马齿苋总黄酮对血小板源性生长因子致家兔血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的: 研究马齿苋总黄酮(Portulaca total flavone,PTF)对血小板源性生长因子-BB型(PDGF-BB)致血管平滑肌细胞(Vascular smoothmuscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨其机制。方法: 采用组织贴壁法培养家兔胸主动脉血管平滑肌细胞,细胞计数法观察PTF(8、24、72 mg/L)对PDGF-BB所致的VSMC增殖作用的影响;氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入方法测定VSMC DNA的合成;流式细胞仪分析增殖细胞周期,荧光分光光度计测定VSMC内 [Ca²⁺]_i。结果: PTF以浓度依赖方式抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖、DNA合成,血管平滑肌细胞处于G₁/G₀ 期的细胞数增多,而G₂/S期的细胞数显著减少(P<0.01);能抑制高K⁺诱导的VSMC内[Ca²⁺]_i升高(P<0.01)。结论: PTF可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖,其作用机制可能与其降低VSMC内高钙浓度[Ca²⁺]_i有关。     

竹节参皂苷IVa甲酯对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞增殖影响及机制研究

目的: 探讨竹节参皂苷IVa甲酯（chikusetsu saponin iva methyl,CSIM）对血管紧张素II（angiotensin,Ang-II）刺激的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖的影响及机制研究。方法: 以大鼠血管平滑肌细胞为实验对象,建立Ang-II刺激的VSMCs增殖模型。MTT法检测CSIM对VSMCs的毒性;CCK-8法、BrdU法检测CSIM对VSMCs增殖的影响,划痕实验检测CSIM对VSMCs迁移力的影响,免疫蛋白印迹法检测PTEN、NF-κB蛋白表达水平。结果: 3 μmol/L的CSIM可显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖(P<0.05)与迁移(P<0.05),并伴随着PTEN蛋白的明显上调(P<0.05)及NF-κB蛋白表达的显著性降低(P<0.05)。结论: CSIM抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与上调PTEN蛋白,降低NF-κB蛋白表达有关。     

夏枯草水提取物对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探讨夏枯草水提取物对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖作用及对Daxx/PTEN/NF-κB信号通路的影响。方法:培养VSMCs,体外用血管紧张素II （angiotensin II,Ang-II）(1 μmol/L)诱导细胞增殖模型,MTT和BrdU法分别检测夏枯草水提取物不同浓度(10、20、40、80、160 μg/mL)作用24 h后对VSMCs活性和增殖的影响、划痕法观察细胞迁移力,Western blot检测细胞中Daxx、PTEN、NF-κB蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组VSMCs活力及细胞迁移能力明显增强;同时细胞中Daxx、PTEN蛋白表达明显降低,NF-κB蛋白显著上调;与模型组比较,20、40、80 μg/mL夏枯草水提取物成浓度依赖性显著抑制VSMCs活力与细胞迁移能力,以80 μg/mL浓度最显著;同时,夏枯草水提取物处理组细胞Daxx、PTEN蛋白表达明显上调,NF-κB蛋白下调。结论:夏枯草水提取物能显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与Daxx/PTEN/NF-κB信号通路有关。     

Fas 配体基因对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响

目的 探讨腺病毒载体介导Fas 配体(FasL) 基因导入对大鼠颈动脉损伤后血管中层平滑肌细胞密度的影响。方法 实验分治疗组(Ad-FasL 组) 和正常对照组两组(Ad-βgal 组), 每组动物均为6 只。利用重组腺病毒载体分别将Ad-FasL 、Ad-βgal 导入大鼠颈动脉球囊损伤的内膜, 3 、14 d 后观察其对血管中层平滑肌细胞密度的影响。结果 与正常对照组相比较, 通过腺病毒载体介导导入FasL 基因的被球囊损伤的大鼠颈动脉,3 d 后损伤血管中层平滑肌细胞密度降低, 14 d后血管中层平滑肌细胞密度恢复到正常水平。结论 FasL 可抑制血管中层平滑肌细胞密度, 从而抑制球囊损伤后的内膜增生。     

雌二醇对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和内皮功能的影响

目的 研究雌二醇对血管内皮损伤后血管壁细胞增生和内皮功能恢复的作用。方法 应用球囊导管剥脱大鼠的左颈总动脉,于术前六天和术后两周给予17-β雌二醇,通过形态学分析和免疫组化测定血管内膜增生和血管平滑肌细胞增殖程度,并测定乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应。结果 17-β雌二醇显著抑制血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖和减少新生内膜面积。内皮损伤后乙酰胆碱诱导的血管舒张反应显著降低,最大为12%±6%;雌二醇能使其显著改善,最大舒张反应为48%±9%(P<0.05)。结论 雌二醇显著抑制血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖和促进内皮功能的恢复。     

姜黄素对Lewis肺癌小鼠血管内皮成长因子和endostatin表达的影响

目的:探讨姜黄素对Lewis肺癌组织中血管内皮成长因子（VEGF）和血管生成抑制因子抑制素（endostatin）表达的影响。方法: 本实验分为3组：空白对照组、模型组、姜黄素组（100 mg/kg）。空白对照组设10只C57BL/6纯系小鼠,另20只小鼠右腋皮下接种Lewis瘤细胞,随机分为2组：模型组、姜黄素组（100 mg/kg）,每组10只。接种成功后,空白对照组与模型组灌胃0.5%羟甲基纤维素钠溶液,姜黄素组灌胃100 mg/kg,灌胃容积为0.2 mL/10 g,连续灌胃14 d,每天1次。末次给药后处死小鼠,称其体重,剥离肿瘤组织称重后采用Western Blot法和Q-PCR法检测VEGF、endostatin蛋白及基因的表达。结果:给予Lewis肺癌小鼠姜黄素治疗后肿瘤体积与质量明显减少,VEGF的表达显著减少和endostatin的表达明显增加。 结论:姜黄素抑制肺癌肿瘤的生长,其作用可能是通过下调VEGF与上调endostatin的表达,从而抑制肿瘤血管的生长。     

福辛普利对平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的: 探讨血管紧张素II 在不同浓度和不同作用时间下对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因表达的作用, 并研究福辛普利对其的影响。方法: 采用流式细胞技术测定在不同浓度和不同作用时间血管紧张素II 作用下血管平滑肌细胞凋亡率及凋亡调控基因Fas、Bcl-2 表达的变化和福辛普利对其的影响。结果: 血管紧张素II 对血管平滑肌细胞凋亡和凋亡调控基因表达有较明显的诱导作用。福辛普利可抑制AngII 作用, 对细胞凋亡有一定的影响, 同时可影响凋亡调控基因的表达。结论: 血管紧张素II 具有一定的的促进血管平滑肌细胞凋亡作用和调节凋亡调控基因表达的作用, 尤其大剂量作用较明显。而福辛普利可明显抑制AngII 对血管平滑肌细胞的作用。     

黄芪和当归配伍对大鼠血管内膜增生血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 探讨黄芪和当归不同配伍对大鼠血管内皮损伤后血管内膜增生中血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化、细胞周期和磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号途径的影响。方法: 雄性大鼠制备腹主动脉球囊导管损伤血管内皮模型，设计黄芪和当归单用及不同比例配伍，对内皮损伤模型大鼠灌胃给药，干预14 d后取腹主动脉，检测腹主动脉增生内膜中VSMC表型转化、细胞周期相关蛋白表达和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果: 球囊导管损伤主动脉内皮后，可引起VSMC表型转化及VSMC增殖从而导致血管内膜增生。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可增强血管增生内膜中平滑肌α肌动蛋白（SM α-actin)表达，抑制增生内膜中增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。当归、黄芪、黄芪-当归1∶1配伍、黄芪-当归5∶1配伍可抑制血管组织中cyclin D1、cyclin E表达的增高，抑制增生内膜中p-PI3K和p-Akt蛋白表达的升高。结论: 黄芪当归配伍对血管内皮受损后内膜增生具有抑制作用，其作用可能与其通过抑制血管内皮受损后PI3K/Akt信号通路激活，进而抑制VSMC表型转化和细胞增殖，从而发挥抗VSMC增殖的作用有关。     

中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究中华眼镜蛇毒F 组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。 方法 用体外培养的血管平滑肌细胞, 观察F 组分对20 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸(H³-TdR) 掺入的影响, 用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 测定F 组分对20 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原(Proliferationcell nuclear antigen, PCNA) 表达的影响。 结果 F 组分呈浓度依赖性抑制20 %小牛血清引起的细胞对H³-TdR 掺入率和细胞内C-myc、PCNA 的表达, 其中30、100 mg·L^-1给药组与对照组比较有显著差异(P <0.05)。 结论 中华眼镜蛇毒F 组分通过影响细胞内原癌基因C-myc、PCNA 的表达, 抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

氧化甾醇抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及诱导其凋亡的作用1

目的: 研究 3β, 5α, 6β-胆甾烷三醇(Triol) 和25-羟胆固醇(25OH) 对 VSMC 增殖的影响, 探讨氧化甾醇在动脉粥样硬化(AS) 发病中的作用和意义。 方法: 培养和鉴定新西兰白兔主动脉 VSMC; 以含不同浓度的Triol 和 25OH 的培养液作用于VSMC 为实验组, 不含氧化甾醇或含胆固醇的培养液作为对照组。 VSMC 增殖及其代谢活性以 WST-1 测定, 细胞凋亡以光镜、透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记(TUNEL) 判断。结果: 在1×10^-9 ~ 1 ×10^-7mol^·L^-1 范围的 Triol 和 25OH 对VSMC 的 WST-1代谢活性无明显变化(P >0.05), 而≥1×10^-6mol^·L^-1 的氧化甾醇则使其代谢活性显著下降 (P <0.01); ≥20 ×10^-6 mol^·L^-1 的 Triol 和25OH 诱导VSMC 胞体皱缩变小、染色质在核周边浓集、核碎裂、 空泡和凋亡小体形成等超微结构变化; TUNEL 呈阳性反应。结论: 小剂量氧化甾醇无促进VSMC 增殖而较大剂量氧化甾醇可诱导 VSMC 凋亡。     

KATP通道开放剂吡那地尔对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 研究吡那地尔(pinacidil, Pin) 对内皮素-1(ET-1) 诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法: 内皮素-1 刺激培养兔PASMC 增殖模型;以氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR) 掺入法观察细胞增殖及脱氧核糖核苷酸(DNA) 合成;流式细胞仪技术检测兔PASMC 细胞周期。结果: 吡那地尔可剂量依赖性的抑制内皮素-1 所致的[³H]-TdR 掺入量增多, 阻止兔PASMC 由静止期(G₀/G₁ 期) 进入DNA 合成期(S 期) 和有丝分裂期(G₂/M 期) 。ATP敏感性钾通道(K_ATP) 阻断剂格列本脲可拮抗吡那地尔对[³H]-TdR 掺入的抑制作用。结论: 吡那地尔可能通过激活K_ATP通道抑制内皮素-1 诱导兔肺动脉平滑肌细胞的增殖, 可望用于治疗肺动脉高压时所致的肺动脉重构。     

烟酸姜黄素酯对低剪切应力诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的: 探讨烟酸姜黄素酯（curcumin nicotinate,CN）对低剪切应力（low shear stress, LSS）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及机制研究。方法: 运用平行平板流动腔建立LSS诱导的HUVECs凋亡模型。采用Hoechst33258荧光染色,流式细胞术检测CN对LSS诱导的HUVECs凋亡的影响。Western blot检测CN对LSS诱导的HUVECs中前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）蛋白表达的影响。结果:Hoechst33258荧光染色结果显示,与静态培养组比较,LSS组（3 dyne/cm2,12 h）内呈现凋亡状态的HUVECs明显增多。与LSS组比较,各CN+LSS组内呈现凋亡状态的HUVECs明显减少,并且呈现浓度依赖性。其中以20 μmol/L CN+LSS组凋亡细胞数最少;流式细胞术结果显示,与静态培养组比较,LSS组HUVECs凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义（P<0.01）;与LSS组比较,各CN+LSS组HUVECs凋亡率明显减少,并且呈现浓度依赖性,其中以20 μmol/L CN+LSS组HUVECs凋亡率减少最为明显,差异具有显著统计学意义（P<0.01）。Western blot结果显示与静态培养组比较,LSS组内PCSK9蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与LSS组比较,CN+LSS组内PCSK9蛋白表达下降,并且呈现浓度依赖性,差异具有统计学意义（P<0.05）。其中以20 μmol/L CN+LSS组PCSK9蛋白表达下降最为明显(P<0.01)。结论: CN能够抑制LSS诱导的HUVECs凋亡,其作用机制与CN下调LSS处理的HUVECs中PCSK9蛋白表达相关。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的: 探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F₂)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法: 30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F₂高剂量给药组(2 mg/kg)、 F₂中剂量给药组(1 mg/kg)、F₂低剂量给药组(0.5 mg/kg)。模型组及F₂各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后 7 d 取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果: 与假手术组比较,模型组术后 7 d 血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F₂剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F₂各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论: F₂能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。     

ERK1/2和p38MAPK在介导CGRP和Ang II诱导血管平滑肌细胞Nox1表达中的作用

目的:探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2) 和p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)在降钙素基因相关肽（CGRP）和血管紧张素II(Ang II) 诱导血管平滑肌细胞NADPH氧化酶-1（Nox1）表达中的作用。方法: 体外培养鼠源性A10血管平滑肌细胞株（A10VSMC）,用Ang II或/和CGRP作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Western blot检测ERK1/2和p38MAPK总蛋白和磷酸化蛋白以及Nox1蛋白的表达水平。结果: 与对照组和CGRP组相比,Ang II在诱导A10VSMC活力和增殖的同时,亦能增加磷酸化ERK1/2和p38MAPK信号激酶和Nox1的表达。CGRP预孵育细胞30 min 却能显著抑制Ang II诱导的细胞增殖活力、Nox1蛋白、磷酸化ERK1/2和p38MAPK的表达;二苯基碘（DPI）能抑制Ang II诱导的细胞增殖、磷酸化p38MAPK及Nox1表达,但不能抑制Ang II诱导的ERK1/2磷酸化。p38MAPK阻断剂SB203580不但能抵消Ang II诱导的Nox1表达作用,而且能协同CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达。而ERK1/2阻断剂PD98059对CGRP和/或Ang II诱导Nox1表达作用的影响无统计学意义。结论:Ang II诱导A10VSMC增殖与激活Nox1有关,CGRP抑制Ang II诱导的Nox1表达,可能主要通过抑制p38MAPK信号途径发挥作用,而与ERK1/2信号途径无显著关系。     

姜黄素对高血压病大鼠全脑缺血再灌注时海马神经元损伤及皮质酮、SGK1表达的影响

目的:探讨姜黄素对高血压病大鼠全脑缺血再灌注时海马神经元损伤及血清皮质酮、海马血清和糖皮质激素诱导激酶1（serum-and glucocorticoid-inducible kinases1，SGK1）表达的影响。方法:雄性Wistar-Kyoto（WKY）大鼠和自发性高血压病（SH）大鼠，随机分为5组：假手术组（W-Sham、S-Sham）、缺血再灌注组（W-IR、S-IR）和姜黄素组（S-Cur）。各组按再灌注时间分为3 h、12 h、1 d、3 d和7 d 5个时间点。采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注模型（缺血10 min后恢复灌注），HE染色观察海马CA1区神经细胞形态，Nissl染色计数海马CA1区平均锥体细胞密度，ELISA法检测血清皮质酮及海马SGK1，于再灌注后7 d观察行为学。结果:与假手术组比较，缺血再灌注组学习和记忆能力下降，海马CA1区神经元损伤加重，血清皮质酮水平增加，海马SGK1表达上调（P<0.05）；与W-IR组比较，S-IR组学习和记忆能力下降，海马CA1区神经元损伤加重，血清皮质酮水平增加（P<0.05），海马SGK1蛋白表达下调（P<0.05）；姜黄素组学习和记忆能力明显改善，海马CA1区神经元损伤减轻，血清皮质酮水平下降（P<0.05），海马SGK1蛋白表达上调（P<0.05）。结论:姜黄素减轻高血压病大鼠全脑缺血再灌注海马神经元损伤的机制可能与抑制皮质酮、上调SGK1表达有关。