大黄素对实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠辅助型T细胞亚群的影响

目的: 研究大黄素对实验性自身免疫性甲状腺炎（experimental autoimmune thyroiditis,EAT）小鼠甲状腺的保护作用和机制。方法: 通过过量碘剂诱导非肥胖型糖尿病（non-obese diabetic,NOD）小鼠建立EAT动物模型,造模4周后各实验组摄入不同剂量的大黄素。造模8 周后检测小鼠血浆甲状腺球蛋白（TgAb）及甲状腺炎症程度以观察大黄素对EAT小鼠的保护作用。流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏T细胞亚群,分析大黄素对EAT小鼠外周血、脾脏 Th1、Th2 细胞流式检测频率的影响。ELISA法检测血浆IL-4、IFN-γ水平。结果:（1）甲状腺病理学观察,各大黄素实验组较模型组甲状腺淋巴细胞浸润程度减轻,分级比较差异有统计学意义（P<0.01）;（2）造模后的各组小鼠血浆TgAb水平明显升高,各实验组升高幅度低于模型组,组间有统计学差异（P<0.01）;（3）造模后的各组小鼠血浆IL-4、IFN-γ、外周血单核细胞以及脾脏淋巴细胞中CD+3 CD+ 4IL-4+ 、CD+ 3CD+4IFN-γ+ 、CD+3CD+8IL-4+和CD+ 3CD+8IFN-γ+T细胞频率均较对照组明显增高（P<0.01）,但各实验组升高幅度低于模型组小鼠。结论: 过量碘剂诱导NOD小鼠自身免疫性甲状腺炎造模是可行的;大黄素对造模小鼠甲状腺炎自身免疫反应有一定抑制作用。大黄素通过抑制CD+4CD+8T淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ,从而抑制造模小鼠的自身免疫反应。     

精准麻醉对机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术患者围术期细胞免疫功能的影响

目的: 探讨精准麻醉方法对机器人辅助腹腔镜前列腺癌根治术患者围术期细胞免疫功能的影响。方法: 56例择期行机器人辅助腹腔镜下前列腺癌根治术的患者随机分为试验组（A组）和对照组（B组）,每组28例。A组丙泊酚以脑电双频谱指数（BIS）值45～55为目标靶控输注,用肌松监测仪闭环输注顺式阿曲库铵,用Vigileo监测调控液体输注;B组根据患者的生命体征及麻醉经验进行麻醉深度的维持和管理。抽取两组患者麻醉前（T0）、麻醉诱导后手术前（T1）、麻醉后1 h（T2）、术后2 h（T3）、术后24 h（T4）、术后72 h（T5）外周静脉血,采用流式细胞术检测血T细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+值以及FoxP3-Treg值）、NK细胞值。结果: 与B组比较,T1、T2、T4、T5时A组CD4+升高,T2时A组NK细胞升高（P<0.05）。与T0时相比较,A组T1时CD4+、CD4+/CD8+均升高,B组CD4+、NK细胞均下降（P<0.05）,T2时B组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞均明显下降（P<0.05）;T3时A、B组CD3+、CD4+均明显下降,B组CD4+/CD8+下降（P<0.05）,T5时A组CD4+升高,A、B组Treg水平均明显降低（P<0.05）。结论: 精准麻醉可以减轻全麻对机器人辅助腹腔镜下前列腺癌根治术患者围术期细胞免疫功能的抑制作用。     

益肾抗瘤方联合IL-2腹腔灌注治疗卵巢癌相关腹水的疗效观察

目的: 探讨益肾抗瘤方联合白细胞介素-2（IL-2）腹腔灌注治疗卵巢癌相关腹水的疗效。方法: 采用随机数字表法将98例卵巢癌相关腹水患者分为试验组49例与对照组49例，两组均给予紫杉醇联合卡铂化疗。在此基础上，对照组给予IL-2腹腔灌注治疗，试验组IL-2腹腔灌注联合益肾抗瘤方治疗。观察并比较两组患者的腹水控制有效率、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA125）、人附睾蛋白4（HE4）、血管内皮生长因子（VEGF）、T淋巴细胞亚群变化、免疫球蛋白（Ig）A、IgM、IgG水平变化、不良反应及Karnofsky评分变化情况。比较两组的无进展生存期（PFS）。结果: 试验组腹水控制总有效率显著高于对照组（P＜0.05）。试验组的CA125总缓解率及控制率分别为71.4%、95.9%，均显著高于对照组的46.9%、83.7%（P＜0.05）。治疗后，试验组CEA、CA125、HE4及VEGF水平显著低于治疗前及对照组治疗后（P＜0.05）。试验组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞及IgM、IgG水平显著高于治疗前和对照组（P＜0.05）。试验组胃肠道反应、白细胞下降、血小板降低、转氨酶升高、尿素氮升高及周围神经症状的发生率显著低于对照组（P＜0.05）。试验组的PFS为6.0（3~12）个月，显著长于对照组的4.0（2~10）个月（χ2=8.113，P<0.01）。结论: 益肾抗瘤方联合IL-2腹腔灌注治疗卵巢癌并发恶性腹水疗效确切，可有效抑制肿瘤细胞的增殖，改善患者生存质量，安全性较高，值得推广。     

HBV感染者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子和T淋巴细胞亚群的检测及临床意义

目的: 探讨HBV感染者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子和T淋巴细胞亚群与HBV-DNA的关系及在HBV感染发展中尤其是重症化进程（如慢加急性肝功能衰竭）的作用。方法: 选取浙江大学医学院附属第一医院及浙江省青春医院收治的120例慢性HBV感染者,其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者60例,乙肝肝硬化（LC）患者30例,慢加急性肝功能衰竭(ACLF)患者30例。CHB组又分为HBeAg阳性组30例,HBeAg阴性组30例。以同期30例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测各组外周血CD+4和CD+8T细胞表面程序性死亡因子（PD-1）,细胞毒T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4),T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim3),T淋巴细胞（CD+3）,辅助T细胞（CD+4）和抑制T细胞（CD+8)百分比,PCR法检测各组HBV-DNA载量。采用Pearson分析相关性。结果: HBV感染者CD+4CTLA-4和CD+8CTLA-4的表达均低于对照组,其中CHB组CD+4CTLA-4、CD+8CTLA-4、CD+8PD1、CD+4Tim3和CD+8Tim3的表达均高于LC组和ACLF组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。HBV感染者CD+3、CD+4、CD+4/CD+8的表达均低于对照组,CD+8的表达高于对照组,CHB组CD+3,CD+4和CD+4/CD+8均高于LC组和ACLF组,CD+8的表达均低于LC组和ACLF组,CHB组HBV-DNA水平高于LC组和ACLF组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。CHB组中HBeAg阳性组CD+4CTLA-4、CD+8CTLA-4、CD+3、CD+4和CD+4/CD+8的表达均低于HBeAg阴性组,CD+4PD1、CD+8PD1、CD+4Tim3、CD+8Tim3和CD+8的表达均高于HBeAg阴性组（P<0.05）。HBV感染者HBV-DNA与CD+8PD-1,CD+8Tim3存在显著正相关性（P<0.05）,与CD+4CTLA-4,CD+8CTLA-4,CD+4Tim3,CD+4PD-1,CD+3,CD+4和CD+8不具有相关性（P＞0.05）。与LC组比较,ACLF组患者CD+4 PD-1的表达水平升高,CD+8 CTLA-4的表达水平降低。结论: 外周血T淋巴细胞表面共刺激分子和T淋巴细胞亚群比例与HBV感染发展尤其是重症化进展（如ACLF）相关联,对疾病的疗效和预后判断具有一定的临床应用价值。     

CTP-HBcAg18-27-Tapasin联合佐剂CpG ODN免疫转基因小鼠的免疫应答研究

目的: 观察以非甲基化寡聚脱氧核苷酸基序（CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN）为佐剂联合融合蛋白胞质转导肽（CTP）-HBcAg18-27-Tapasin免疫乙型病毒性肝炎(hepatitis B virus,HBV)转基因小鼠的免疫反应。方法:HBV转基因小鼠随机分为5组，实验组：CTP-HBcAg18-27-Tapasin+CpG ODN 组，对照组：CTP-HBcAg18-27-Tapasin，干扰素（IFN-α）组，CpG ODN组，空白组为生理盐水组。融合蛋白及CpG ODN经肌肉注射免疫小鼠，流式细胞仪检测病毒特异性T细胞反应（HBV-specific cytotoxic T cell,CTL）变化，全自动免疫分析仪检测血清乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)水平，ELISA检测T淋巴细胞培养上清白介素（IL）-2、γ-干扰素（IFN-γ）水平，实时荧光定量PCR(real time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HBV DNA水平，免疫组化观察HBV转基因小鼠肝脏中HBsAg水平。结果:CTP-HBcAg18-27-Tapasin+CpG ODN组中IFN-γ+CD8+双阳性T细胞百分比增高，细胞培养上清IL-2、IFN-γ水平升高，肝脏病理显示炎性细胞增多，免疫组化显示HBsAg表达水平明显下降，同时对血清HBsAg及HBV DNA水平进行比较，CTP-HBcAg18-27-Tapasin有明显抑制作用。结论:CpG-ODN作为佐剂可以增强融合蛋白CTP-HBcAg18-27-Tapasin诱导的HBV转基因小鼠抗病毒免疫应答。     

小剂量右美托咪定联合乌司他丁对肺癌患者免疫功能和应激反应的影响

目的: 观察小剂量右美托咪定联合乌司他丁对肺癌患者免疫功能和应激反应的影响。方法: 拟行肺癌手术的患者120例,随机分为A、B、C、D 4组,每组30例。麻醉诱导前,B组和D组静脉注射右美托咪定0.3 μg/kg,然后以0.3 μg·kg-1·h-1持续静脉输注至缝皮前,C组和D组静脉注射乌司他丁20万U,A组注射等剂量生理盐水。麻醉诱导前（T0）、手术结束时（T1）、手术结束后24 h（T2）取外周静脉血,测定CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平。记录T0、气管插管和拔管时的平均动脉压（MAP）和心率（HR）。记录术中七氟烷和瑞芬太尼用量及心动过缓、低血压和高血压的发生率。结果: CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平比较,A、B、C组T1和T2时点低于T0（P＜0.05）,B、C组T1和T2时点高于A组（P＜0.05）,D组T1和T2时点高于其他组（P＜0.05）。A、C组气管插管和拔管时的MAP和HR明显高于T0（P＜0.05）,B、D组气管插管和拔管时的MAP和HR明显低于A、C组（P＜0.05）。B、D组术中七氟烷和瑞芬太尼用量和高血压发生率低于A、C组（P＜0.05）。结论: 小剂量右美托咪定联合乌司他丁用于肺癌患者,可改善患者围术期免疫抑制状态,抑制气管插管和拔管时的应激反应,减少术中麻醉药物使用。     

基于肿瘤相关巨噬细胞的宫颈癌免疫学病理机制研究

目的:分析肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）在宫颈癌发病中的作用机制,明确其与Th1/Th2比值、Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg比值的相关性。方法: 以27例宫颈癌患者和53例宫颈上皮内瘤变（CINⅡ22例、CINⅢ31例）患者为研究对象,治疗前抽取患者空腹肘静脉血,采用流式细胞仪测定Th1/Th2、Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg比值,采用ELISA试剂盒测定血清IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-17F、TGF-β1、IL-10水平;术中留取病理组织,采用免疫组化实验测定TAMs CD68表达。结果: 宫颈癌患者外周血Th1/Th2与Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg比值低于CINⅢ,CINⅢ低于CINⅡ,各组之间的差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈癌患者血清IL-4、TGF-β1、IL-10水平高于CINⅢ,CINⅢ高于CINⅡ,血清INF-γ、IL-17A、IL-17F水平低于CINⅢ,CINⅢ低于CINⅡ,各组之间的差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈癌患者病灶组织TAMs CD68表达水平高于CINⅢ,CINⅢ高于CINⅡ,各组之间差异均有统计学意义（P<0.05）。相关性分析结果显示TAMs CD68表达水平与Th1/Th2比值、Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg比值及IL-17A水平呈负相关性,与IL-10、IL-4水平呈正相关性（P<0.05）。结论:宫颈癌TAMs与Th1/Th2、Th17/CD4+CD25+Foxp3+Treg密切相关,可能通过影响这两大体系的平衡介导宫颈癌的发生与发展。     

哮喘儿童血清细胞因子水平及布拉氏酵母菌干预的研究

目的:探讨布拉氏酵母菌对儿童哮喘血清细胞因子水平的影响。方法: 将184例哮喘患儿随机分为对照组（常规治疗）90例,观察组（布拉氏酵母菌）94例。两组均按GINA方案治疗。观察组联合布拉氏酵母菌1.0/次,每日2次口服,连用4周。采用ELISA法检测治疗前3组（另设健康组80例）及治疗后2组（观察组和对照组）外周血白介素-10（IL-10）、白介素-17（IL-17）、白介素-5（IL-5）、干扰素-γ（IFN-γ）水平。观察其临床疗效、血清细胞因子及肺功能变化。结果:观察组总有效率(91.49％)明显高于对照组(72.22％),差异有统计学意义(P<0.01)。治疗前两组血清中IL-17、IL-5水平均高于健康组及IL-10、IFN-γ水平低于健康组;治疗后两组IL-17、IL-5均下降（P<0.01,P<0.05 ）,IFN-γ、IL-10上升（P<0.01,P<0.05 ）,但观察组上升或下降幅度明显优于对照组(P<0.01),治疗后组间比较,差异具有统计学意义（P<0.01）。治疗后两组肺功能均有改善,但观察组改善程度明显高于对照组(P<0.01)。 结论:哮喘患儿外周血IL-10、IFN-γ与IL-17、IL-5浓度成负相关。布拉氏酵母菌能有效治疗儿童哮喘,其机制可能与调节Thl/Th2细胞因子的偏移有关。     

依普利酮对慢性心力衰竭患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道mRNA及蛋白表达的抑制作用

目的: 探讨依普利酮（EPL）对慢性心力衰竭（CHF）患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响。方法: 收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本（30例vs 20例）。免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+ T淋巴细胞增殖的影响。共分为3组,Control组、CHF组及CHF+EPL组。RT-qPCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4+ T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达。结果: EPL的最佳抑制浓度为30 μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍（P<0.01）,CHF+EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80%和39.62%（P<0.01）;CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍（P<0.01）,CHF+EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30%和37.14%（P<0.01）。结论: CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,最终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利。     

调节性B细胞在自身免疫性溶血性贫血患者外周血中的表达及临床意义

目的: 探讨自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血中调节性B细胞（Bregs）的表达及其在该病发病中的意义。方法:选择16例自身免疫性溶血性贫血患者和14例健康志愿者为研究对象，用流式细胞术分析外周血CD19+IL-10+调节性B细胞及CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞的表达；ELISA方法检测培养上清液中IL-10的水平。结果:自身免疫性溶血性贫血患者外周血中CD19+IL-10+调节性B细胞、CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞的表达分别为（1.27±0.39）％、（9.85±2.18）％，健康志愿者组分别为（2.92±0.71）％、（26.47±4.31）％，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；自身免疫性溶血性贫血患者细胞培养上清中IL-10的水平低于健康志愿者组（P<0.05）。结论:自身免疫性溶血性贫血患者外周血中CD19+IL-10+调节性B细胞及CD19+CD24hiCD27+调节性B细胞比例降低，提示调节性B细胞可能参与自身免疫性溶血性贫血的发病过程。     

丹皮酚对FSL-1与IL-4共刺激诱导树突状细胞成熟及细胞因子表达的影响

目的: 研究牡丹皮提取物丹皮酚对TLR2配体FSL-1刺激诱导慢性前炎因子释放的分子机制,为天然药物治疗慢性皮炎提供新的思路。方法: 将小鼠髓源性树突状细胞（DCs）分成5组,对照组、FSL-1刺激组、丹皮酚低、中、高剂量干预组（25、50、100 μg/mL）,所有组均给予10 ng/mL rmIL-4环境培养,ELISA法检测树突状细胞培养上清液中IL-10、IL-12的含量,流式细胞术检测树突状细胞表面MHC-II、CD40和CD86分子表达的水平。结果: 各组树突状细胞表面分子表达水平：刺激组与对照组相比,树突状细胞表面MHC- II、CD40和CD86表达量明显增加（P<0.05）。丹皮酚干预组与刺激组相比,DCs表面MHC- II、CD40和CD86表达量均降低,且高、中剂量组具有统计学差异 （P<0.05）。细胞因子分泌水平：刺激组与对照组相比,抗炎性细胞因子IL-10的水平明显降低（P<0.05）,而前炎细胞因子IL-12的水平明显升高（P<0.05）;丹皮酚干预组与FSL-1刺激组相比,各个干预组的IL-10的分泌水平显著上升（P<0.05）,丹皮酚干预组中IL-12的分泌水平均有下降,但仅高、中剂量组具有统计学差异（P<0.05）。结论: TLR2配体FSL-1可以和IL-4共刺激DCs,促进DCs活化并成熟,促进前炎性因子IL-12释放,抑制IL-10等抗炎细胞因子分泌,诱导CD4+T细胞向Th1分化,导致了Th1极化状态,诱导慢性皮肤炎症;而天然药物丹皮酚可抑制TLR2配体介导TLR2通路活化DCs这一过程,具有抑制皮肤慢性炎症的潜力。     

参附注射液对乳腺癌术后化疗患者生存质量及其免疫功能的影响研究

目的: 研究参附注射液对乳腺癌术后化疗患者生存质量及免疫功能的影响。方法: 选择2016年12月至2017年12月在本院化疗的150例乳腺癌患者为研究对象,按照随机数表法均分为对照组和研究组。对照组给予常规化疗方案,研究组在对照组化疗的基础上联合参附注射液治疗。化疗6个疗程后,比较两组患者临床疗效,分析两组患者化疗前后T细胞亚群、自然杀伤细胞（NK细胞）水平和免疫球蛋白水平,比较两组化疗后的生存质量情况,观察不良反应发生情况。结果: 研究组临床治疗总有效率为96.00%,明显高于对照组的86.67%（P<0.05）。化疗前,两组患者的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和NK细胞水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。化疗后,两组患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞水平均升高,研究组高于对照组;CD8+水平均下降,研究组低于对照组,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。化疗后,两组患者的lgG、lgA和lgM水平均下降,且研究组均明显低于对照组（P<0.05）。化疗后,研究组患者功能子量表中的躯体功能得分明显高于对照组,症状子量表中的疲劳、恶心/呕吐和疼痛得分明显低于对照组（P<0.05）。研究组总不良反应率为4.00%,明显低于对照组的14.67%,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论: 参附注射液能有效提高乳腺癌术后化疗患者免疫功能,改善患者术后生存质量,临床疗效显著,临床应用价值高。     

二甲双胍对2型糖尿病伴高血压患者骨密度及胰岛素抵抗、细胞因子的影响

目的: 观察二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)伴高血压患者骨密度及胰岛素抵抗(IR)、细胞因子的影响。方法: 将125例T2DM伴高血压患者随机分为两组,观察组62例,对照组63例,两组均口服达美康治疗,观察组在此基础上加用二甲双胍,治疗12周,治疗前后分别检测两组患者的BMI、空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、脂联素(APN)、瘦素(LEP) 、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、胰岛素样生长因子-1(IGF-1),测定腰椎2-4（L2-4）骨密度（BMD）、左股骨颈BMD,比较两组治疗前后及组间各检测指标变化。结果: （1）治疗12周后,两组的FPG、HbAlc较治疗前均有明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);观察组BMI较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。（2）与治疗前及对照组治疗后比较,观察组APN、IGF-1、L2-4及左股骨颈BMD均升高,FINS、HOMA-IR、TNF-α、IL-6均下降,差异均有统计学意义(P<0.05);LEP与治疗前比较下降,差异有统计学意义(P<0.05),与对照组治疗后比较差异无统计学意义(P>0.05)。（3）相关分析显示,L2-4及左股骨颈BMD均与APN、IGF-1呈正相关,与HOMA-IR、LEP、TNF-α和IL-6呈负相关。结论:二甲双胍可以改善T2DM伴高血压患者的BMD,降低IR,纠正细胞因子紊乱,可能减少T2DM伴高血压患者骨质疏松和骨折风险。