产β-葡聚糖酶高产菌株的驯化及筛选

根据刚果红与β-1,3、β-1,4-葡聚糖紧密结合而保持红色的特征,筛选β-葡聚糖酶高产菌株.本实验室保存的黑曲霉QYW-01经紫外诱变和产酶驯化,获得一株高产β-葡聚糖酶的黑曲霉QYW-01A06,在摇瓶条件下发酵液酶活力达2642U/mL,是出发菌株的2.4倍.     

产纤维素酶菌株产酶条件的研究

主要研究了绿色木霉固态发酵培养基的酯比、接种量、氮源、培养时间和培养温度等条件，通过测定其所产纤维素本科的CMC和FPA酶活，找出该菌株最佳的产酶条件，即：秸秆粉：麸皮为2：1，固液比为1：3，添加（NH4）2SO4为氮源，添加量为2%，接种量5%，30℃培养84h左右为宜。CMC、FPA酶活分别达到372IU/g和69IU/g。     

黑曲霉β-葡聚糖酶产酶培养基的研究

探讨了黑曲霉（Aspergillusniger）FH11菌株产β-葡聚糖酶最佳培养基的组成。通过单因素试验,确定了培养基的组分和一些化学物质对酶合成的影响,结果表明,适当添加某些物质可以促进产酶,提高酶活。根据单因素实验结果,通过正交试验,确定了培养基中最佳碳源为3%大麦粉,最佳氮源为2%酵母粉和0.2%硫酸铵,优化了摇瓶发酵产酶培养基的组成。      

漆酶高产菌株的筛选及产酶条件优化

以愈创木酚和α-萘酚为底物,采用平板筛选法从河南省各地采集到的土壤样品中分离获得8株产漆酶能力较强的真菌.根据变色圈的大小和颜色深浅挑选出产漆酶能力最强的WJ6菌株,鉴定表明为绿色木霉(Trichoderma viride).确定该菌株发酵产酶的最优条件为:以葡萄糖为碳源,以NH4Cl为氮源,反应温度30 ℃,pH=4.0,Cu2+添加浓度60 μmol/L,在此条件下培养7 d,漆酶活力最大,可达256.6 U/L.     

耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的筛选及酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到1株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9.其发酵条件及酶学特性为:发酵 72h,在pH6.0、70℃条件下,酶活性为82.64u/mL.分子生物学及其生理生化鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).W-9产β-葡聚糖酶的酶学性质结果显示,其产β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,在70℃条件下保温时,酶活基本稳定.     

木聚糖酶高产菌株的筛选及其产酶营养条件研究

采用木聚糖为唯一碳源的平板初筛培养基以及摇瓶复筛液体培养基从保藏的菌株中筛选到产木聚糖酶活力较高、茵丝生长快的粗糙咏孢菌(Neurospora crassa)菌株,采用优化的碳源(30 g/L浓度的麸皮)、氮源(20g/L浓度的硝酸钠),粗糙脉孢茵在摇瓶发酵培养的第6天产酶活力最高,可达136.90u/mL.     

耐热β-1,3（4）-葡聚糖酶源真菌筛选、鉴定及产酶条件优化

利用葡聚糖作为唯一碳源的基础盐培养,在50℃培养条件下,从新乡周围土样及腐殖质中筛选到一株产β-1,3（4）-葡聚糖酶耐热真菌菌株（Paecilomycessp.FLH30）。该菌株在40～60℃能较好生长,最适生长温度45℃。产酶培养优化条件表明:在培养温度为45℃,初始培养基pH6.5,以大麦麸皮为碳源,以蛋白胨、酵母粉和玉米浆为有机氮源,发酵4d,葡聚糖酶活达132.4U/mL,葡聚糖酶最适pH和温度分别为7.0和70℃。      

日本纳豆中β-葡萄糖苷酶高产菌的筛选及产酶条件研究

目的：为大豆异黄酮的酶法制备筛选新的β-葡萄糖苷酶高产菌。方法：应用微生物研究常规方法在日本纳豆中筛选出一株高产β-葡萄糖苷酶的菌株,并对其的产酶条件进行了研究。结果：该菌种经菌落形态、革兰氏染色、生化试验以及16srRNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌,其最适发酵条件为：2％的葡萄糖;2％的大豆蛋白胨;有Ca^＋、Mg^＋存在;pH在7．0至7．5之间;温度35～37℃,往复式摇床培养48h。在此条件下,其最高酶活可达158IU／mL。结论：随着大豆异黄酮研究工作的不断深入,大豆异黄酮将显现出越来越多的研究空间和应用价值。     

β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株筛选、鉴定及酶基因克隆和序列分析

目的:筛选和鉴定β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株并对酶基因进行克隆和序列分析。方法:利用透明圈法从食堂锅炉排水口污泥中分离筛选菌株,并采用形态和生理生化特征鉴定菌株。通过PCR方法扩增酶基因,将其克隆于T-载体,用Sanger双脱氧链终止法测定序列。结果:分离筛选的β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株呈长杆状、革兰氏染色可变、兼性厌氧、产芽孢(次端生、孢囊膨大)。生理生化试验结果表明:该菌株与浸麻芽孢杆菌(Bacillusmacerans)最为相近,命名为BacillusspA3。PCR扩增获得的酶基因全长734bp,其中开放阅读框架为717bp,编码238个氨基酸。经Blast分析,该序列与多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)和浸麻类芽孢杆菌(B.macer-ans)相似性较高,分别为98%和82%。结论:成功分离了β-1,3-1,4-葡聚糖酶酶源菌株BacillusspA3,酶基因序列与多粘芽孢杆菌和浸麻类芽孢杆菌有较高的同源性。     

嗜热β-葡聚糖酶产生菌的筛选及其培养基优化研究

以大麦β-葡聚糖为唯-碳源,从吐鲁番地区采集的土样中筛选到1株热稳定性β-葡聚糖酶产生菌株XTP-5,经初步鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).对该菌株产酶培养基优化实验结果表明:最佳培养基配方:麦糟粉20g/L、酵母粉4/L、K<,2>HPO<,4>1.0WL、NaC10.5 g/L、FeSO<,4>·7H<,2>O 0.01g/L、MgSO<,4>·7H<,2>O 0.5g/L、(NH<,4>)2SO<,4> 2.0g/L、Tween-80 0.06%.接种上述液体培养基(pH7.0)中,于37°C、180 r/min摇瓶培养60h达到产酶高峰,酶活力可达9.52 U/mL.     

裂褶菌发酵产β-1,3-葡聚糖酶条件的优化

本文通过裂褶菌发酵培养获得β-1,3-葡聚糖酶,并对其发酵条件进行了研究.分别探讨了培养基中的碳源、氮源及无机盐对产酶的影响,并采用正交试验找到最佳的产酶培养基配方为葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%;对培养温度、起始pH值、接种量和培养时间等条件进行了优化,得...     

产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的优化

为了得到产酶性能好且稳定的菌株,利用CMC平板初筛和摇瓶发酵复筛,从采自不同地区的样品中筛出5株产酶较高的菌株。采用液体发酵方法对其中产酶最好的菌株A6产酶条件进行研究。结果表明,该菌株最适产酶温度为32℃,初始pH值为5.5,接种量为5%,培养时间为4d,微晶纤维素与麸皮配比为7:3,氮源为复合氮源。     

木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶产酶条件优化研究

采用响应面法（RSM）对木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶的培养基组成（碳源酵母粉、氮源NH4NO3和料水比）进行了优化。结果表明,采用以麸皮为基质、添加到1．91％酵母粉、1．99％NH4NO3和15．79mL水的培养基中,接种木霉TP-24菌株于30℃发酵4d,β-1,3-葡聚糖酶活力可达到594．37U／g（单位干曲）,比对照产酶水平提高了273．55％。     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成的优化研究

采用恒温摇床培养法培养裂褶菌,研究了裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成中的碳源、氮源及各种无机盐的单因素参数,并采用四因素三水平正交实验对主要影响因素进行分析,从而确定最佳的产酶培养基配方为:葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%。      

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成的优化研究

采用恒温摇床培养法培养裂褶菌,研究了裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成中的碳源、氮源及各种无机盐的单因素参数,并采用四因素三水平正交实验对主要影响因素进行分析,从而确定最佳的产酶培养基配方为:葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%。     

β—葡聚糖酶高产菌株的选育及发酵条件的研究

从土样中筛选到一株产β－聚精酶的曲霉ＦＳ６８野生菌株,经ＵＶ,ＮＴＧ等五代诱变,获得变株ＦＳＵＮ－５１。对该菌株产酶条件优化实验结果表明：最佳培养基配方（％）：大麦粉５,黄豆饼粉 ２, ＦｅＳＯ_４· ７Ｈ_２Ｏ ０． ０１, Ｎａ_２ＨＰＯ_４ ０． １, ＣａＣＯ_３ ０． ５, ＭｇＳＯ_４ ０． ０３, ＮａＮＯ_３ ０． ４;最适的发酵条件为产酶ｐＨ为６．５,温度为３１℃,在２５０ｍｌ三角瓶中装量为２５ｍｌ,发酵周期为７２ｈ,摇瓶相对酶活比野生菌株提高６９％。     

嗜热β-葡聚糖酶产生菌的筛选及其培养基优化研究

以大麦β-葡聚糖为唯一碳源,从吐鲁番地区采集的土样中筛选到1株热稳定性β-葡聚糖酶产生菌株XTP-5,经初步鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。对该菌株产酶培养基优化实验结果表明:最佳培养基配方:麦糟粉20g/L、酵母粉4/L、K2HPO41.0g/L、NaCl0.5g/L、FeSO·47H2O0.01g/L、MgSO·47H2O0.5g/L、(NH4)2SO42.0g/L、Tween-800.06%。接种上述液体培养基(pH7.0)中,于37℃、180r/min摇瓶培养60h达到产酶高峰,酶活力可达9.52U/mL。     

皱纹盘鲍内脏β-1,3-葡聚糖酶的提取及其酶学性质研究

从鲍鱼内脏提取β-1,3-葡聚糖酶粗酶并研究其酶学性质。以昆布多糖为底物监控酶的活性。鲍鱼内脏经匀浆后,采用3倍体积0.1mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH6.0）浸提12h。浸提液经离心后收集上清液,并采用60%饱和度的硫酸铵对上清液中的蛋白进行盐析沉淀得β-1,3-葡聚糖酶粗酶。研究表明,粗酶中β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为40℃,酶活力在40℃以下稳定;酶的最适pH为6.0,酶活力在pH4.0～7.0范围内稳定。Mn2+能明显激活酶活力,而Cu2+、Fe3+、Hg+对酶活力有抑制作用,其中Fe3+的抑制作用最强;亮肽酶素和1,10-菲啰啉对酶活力有明显的抑制作用,而E-64对酶活力有一定的激活作用;此酶对海藻酸钠也有一定水解能力。      

高产β-果糖基转移酶的米曲霉菌株的筛选及其产酶条件优化

从本实验室保藏的6株米曲霉A-F01、A-F02、A-F03、A-F04、A-F05和A-F06中,利用高效液相色谱HPLC-示差折光检测器RID测定6株米曲霉生物合成β-果糖基转移酶（β-FTase）酶活,筛选出高产β-果糖基转移酶的米曲霉菌株A-F04,并通过单因素实验和正交实验对其产酶发酵条件和培养基进行了优化。结果显示,影响发酵产酶因素的主次顺序为接种量、培养温度和转速;影响A-F04菌株发酵培养基组成因素的主次顺序为庶糖、酵母粉、p H、硫酸铵;确定了A-F04菌株最佳产酶条件,即培养基组成为0.4%（m/v）的蔗糖、0.15%（m/v）的酵母粉、0.15%（m/v）的硫酸铵和0.2%（m/v）的氯化钠,起始p H7.0,接种量为1.0%（v/v）,培养时间为96 h,培养温度为35℃,转速为200 r/min,其β-FTase酶活力可达519.65 U/g,相比在发酵基础培养基和初始条件下的酶活466.25 U/g,提高了11.45%。      

响应面法优化康氏木霉产β-葡聚糖酶的液体发酵条件

确定康氏木霉（Trichoderma koningii）产β-葡聚糖酶的发酵培养条件。利用响应面优化法,通过两步实验设计,即部分因子实验和中心组合实验设计,对康氏木霉液体发酵产β-葡聚糖酶的最佳培养条件进行了优化研究。得到最优培养条件:发酵培养温度29·8℃,摇床转速为200r/min,发酵培养基起始pH为3·43;250mL三角瓶中装液量30mL;接种量5%（1·5mL/瓶）,培养时间为156h。在最优培养条件下康氏木霉产β-葡聚糖酶活力达到36·9U/mL。实验结果表明,康氏木霉在液体发酵条件下产β-葡聚糖酶,发酵液起始pH和培养温度对康氏木霉产β-葡聚糖酶活力影响最显著。