将CDA-II 与乳腺癌细胞株MCF-7 和MDA-MB-231 进行体外培养, 观察CDA-II对乳腺癌细胞生长曲线及形态学等方面的影响。结果: CDA-II 对两种不同生物特征的乳腺癌细胞株ER⁺MCF-7 细胞和ER^-MDA-MB-231 细胞生长和增殖均有不同程度的抑制作用, 而且其生长抑制作用在一定时间和剂量范围内, 呈剂量依赖性;形态上,加CDA-II 培养后, 细胞体积增大, 生长密度稀疏, 细胞间隙拉宽, 胞质增多, 核/质比例下降, 核仁小而少, 细胞固缩、退变。结论: CDA-II 可抑制不同生物学特性的两株乳腺癌细胞的生长和增殖。     

氧化前胡素对乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的抑制作用

目的：探讨氧化前胡素（oxypeucedanin, OPD）对人乳腺癌MCF-7/DOX细胞多柔比星耐药的影响并探究其可能机制。方法：体外培养MCF-7/DOX细胞,MTT法检测OPD对MCF-7/DOX细胞增殖的影响,并考察OPD最大无毒浓度与多柔比星不同浓度联用对MCF-7/DOX细胞增殖的影响。qRT-PCR检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1及甘油磷脂代谢酶AGPAT2、CHKA、CEPT1、DGKA、PCYT1A、PLA2G15 mRNA水平的影响。Western blot检测OPD与多柔比星联用对MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1、CHKA及CCTα蛋白表达的影响。结果：OPD 50 μg/mL与多柔比星联用作用于MCF-7/DOX细胞的IC50值低于多柔比星单独,其逆转倍数为1.56倍。与对照组比较,多柔比星组MCF-7/DOX细胞MDR1、MRP1和6种甘油磷脂代谢酶mRNA均下调（P<0.05或P<0.01）,MDR1、MRP1、CHKA和CCTα蛋白表达无显著变化（P>0.05）,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组上述基因和蛋白表达均显著下调（P<0.05）。与多柔比星组比较,OPD 50 μg/mL与多柔比星联用组MCF-7/DOX细胞上述基因表达进一步下调（P<0.05或P<0.01）,上述4种蛋白表达无显著变化（P>0.05）。 结论：OPD可增强MCF-7/DOX细胞对多柔比星的化疗敏感性,逆转耐药,可能与其抑制甘油磷脂代谢途径有关。     

阿霉素对人乳腺癌细胞凋亡及去磷酸化RB 蛋白表达的影响

目的 探讨阿霉素(ADR) 体外诱导人乳腺癌化疗敏感细胞(MCF-7 S) 凋亡与去磷酸化RB 蛋白表达之间的关系。 方法 应用MTT 比色法检测ADR对体外培养的MCF-7 S 细胞增殖抑制作用, 同时应用末端标记(TUNEL) 法观测ADR 对MCF-7 S 细胞凋亡程度的影响。采用免疫细胞化学法检测去磷酸化RB 蛋白的表达水平。 结果 ADR 抑制MCF-7 S细胞增殖呈剂量依赖性, 半数抑制浓度(IC₅₀) 为0.128 mg·L^-1;ADR 作用组MCF-7 S 细胞的凋亡率(apoptotic rate, AR) 为0.261, 较对照组(0.045) 明显增高(P <0.01);ADR 作用组MCF-7 S 细胞的去磷酸化RB 蛋白表达量MOD(阳性细胞平均光密度) ×area(阳性面积相对比) 均数是987 ±207, 较对照组132 ±32 显著增高(P <0.01);ADR 能促进MCF-7 S细胞内去磷酸化RB 蛋白的表达。在ADR 作用组,MCF-7 S 细胞的凋亡率与去磷酸化RB 蛋白表达量呈正相关(P <0.05)。 结论 ADR 抑制MCF-7 S 细胞增殖和诱导MCF-7 S 细胞凋亡可能与细胞内去磷酸化RB 蛋白表达水平有关。     

参附注射液对乳腺癌术后化疗患者生存质量及其免疫功能的影响研究

目的: 研究参附注射液对乳腺癌术后化疗患者生存质量及免疫功能的影响。方法: 选择2016年12月至2017年12月在本院化疗的150例乳腺癌患者为研究对象,按照随机数表法均分为对照组和研究组。对照组给予常规化疗方案,研究组在对照组化疗的基础上联合参附注射液治疗。化疗6个疗程后,比较两组患者临床疗效,分析两组患者化疗前后T细胞亚群、自然杀伤细胞（NK细胞）水平和免疫球蛋白水平,比较两组化疗后的生存质量情况,观察不良反应发生情况。结果: 研究组临床治疗总有效率为96.00%,明显高于对照组的86.67%（P<0.05）。化疗前,两组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和NK细胞水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。化疗后,两组患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞水平均升高,研究组高于对照组;CD8+水平均下降,研究组低于对照组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。化疗后,两组患者的lgG、lgA和lgM水平均下降,且研究组均明显低于对照组（P<0.05）。化疗后,研究组患者功能子量表中的躯体功能得分明显高于对照组,症状子量表中的疲劳、恶心/呕吐和疼痛得分明显低于对照组（P<0.05）。研究组总不良反应率为4.00%,明显低于对照组的14.67%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论: 参附注射液能有效提高乳腺癌术后化疗患者免疫功能,改善患者术后生存质量,临床疗效显著,临床应用价值高。     

卡培他滨为基础一线方案治疗Her2阴性转移性乳腺癌的单中心回顾性研究及TYMP基因多态性分析

目的:本研究旨在探讨卡培他滨为基础一线方案治疗Her2阴性转移性乳腺癌的单中心回顾性研究及TYMP基因多态性分析。方法:本研究为回顾性分析,入组患者为2010年1月到2017年12月期间在首都医科大学附属北京天坛医院乳腺科和肿瘤科确诊为Her2阴性的且接受卡培他滨为基础一线治疗的转移性乳腺癌患者共215例。收集患者的外周血液进行基因分型,并进行mRNA表达测定和相关性分析,电话随访获取患者预后数据。用Kaplan-Meier生存分析方法分析不同基因型和预后的关联,用Cox模型对其他变量进行校正。结果:纳入分析的TYMP的遗传变异位点经过NCBI数据库查阅在中国人群中突变频率大于10%,在预后分析上发现1412C>T位点的关联性。1412C>T位点在本研究中的突变频率为：CC基因型137例（63.72%）,CT基因型70例（32.56%）,TT基因型8例（3.72%）,最小等位基因频率为0.20,符合HW平衡（P=0.798）。以显性遗传的方式把CT和TT基因型合并,对两组基因型患者进行预后分析发现：CT/TT和CC基因型患者的客观缓解率（ORR）分别为56.41%和40.15%（P=0.021）,疾病控制率分别为85.90%和72.99%（P=0.029）,中位无进展生存期（mPFS）分别为11.5和7.6个月（P=0.001）。另外,两组基因型患者的中位总生存期（mOS）分别为26.6和24.7个月（P=0.022）。针对PFS构建多变量的Cox模型校正后,CT/TT基因型仍然是PFS的独立影响因素（OR=0.56,P=0.011）。87例癌组织标本的mRNA表达分析结果表明CT/TT基因型患者相对于CC型患者,癌组织中TYMP的mRNA表达明显较高（P<0.001）。结论:TYMP基因1412C>T位点是卡培他滨作为基础化疗药物在一线治疗Her2阴性转移性乳腺癌患者疗效的预测因子。     

替吉奥胶囊联合放疗治疗乳腺癌的临床疗效及对肿瘤标志物、人类表皮生长因子受体-2、中期因子水平的影响研究

目的: 探究替吉奥胶囊联合放疗治疗乳腺癌的临床疗效及对肿瘤标志物、人类表皮生长因子受体-2（HER-2）、中期因子（MK）水平的影响。方法: 抽取2010年1月至2016年5月本院收治的64例乳腺癌患者,通过随机数表法分组,各32例。对照组采用三维适形放疗,研究组联合采用三维适形放疗+替吉奥胶囊,共治疗2个疗程。统计对比两组临床疗效、不良反应发生率,分析治疗前后两组肿瘤标志物［癌胚抗原（CEA）、CA125、CA153］及MK、HER-2水平变化情况。结果: 研究组治疗有效率（50.00%）、肿瘤控制率（81.25%）高于对照组（25.00%、53.13%）,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗前两组CEA、CA125、CA153水平对比差异无统计学意义（P>0.05）,经治疗,两组各指标水平较治疗前降低,且研究组CEA、CA125、CA153水平均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗前两组HER-2及MK水平对比差异无统计学意义（P>0.05）,经治疗,两组各指标水平较治疗前降低,且研究组HER-2及MK水平均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;两组均未出现IV度不良反应,研究组白细胞减少、腹泻、呕吐恶心发生率（34.38%、34.38%、37.51%）与对照组（31.24%、37.51%、34.37%）对比,差异无统计学意义（P>0.05）。结论: 替吉奥胶囊联合放疗治疗乳腺癌效果显著,可改善血清肿瘤标志物、HER-2及MK表达水平,且安全性较高,值得推广。     

胡桃醌对人卵巢癌SKOV3和IOSE80细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制研究

目的: 研究胡桃醌对人卵巢癌SKOV3和IOSE80细胞增殖和侵袭的抑制作用,并从信号通路深入探讨其作用机制。方法: 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和IOSE80细胞,给予不同浓度的胡桃醌溶液干预,MTT比色法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞转移,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测AKT、ERK、NF-κB信号通路蛋白表达,RT-PCR检测波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA表达。 结果: 不同浓度胡桃醌可抑制SKOV3细胞和IOSE80细胞增殖活力,降低细胞侵袭能力,加速细胞凋亡,且随浓度的增加对细胞增殖、侵袭和凋亡的作用越明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。不同浓度胡桃醌均可抑制SKOV3细胞和IOSE80细胞AKT、ERK、NF-κB信号通路蛋白的表达,且随浓度的增加信号通路蛋白表达减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。不同浓度胡桃醌均可减少SKOV3细胞和IOSE80细胞Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达,且随浓度的增加mRNA表达减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论: 胡桃醌可抑制SKOV3和IOSE80细胞体外增殖、转移,促进凋亡,其机制与抑制AKT、ERK、NF-κB信号通路表达和下调Vimentin、MMP-2、MMP-9 mRNA表达有关。