益气活血通络方对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节p75NTR和TrkA表达的影响

目的: 观察益气活血通络方对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节神经生长因子受体p75NTR和TrkA表达的影响,以期探讨益气活血通络方治疗糖尿病周围神经病变的分子机制。方法: 选用SD大鼠,采用小剂量链脲佐菌素（35 mg/kg）联合高脂饲料复制糖尿病周围神经病变大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组,益气活血通络方高、中、低剂量治疗组和甲钴胺阳性对照组,另设正常对照组。各组用药后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清NGF含量,Western blot法检测背根神经节p75NTR和TrkA蛋白的表达。结果: 与正常组比较,糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节的p75NTR表达水平明显升高（P﹤0.01）, 血清神经生长因子（NGF）含量、背根神经节的TrkA表达水平明显降低（P﹤0.01）。益气活血通络方能明显降低糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节的p75NTR水平（P﹤0.01或P﹤0.05）,并升高NGF、TrkA水平（P﹤0.01）,各剂量组间无统计学差异。结论: 益气活血通络方可通过抑制糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节NGF低亲和力受体p75NTR的表达,激活NGF及其高亲和力受体TrkA的表达,促进神经元生长。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂联合鼠神经生长因子对新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究

目的: 探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂（GM1）联合鼠神经生长因子（NGF）治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的临床疗效及安全性。方法: 纳入我院在2017年1月至2018年4月收治的HIE患儿122例,按照随机数字表法分为观察组和对照组（各61例）,对照组给予单唾液酸四己糖神经节苷脂钠（20 mg+10%GS注射液30～50 mL中静脉滴注,每天一次）;观察组给予单唾液酸四己糖神经节苷脂钠（20 mg+10%GS注射液30～50 mL中静脉滴注,每天一次）+鼠神经生长因子(18 μg+2 mL注射用水,肌内注射,每天一次)治疗;两组患儿均连续治疗14 d;比较两组患儿临床疗效、神经功能、智能发育及运动发育情况;记录两组患儿意识反射、吸吮反射、肌张力恢复时间;测定两组患儿胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、血清髓鞘碱性蛋白（MBP）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、血管内皮生长因子（VEGF）及S-100β水平。结果: 观察组临床有效率为93.44%（57/61）,对照组为80.33%（49/61）,差异有统计学意义（Z=4.604,P<0.05）;观察组出生后28 d神经测定量表（NBNA）评分明显高于对照组（P<0.05）,出生后3个月观察组智能发育指数（MDI）、精神运动发育指数（PDI）评分高于对照组（P<0.05）;治疗期间观察组意识反射恢复时间、吸吮反射恢复时间及肌张力恢复时间明显短于对照组（P<0.05）;两组患者治疗后IGF-1水平升高,MBP、NSE、VEGF及S-100β水平降低（P<0.05）;治疗后观察组上述指标改善程度均优于对照组（P<0.05）。结论: GM1联合鼠神经生长因子治疗HIE疗效显著,能够明显改善患儿神经功能,缩短恢复时间,降低血清相关因子水平。     

神经节苷脂GM1 对新生鼠缺血缺氧后NOS表达的影响1

目的: 探讨神经节苷脂GM₁ 对新生儿缺氧缺血性脑病的保护作用及可能机理。 方法:通过建立新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型, 观察缺血缺氧后不同时期脑组织的病理变化和一氧化氮合酶(NOS)表达, 以及 GM₁ 对其影响。结果: GM₁ 给药组脑组织损伤明显减轻, 缺血缺氧可诱导脑组织中 NOS 表达水平上调, GM₁ 部分地抑制了缺血缺氧后 NOS 的表达水平。 结论: GM₁ 对新生儿缺氧缺血性脑损伤具有一定程度的保护作用, 其作用可能是通过部分抑制NOS 的表达。     

酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a表达的影响

目的: pH6.0培养条件下观察神经生长因子（NGF）对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a（ASIC1a）基因和蛋白表达的调控作用及其机制。方法: 体外提取培养原代大鼠膝关节软骨细胞,酸性环境下观察细胞NGF高亲和力受体Trk-A的表达情况;不同浓度NGF刺激观察ASIC1a的表达变化;10 ng/mL NGF刺激不同时间胞外信号调节激酶（ERK1/2）及c-fos磷酸化的时效关系,阻断ERK1/2（PD98059 30 μmol/L）后观察c-fos磷酸化水平和ASIC1a的表达;RT-PCR检测ASIC1a基因的表达,Western Blot检测Trk-A、ASIC1a、ERK1/2、pc-fos蛋白的表达。结果: 在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境可高出3倍,ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,10 ng/mL 时趋于稳定;NGF刺激后,ERK1/2及c-fos活化增强,4 h 达到最大水平;阻断了ERK1/2之后,p-c-fos和ASIC1a蛋白表达下降,差异具有显著性(P<0.01)。结论: 在酸性环境下,NGF促进了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的上调,并且ERK1/2信号通路的活化可能参与了这一过程。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶和白细胞介素-5表达的影响

目的:探讨黄芪注射液对哮喘大鼠p38蛋白激酶(p38 MAPK)和白细胞介素-5(IL-5)表达的影响。方法:应用鸡卵清蛋白(OVA)腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入复制大鼠哮喘模型。40只大鼠随机分成5组:正常对照组, 哮喘模型组和黄芪注射液低、中、高剂量组(2.5、5.0、10.0 mL/kg)。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、原位分子杂交方法和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)IL-5含量、肺组织IL-5 mRNA和磷酸化p38 MAPK 表达的变化, 并观察BALF 中炎症细胞计数、分类以及肺组织病理学变化。结果:哮喘模型组大鼠BALF 中炎症细胞计数、IL-5含量和肺组织中IL-5 mRNA及磷酸化p38 MAPK 表达均较正常对照组显著增加(P<0.01);黄芪干预组的上述改变较哮喘模型组显著降低(P<0.01), 肺组织病理学损伤程度明显减轻, 黄芪注射液低、中、高剂量组之间差异无统计学意义。肺组织磷酸化p38 MAPK 表达水平与BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)计数和IL-5、IL-5 mRNA含量之间分别呈显著正相关(r=0.62、0.69、0.74, P<0.01)。结论:p38 MAPK 可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪对哮喘的治疗作用可能部分与抑制p38 MAPK 的磷酸化活化、降低炎症介质释放、减轻炎症细胞浸润有关。     

神经生长因子对新生大鼠脑细胞内游离钙浓度的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对分离的新生大鼠脑细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 以 Fura-2/AM 为细胞内钙离子的荧光指示剂, 测定谷氨酸(Glu)及过氧化氢(H₂O₂)诱导的新生大鼠脑细胞内[Ca²⁺]_i, 观察 NGF 对此影响。 结果 新生大鼠脑细胞内静息 [Ca²⁺]_i 208±22nmol/L, NGF对神经细胞静息 [Ca²⁺] i 无明显影响, NGF 1～ 100μg/L 能剂量依赖地抑制 Glu 和 H₂O₂ 引起的 [Ca²⁺]_i 升高, 其 IC₅₀ 分别为 42.5 和 27.3 μg/L。结论 NGF 通过降低 [Ca²⁺]_i 的水平来保护大脑皮质神经元抗谷氨酸毒性及过氧化氢损伤。     

中华眼镜蛇毒神经生长因子对神经元的保护作用1

目的 探讨中华眼镜蛇毒神经生长因子对受损神经元的保护作用。方法 钳夹损伤成年大鼠坐骨神经,造成脊髓背根神经节感觉神经元和脊髓前角运动神经元变性的动物模型,用酶组织化学图像分析观察神经生长因子对受损神经脊髓节段的抗氟化物酸性磷酸酶和乙酰胆碱醋酶活性的影响。结果 神经生长因子能明显提高受损神经脊髓节段的抗氟化物酸性磷酸酶和乙酰胆碱醋酶活性。结论 神经生长因子对神经元有保护作用。     

17β雌二醇对异丙酚诱导发育期大鼠海马神经细胞凋亡时p38MAPK信号传导通路的作用机制

目的: 探讨17β雌二醇对异丙酚诱导的发育期大鼠海马神经细胞凋亡的作用机制。方法: 将60只发育期SD大鼠随机分为5组：空白对照组（NS组）、异丙酚组（P组）、17β雌二醇组（D1、D2及D3组）,每组12只。NS组腹腔注射等体积脂肪乳,P组仅腹腔注射异丙酚;D1、D2及D3组腹腔注射300、600及900 μg/kg 17β雌二醇,30 min后腹腔注射异丙酚。观察大鼠的呼吸频率（R0、R30、R60、R90）、逃避潜伏期时间（TD1、TD2、TD3、TD4、TD5）、海马神经细胞凋亡指数（AI）及cleaved caspase-3、p-p38及p-NF-κB蛋白表达水平。结果: 同NS组比较,P组大鼠注射异丙酚后呼吸频率加快;同P组比较,D1组、D2组、D3组呼吸频率减慢（P＜0.05）。P组大鼠逃避潜伏期显著长于NS组,D1组、D2组、D3组逃避潜伏期显著低于P组(P＜0.05)。P组大鼠AI显著高于NS组,D1组、D2组、D3组显著低于P组(P＜0.01)。同NS组比较,P组cleaved caspase-3、p-p38 及其下游p-NF-κB表达增加(P＜0.01);同P组比较,D1组及D2、D3组cleaved caspase-3、p-p38 及其下游p-NF-κB表达下调(P＜0.01)。结论: 17β雌二醇可减轻异丙酚诱导的大鼠海马神经细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号传导通路有关。     

神经生长因子颅内注射治疗颅内血肿微创清除术后高血压性脑出血的疗效评价

目的: 对神经生长因子颅内注射治疗颅内血肿微创清除术后高血压性脑出血的疗效进行评价。方法: 将90 例颅内血肿微创清除术后的高血压性脑出血患者随机分为3 组, 每组30 例:对照组, 微创清除术后每日给予生理盐水2 ml 颅内注射, 4 d 后改为每日注射用水2 ml 肌注;治疗1 组, 微创清除术后每日给予生理盐水2 ml 颅内注射, 4 d 后改为每日神经生长因子2 ml 肌肉注射;治疗2 组, 微创清除术后每日给予神经生长因子2 ml 颅内注射, 4 d后改为每日神经生长因子2 ml 肌肉注射, 3 组疗程均为14 d 。采用卒中临床神经功能缺损评分、日常生活活动(ADL) 量表评分及死亡率等方法对治疗1月后进行疗效评定。结果: 3 组病例死亡率分别为对照组(13. 3 %) 、治疗1 组(10. 0 %) 、治疗2 组(10. 0 %) (P >0. 05); 治疗1 组和治疗2 组的显效率和总有效率分别为(40 %, 66. 67 %) 和(70 %, 80 %), 比对照组(20 %、36. 67 %) 高(P<0. 05); 治疗1 组和治疗2 组ADL 量表评分比对照组好(P<0. 05) 。结论: 神经生长因子能提高颅内血肿微创清除术后高血压性脑出血的临床疗效, 降低致残率, 明显提高病人的生活质量, 颅内注射效果更好。     

辛伐他汀对肾性高血压心肌纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的: 探究辛伐他汀(simvastatin) 对肾血管性高血压心肌纤维化及结缔组织生长因子(CTGF) 表达的影响。方法: 建立二肾一夹肾血管性高血压(2K1C-RH) 大鼠模型, 将实验大鼠随机分为3 组:假手术组、高血压组、辛伐他汀治疗组。术后4 周末,开始以辛伐他汀(5 mg·kg^-1·d^-1) 灌胃, 共8 周。测量大鼠收缩压(SBP) 、心肌总胶原容积分数、心肌胶原浓度以及CTGF 的表达。结果: 与假手术组相比,高血压组的收缩压、心肌总胶原容积分数、心肌胶原浓度显著增加(P<0. 01), CTGF 表达上调(P<0. 01), 辛伐他汀抑制2K1C-RH 大鼠心肌纤维化的发展和心肌组织中CTGF 的表达(P<0. 05) 。结论: 辛伐他汀能抑制高血压心肌纤维化, 可能与下调CTGF 的表达有关。     

神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放

目的 研究神经生长因子(NG F)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法 测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO 含量,用No rthern blot 杂交法观察cNOSmRNA表达。结果 谷氨酸(0 .5~ 2 .0mmol/L)引起神经元大量死亡,NO 过量释放。NOS 抑制剂L-NAME (100μmol/L)及NGF (100μg/L)显著抑制谷氨酸引起NO 释放及细胞死亡。NGF (50,100μg /L)显著降低谷氨酸引起的cNOSmRNA 的高表达。结论 NO 介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性,NG F 通过抑制cNOS 活性,降低NO 释放来保护大脑皮质细胞对抗谷氨酸毒性。     

TGFβ1型受体在2型糖尿病大鼠肾皮质的表达及缬沙坦调节作用

目的: 研究转化生长因子β1型受体(TβR-Ⅰ)在2型糖尿病大鼠肾皮质中的表达及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对其调节作用。方法: 制备2型糖尿病大鼠模型,在缬沙坦治疗8 周后,取肾脏,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测肾皮质TβR-ⅠmRNA 的表达。结果: 糖尿病组大鼠肾皮质TβR-Ⅰ mRNA 的表达(0.719 ±0.139)较正常组(0.257 ±0.116)明显增高(P<0.01);糖尿病+缬沙坦组(0.341 ±0.11),与糖尿病组比较,显著下降(P<0.01)。结论: 2型糖尿病大鼠肾皮质中TβR-Ⅰ 表达是上调的,缬沙坦对TβR-Ⅰ有抑制作用。     

伊贝沙坦对结缔组织生长因子在自发性高血压大鼠心室肌表达的影响

目的: 研究结缔组织生长因子(CTGF)在自发性高血压大鼠(SHR)心脏中的表达及其与高血压心室重构和心肌纤维化的关系,并探讨血管紧张素II受体拮抗剂对其表达的影响以及改善高血压心室重构和心肌纤维可能的作用机制。方法: 20只12周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为SHR组(n=10)和伊贝沙坦组(n=10),伊贝沙坦组每只大鼠予以伊贝沙坦50mg·kg^-1·d^-1灌胃,给药12周,同时取10只12周龄雄性京都种Wistar(WKY)大鼠作为对照组,用免疫组化的方法对TGF-β1、CTGF在三组大鼠的左室心肌的分布及表达进行半定量分析;用RT-PCR的方法检测TGF-β1、CTGFmRNA在心肌表达水平;用MASSON染色法观察左室心肌胶原形态,图象分析测量胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA)。结果: (1)左室重量指数(LVI)、CVF、PVCA在SHR组大鼠明显高于WKY组大鼠(P<0.01);相比SHR组,伊贝沙坦组则显著降低(P<0.05)。(2)CTGF主要在血管平滑肌和心肌间质中表达,WKY组在心肌间质中呈弱表达。(3)相关分析表明,CTGF与TGF-β1(r=0.562,P<0.05)的表达呈正相关。(4)CTGF及其mRNA在SHR组左室心肌中的表达较WKY组明显增强(P<0.05),相比SHR组,伊贝沙坦组则明显减少。结论: 高血压大鼠心室肌CTGF表达增加,伊贝沙坦对高血压大鼠心室肌CGTF表达具有抑制作用,且能够明显改善高血压心室重构和心肌纤维化,此种作用可能是血管紧张素II受体拮抗剂抑制左室重构改善心肌纤维化新的机制。     

VEGF-A基因多态性对接受氟尿嘧啶为基础辅助化疗的结直肠癌患者预后的影响

目的: 本研究旨在探讨血管内皮细胞生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGF-A）基因多态性位点对结直肠癌患者长期预后的影响。方法: 本研究为回顾性分析,纳入149例接受手术且术后接受氟尿嘧啶为基础辅助化疗的结直肠癌患者。术前收集患者外周血提取基因组DNA,用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）对多态性位点进行基因分型。149例患者的基因分型结果进行进一步验证并纳入最终分析。基因型和预后的单变量分析用Kaplan-Meier生存分析方法,并通过Cox风险比例模型对其他变量进行校正。结果: VEGF-A基因-94C>G位点在中国人群当中的突变频率为：GG型62例（41.6%）,CG型61例（40.9%）和CC型26例（17.4%）,最小等位基因频率为0.38,三种基因型的分布符合哈迪温伯格平衡（P=0.113）。三种基因型在基线临床资料中分布均衡,差异无统计学意义。对三种不同基因型患者构建的生存分析发现,CC型患者5年总生存期（OS）率显著较低,相对于GG/CG型患者来说具有显著的统计学差异（P=0.022）。经过多变量的Cox风险比例模型校正之后CC基因型相对于GG/CG型患者的较差的预后影响仍然存在,并且具有显著的统计学差异（OR=3.76,P=0.015）。结论: 在结直肠癌患者当中,VEGF-A基因-94C>G位点的突变纯合子CC基因型对结直肠癌患者的预后具有独立的影响意义。