内质网相关降解蛋白Derlin-1通过抑制ERK信号通路抗人结肠癌细胞增殖

目的: 探讨内质网相关降解蛋白Derlin-1对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法: 采用sh-Derlin-1-pGPU6/Neo质粒转染构建瞬时敲除Derlin-1基因的SW480细胞株，应用实时定量PCR和免疫印迹验证Derlin-1基因和蛋白的低表达，采用CCK8法检测SW480细胞增殖情况，流式细胞仪检测SW480细胞凋亡情况，Western blot检测SW480细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达量和ERK磷酸化水平。结果: 使用pGPU6/Neo载体能够稳定地抑制SW480细胞中Derlin-1的表达，sh-Derlin-1组细胞增殖率相对于对照组显著降低、凋亡率显著升高（P<0.05），Western blot实验结果发现sh-Derlin-1组细胞中Bcl-2表达量显著降低、Bax表达量显著升高及ERK磷酸化水平显著降低，与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论: Derlin-1表达的降低能抑制ERK信号通路活化，进而诱导人结肠癌SW480细胞凋亡、抑制增殖。     

栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路减轻糖尿病心肌病大鼠的心肌细胞凋亡

目的：探讨栀子苷（geniposide, GE）改善大鼠糖尿病心肌病的作用及其具体机制。方法：24只成年雄性SD大鼠,随机分为3组：正常组（Control组,8只）、糖尿病心肌病组（DCM组,8只）、糖尿病心肌病组+栀子苷组（DCM+GE组,8只）,采用高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）构建糖尿病心肌病大鼠模型,应用次氯酸（HOCl）诱导H9C2损伤模型。干预12周后,HE和Masson染色观察心脏组织病理学改变;TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡水平;免疫组化检测及Western blot检测法检测VPO1/ERK1/2信号通路及凋亡相关蛋白表达水平。给予次氯酸刺激心肌细胞后,Western blot检测法检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。给予ERK1/2酶抑制剂U0126后,用Western blot检测法再次检测ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的改变。结果：HE及Masson染色显示,与Control组相比,DCM组出现心肌纤维排列紊乱、心肌胶原含量明显增多,而DCM+GE组心肌损伤情况明显改善（P<0.05）。与Control组相比,DCM组心肌细胞凋亡水平及Bax/Bcl-2比值明显增加,而DCM+GE组心肌凋亡情况得到明显好转（P<0.05）。免疫组化和Western blot结果显示,在DCM组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平升高,而DCM+GE组中VPO1、p-ERK1/2蛋白表达水平得到了抑制（P<0.05）。进一步对H9C2细胞行HOCl干预发现,与Control组相比,次氯酸组出现p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值增加,而加入ERK1/2酶抑制剂U0126后p-ERK1/2蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值下降（P<0.05）。 结论：栀子苷通过抑制VPO1/ERK1/2信号通路抑制心肌细胞凋亡从而改善糖尿病引起的心肌损伤。     

芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的: 探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响。方法:采取对数生长期的人胃癌SGC-7901细胞作为研究对象,应用MTT法检测药物对胃癌SGC-7901细胞生长抑制率;Hoechst33258核染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法分析SGC-7901细胞中caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果:芦丁(100、200、300 μmol/L)、奥沙利铂均可抑制SGC-7901的增殖,且呈剂量相关性;芦丁联合奥沙利铂与相同浓度奥沙利铂单用处理SGC-7901细胞相比,前者对SGC-7901细胞的抑制作用更显著(P<0.05);不同浓度芦丁与奥沙利铂联合处理SGC-7901细胞与奥沙利铂单用相比,前者显著提高了SGC-7901细胞的凋亡率(P<0.05)。芦丁作用后,caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2/Bax蛋白表达的比值则明显降低(P<0.05)。结论:芦丁和奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3、Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白表达水平有关;两者联合应用具有一定的协同效应。     

柚皮素通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭、诱导凋亡作用的研究

目的:探究柚皮素（NAR）通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞,并分为空白组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组和高剂量柚皮素组;使用柚皮素预处理后,检测NAR对卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响情况;检测细胞侵袭迁移及凋亡相关蛋白和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果:使用柚皮素处理后,各组卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭受到显著抑制,凋亡受到显著促进,且对柚皮素呈剂量依赖性。相比空白组,使用柚皮素各组PCNA、Bcl-2、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3、E-cadherin、PI3K蛋白表达水平及AKT、p65磷酸化水平显著升高（P<0.01）,且随着柚皮素使用剂量的增加呈剂量依赖性,总AKT蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论:NAR可能通过抑制EMT及PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,并促进卵巢癌细胞的凋亡,在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠诱导的肝细胞凋亡的机制研究

目的: 探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路对甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDC）诱导的人肝正常细胞HL-7702增殖、凋亡的影响。方法: 将HL-7702细胞分为对照组、GCDC组（1 mmol/L的GCDC预处理细胞4 h）、GCDC+LY294002组（GCDC处理细胞4 h后,使用15 μmol/L的LY294002处理细胞24 h）和GCDC+IGF-1组（GCDC处理细胞4 h后,使用20 nmol/L的IGF-1处理细胞24 h）。处理结束后,通过Western blot检测PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2蛋白表达;MTT法及Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞增殖和凋亡率;DCFH-DA探针法检测细胞活性氧（ROS）含量。结果: GCDC可明显下调HL-7702细胞PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2和Nrf2表达,上调Bax表达,抑制细胞增殖,诱导凋亡,诱导细胞ROS产生（P<0.05）,LY294002可增强GCDC对HL-7702细胞增殖、凋亡、ROS水平及PI3K、p-AKT、p-mTOR、Bcl-2、Bax和Nrf2表达影响,IGF-1反之。结论: 激活PI3K/AKT/mTOR信号通路可改善胆汁性肝纤维化,机制可能与抗凋亡和抗氧化有关。     

南赤瓟醇提物通过PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡

目的: 研究南赤瓟醇提物影响PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人宫颈癌Caski细胞凋亡的作用机制。方法: 用南赤瓟醇提物(0.062 5、0.125、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/mL)作用Caski细胞 24 h 后,检测其对细胞增殖的影响;然后用南赤瓟醇提物(0.25、0.50 和 1.00 mg/mL)作用Caski细胞 24 h 后,流式细胞术测定细胞周期DNA含量及亚G₁凋亡峰,ELISA试剂盒检测Caski细胞中Caspase-9和Caspase-3活性及线粒体和胞浆中细胞色素C（Cyt C）含量,Real-time PCR测定P53、Bcl 2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2/Bax比值,Western blot测定PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平(p-PI3K、p-Akt、p-mTOR),并计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值。结果: 南赤瓟醇提物对Caski细胞生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物(0.25、0.50 和1.00 mg/mL)能显著抑制Caski细胞增殖,并将其阻滞于G₂/M期;可抑制p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平,降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR比值;上调P53和Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA及Bcl-2与Bax比值;降低线粒体中Cyt C含量,升高胞浆中Cyt C含量;增强Caspase-9和Caspase-3活性(P<0.05, P<0.01)。结论: 南赤瓟醇提物诱导Caski细胞凋亡的作用机制与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路磷酸化有关。     

丹酚酸对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护

目的：分析丹酚酸通过AKT/mTOR/p70S6K信号通路对骨骼肌缺血再灌注损伤小鼠细胞自噬及凋亡的影响。方法：选取SPF级雄性大鼠45只,随机数字表法分为假手术组、模型组、丹酚酸组,模型组、丹酚酸组制备骨骼肌缺血再灌注损伤模型,丹酚酸组分别在开始实验前72 h、48 h、24 h及再灌注前15 min,腹腔注射剂量为30 mg/kg的丹酚酸溶液1 mL,假手术组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水1 mL。观察各组大鼠腓肠肌组织病理形态,血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,腓肠肌组织Akt、p-Akt、p70S6K、p-p70S6K、mTOR及p-mTOR蛋白表达及腓肠肌组织内Bcl-2、Bax表达。结果： 再灌注0 h、4 h及24 h时模型组大鼠腓肠肌湿/干重（W/D）比值较假手术组升高,丹酚酸组腓肠肌W/D比值较模型组降低,差异有统计学意义（P<0.05）;再灌注0 h、4 h及24 h时模型组大鼠血清LDH、CK含量较假手术组升高,丹酚酸组大鼠血清LDH、CK含量较模型组降低,差异有统计学意义（P<0.05）;模型组大鼠腓肠肌Akt蛋白表达较假手术组降低,p-Akt蛋白表达较假手术组升高;丹酚酸组大鼠Akt、p-Akt、p70S6K、p-p70S6K、mTOR及p-mTOR蛋白表达较模型组升高,差异有统计学意义（P<0.05）;光密度值（IOD）量化腓肠肌细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达,模型组Bcl-2 IOD数值、Bcl-2/Bax比值较假手术组降低,Bax IOD数值较假手术组增加;丹酚酸组Bcl-2 IOD数值、Bcl-2/Bax比值较模型组升高,Bax IOD数值较模型组降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：丹酚酸可维持骨骼肌缺血再灌注损伤大鼠骨骼细胞Bax与Bcl-2动态平衡,抑制细胞凋亡,其作用机制可能和激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路有关。     

枸杞多糖调控Shh信号影响骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡

目的:研究枸杞多糖(LBP)调控Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:骨肉瘤HOS细胞分成Control(空白对照)、LBP-I(110 μg/mL枸杞多糖)、LBP-II(220 μg/mL枸杞多糖)、LBP-III(440 μg/mL枸杞多糖)共4组,MTT测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法测定凋亡,Western blot测定Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Shh、Gli1蛋白表达。Shh信号激活剂和枸杞多糖共同处理骨肉瘤HOS细胞,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,LBP-I、LBP-II、LBP-III组细胞增殖能力依次降低,细胞G0/G1期细胞比例依次升高[(51.2±4.1)% vs. (59.1±3.2)%,(66.8±2.0)%,(72.3±3.2)%,F=72.76,P<0.001],细胞凋亡水平依次升高[(3.9±0.3)% vs. (13.2±1.2)%,(17.6±1.3)%,(24.8±2.1)%,F=364.50,P<0.001],细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达水平依次升高,CDK4、cyclin D1、Shh、Gli1蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。与未经Shh信号激活剂处理的细胞比较,经过Shh信号激活剂处理的细胞可以逆转枸杞多糖对骨肉瘤HOS细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:枸杞多糖通过抑制Shh信号通路阻滞骨肉瘤HOS细胞周期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

脂氧素A4抑制缺氧诱导的滋养细胞氧化应激和凋亡

目的: 探讨脂氧素A₄（LXA₄）对缺氧条件下人早孕细胞滋养细胞氧化应激及凋亡的影响。方法: 选取正常早孕(6～8周)绒毛,分离、纯化、鉴定得到细胞滋养细胞,分为常氧组、缺氧组、缺氧+1 nmol/L LXA₄组、缺氧+10 nmol/L LXA₄组、缺氧+100 nmol/L LXA₄组。各组细胞培养72 h后,采用 DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性,分光光度计法检测过氧化氢酶（CAT）活性,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性,流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果: 与常氧组比较,缺氧组ROS水平升高（P<0.05）,SOD、CAT、GPx活性降低（P<0.05）,凋亡率升高（P<0.05）。与缺氧组比较,缺氧+1、10、100 nmol/L LXA4组ROS水平均降低（P<0.05）,SOD、CAT、GPx活性均升高（P<0.05）,凋亡率均降低（P<0.05）。与常氧组相比,缺氧组的Bcl-2蛋白量减少,Bax蛋白量增加（P<0.05）;缺氧+1、10、100 nmol/L LXA₄组Bcl-2蛋白量较缺氧组均升高,Bax蛋白量较缺氧组均降低（P<0.05）。结论: LXA₄可抑制缺氧诱导的人早孕细胞滋养细胞的氧化应激和凋亡,Bcl-2/Bax表达调控可能是LXA₄抗滋养细胞凋亡的一个重要机制。     

肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05)，且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后，细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)，Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡，其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的，(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

miR-34a通过调控雄激素受体基因抑制前列腺癌细胞系LNCaP增殖

目的：探究miR-34a对雄激素受体（AR）基因的调控作用及对前列腺癌（PCa）LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。方法：收集2016年10月至2019年9月本院泌尿外科行前列腺穿刺活检确诊为PCa患者组织标本36例,另取同期行手术治疗切除的良性前列腺增生（BPH）组织标本41例。体外培养LNCaP细胞,分别转染miR-34a mimics（mimics组）,miR-34a mimic NC（NC组）,设正常生长细胞为空白对照组（BC组）,另在mimics组基础上转染AR过表达（AR过表达组）载体及其对照（AR对照组）,采用CCK-8试剂盒检测细胞活性,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,实时定量PCR（RT-qPCR）检测miR-34a及AR mRNA表达水平,免疫印迹法检测AR蛋白、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）及原癌基因产物（c-Mcy）、细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、capase-3）的表达水平。结果：与BPH组织比较,PCa组织中miR-34a表达水平显著降低（P<0.05）,AR mRNA及蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）;与BC、NC组比较,mimics组LNCap细胞miR-34a表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著增加（P<0.05）,AR、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,同一时间LNCap细胞活力均显著降低（P<0.05）;双荧光素酶实验结果显示,miR-34a与AR可能存在一定的调控关系,过表达AR基因可逆转miR-34a mimics对LNCaP细胞增殖抑制,促进凋亡作用。 结论：miR-34a可能通过调控AR抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,促进其凋亡。     

异嗪皮啶对人乳腺癌干细胞凋亡相关基因Bcl-2与Caspase家族表达的影响

目的: 研究草珊瑚中异嗪皮啶成分对乳腺癌干细胞中凋亡相关基因通路Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因表达影响，进而明确其抑制增殖、迁移和促凋亡的机制。方法: 无血清培养法诱导MDA-MB-231细胞株富集乳腺癌干细胞，流式细胞仪分选CD44⁺ /CD24 ^-/low干细胞群。各组分别给予0、17、50、150、450 μmol/L异嗪皮啶，CCK-8法观察给药后24、48、72 h的细胞活力；细胞划痕实验法检测给药后细胞痕道宽度变化值并判断其对细胞迁移能力的影响；Annexin V-FITC/PI染色法检测给药后细胞总凋亡率变化；实时荧光定量PCR测定各组Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8基因的mRNA水平；Western blot检测上述基因的蛋白水平。结果: 与对照组比较，50、150和450 μmol/L异嗪皮啶组24、48、72 h的细胞活力降低，细胞迁移能力下降。与对照组比较，50、150和450 μmol/L异嗪皮啶组细胞总凋亡率高于对照组，Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平降低，Caspase-3和Caspase-8基因mRNA和蛋白表达水平升高。以上结果均呈明显剂量效应关系。结论: 异嗪皮啶能通过下调Bcl-2基因表达与激活Caspase基因家族诱导乳腺癌干细胞的凋亡，同时能抑制其增殖与迁移。     

17-DMAG对鼻咽癌细胞株HNE1增殖与凋亡的影响

目的: 探讨17-DMAG对鼻咽癌HNE1细胞增殖与凋亡的影响。方法: MTT比色法测定17-DMAG对HNE1细胞活性的影响;溴化丙啶(PI)染色法测定HNE1细胞凋亡;JC-1 染色法测定17-DMAG对线粒体膜电位的影响;Western blot测定细胞Bcl-2/Bax的表达水平。结果: 17-DMAG可抑制鼻咽癌HNE1细胞的增殖,且该抑制作用随作用时间的延长和剂量增加而增强;PI染色显示17-DMAG具有诱导HNE1细胞凋亡作用（P<0.01）;JC-1染色显示17-DMAG可诱导HNE1细胞线粒体膜电位降低;Western blot 显示17-DMAG作用HNE1细胞24 h,Bcl-2表达显著降低（P<0.01）,Bax表达明显增加,尤其在中、高剂量组（P<0.01）。结论: 17-DMAG具有抑制鼻咽癌细胞HNE1细胞增殖的作用,该抑制作用与浓度和时间成正相关。该作用主要通过诱导HNE1细胞凋亡实现,诱导凋亡的机制可能与其下调细胞线粒体膜电位,降低Bcl-2表达,增加Bax水平有关。     

沉默YAP基因提高伊马替尼耐药的人髓性白血病细胞K562药物敏感性的研究

目的: 探究沉默YAP基因后,提高伊马替尼耐药的K562细胞（K562/IMA）对于伊马替尼敏感性的作用及相关机制,为伊马替尼耐药的人髓性白血病治疗提供参考。方法: 采用小干扰RNA技术（siRNA）转染YAP的siRNA-YAP沉默K562/IMA的YAP基因。设置对照组（Control）、siRNA阴性对照组（siRNA-NC）和YAP siRNA组（siRNA-YAP）。采用RT-qPCR和Western blot法鉴定沉默后各组细胞YAP蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western blot法检测YAP、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-3、细胞色素C（Cyto-C）的表达水平,Transwell小室检测细胞转移侵袭能力。结果: YAP基因沉默后,siRNA-YAP组细胞中YAP的蛋白和mRNA表达水平显著低于Control组和siRNA-NC组,沉默效果较好。siRNA-YAP的IC50值显著低于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）,而流式细胞术结果显示,siRNA-YAP组细胞在相同药物剂量下,凋亡率显著高于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。YAP沉默的K562/IMA细胞迁移侵袭能力显著下降。伊马替尼干预后,siRNA-YAP细胞中Bcl-2/Bax的水平下调,cleaved-caspase-3、caspase-3和Cyto-C的水平上调,相比Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。结论: 沉默伊马替尼耐药的K562/IMA细胞中YAP基因,可以恢复肿瘤细胞对于伊马替尼的敏感性,可以促进线粒体凋亡途径的激活,导致耐药肿瘤细胞的凋亡。