16种转基因大豆品系的实时荧光PCR法筛查

采用实时荧光PCR法,对河北主要进口转基因大豆口岸秦皇岛港及京唐港的45批次转基因大豆进行了16种转基因大豆品系筛查。结果发现,在45批样品中均检测到GTS-40-3-2品系;30批样品检测到MON89788品系,占所检测样品66.7%;14批样品检测到A2704-12品系,占所检测样品31.1%;2批样品检测到MON87701品系,占所检测样品4.4%;1批样品检测到MON87701×MON89788品系,占所检测样品2.2%;其他品系在所有45批样品中均未检测到。通过对河北主要进口口岸转基因大豆品系方面摸底筛查,为我国转基因大豆品系进口管控提供了数据支持。     

预包装食品中转基因成分现状分析

目的 对市售预包装食品中转基因成分状况进行抽样分析,并对转基因食品标识制度进行探讨。方法 采用GB/T 38505—2020《转基因产品通用检测方法》,以大豆加工产品、玉米加工产品、油菜加工产品、水稻加工产品、马铃薯加工产品5个转基因作物加工产品为研究对象,通过检测10个能覆盖所有商业化转基因品系的片段,同时对玉米、大豆、油菜、水稻和马铃薯5大作物的内源基因进行检测。根据扩增结果可判断样品是否含有转基因成分。结果 抽检的42种产品中,共检出6批次大豆类制品、1批次马铃薯类制品、3批次玉米类制品含有转基因成分。结论 现有的预包装食品中有一定比例产品可检出转基因成分,需要进一步严格规范食品标识制度。     

Fapas大豆粉中转基因成分检测能力验证结果与分析

目的提升实验室检验人员的检验水平,扩大实验室影响力,增强竞争力。方法根据Fapas组织方提供的能力验证作业指导书及GB/T19495.4-2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》和SN/T1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》对一份100%大豆粉测试样品进行转基因成分检测。结果该批次大豆粉样品pCaMV35S、tNOS、Roundup Ready(GTS-40-3-2)品系检出转基因成分, MON89788品系未检出转基因成分。结论本次能力验证结果为满意。     

实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系

目的：建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方 法：以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序 列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备 10 个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验。结果：本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏 度可达到0.01%（m/m）。结论：该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确地鉴定转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b 和B102-1-2品系。     

多品系混杂转基因大豆样品中复合品系的检测

摘要：目的 确认一份多品系混杂转基因大豆样品中是否含有复合性状转基因大豆。方法 采用实时荧光定性PCR方法对实验室留存的一份转基因初筛阳性大豆样品进行品系筛查检测,后分别采用单粒多靶点筛查检测和清洗后单粒多靶点筛查检测方法进行复合性状品系的确认。结果 经鉴定,该大豆样品中混杂了5种转基因大豆品系,检出复合性状转基因大豆为MON87708×MON89788品系,该品系为中国未经批准进口的转基因大豆品系。结论 鉴于目前缺乏完整的检测技术体系和技术标准,这种多品系混杂样品中掺杂未批准复合性状品系的行为非常具有隐蔽性和欺骗性,国内的农业安全监管部门和海关检疫部门都应该对此高度重视。     

改良LAMP法检测转基因作物

目的 建立简易的可视化环介导等温扩增(LAMP)检测转基因作物的方法。方法 通过一对特异的能识别一段正义链和一段反义链的内引物和一对链置换引物, 在Bst DNA聚合酶作用下, 以等温条件实现对外源转基因成分的扩增, 反应液和高浓度的显色液SYBR GREENⅠ同时置于特殊设计的反应管中, 反应后可实现闭管可视化检测。结果 对转基因作物中常见的外源基因元件胭脂碱合成酶终止子(T-NOS)和烟草花叶病毒35S启动子(P-CaMV35S)进行了LAMP检测。T-NOS LAMP对大米品系BT63, 玉米品系BT11, MON810, 大豆品系GTS40-3-2的检测结果呈阳性, P-CaMV35S LAMP对大米品系BT63, 玉米品系BT11, MON810, MON863, 大豆品系GTS40-3-2的检测结果呈阳性, 二者对非转基因大米, 玉米, 大豆的检测结果均呈阴性。上述结果表明, 本文中建立的T-NOS 和P-CaMV35S LAMP检测方法特异性高。另外, 通过对大豆品系GTS40-3-2模拟样品的检测, 证明T-NOS LAMP能检出转基因成分含量为0.5%的样品, P-CaMV35S LAMP能检出转基因成分含量为0.1%的样品, 检测灵敏度较高。结论 改良LAMP法灵敏度高, 特异性好, 能用于快速初筛转基因作物。     

实时荧光PCR定量检测加工产品中转基因玉米Mon810成分

采用实时荧光PCR技术，建立了定量(性)鉴定检测加工产品中转基因玉米Mon810成分的方法。实验设计的可以扩增玉米自身基因和外源基因边界序列的引物和探针具有品种和品系特异性，特异性地检测出食品、饲料等加工产品中转基因玉米Mon810成分。某些检测样品不仅检出转基因玉米Mon810成分，还同时检出其它转基因玉米品系或其它转基因品种。本研究实验建立的转基因玉米Mon810品系鉴定检测方法，即可以用于加工产品中转基因成分的定量检测(检测低限为0．1％)，也可以用于定性检测，或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。     

基于双重微滴式数字PCR对转基因油菜RF1品系的定量方法

基于微滴式数字PCR平台,建立了一种在同一个微滴反应体系中同时检测油菜样品中两种靶标序列的双重微滴式数字PCR(duplex-ddPCR)定量分析方法。试验结果表明,内参基因和品系特异性基因均能特异性扩增出来,所建立的RF1品系duplex-ddPCR方法特异性好。在单位体系内参和外源基因拷贝数位于18~23077的区间内可以呈现出良好的线性,r2=0.999。经验证,本方法的定量检测限(LOQ)和最低检测限(LOD)分别为18拷贝/反应和3.7拷贝/反应。精密度试验结果表明两组浓度的DNA样品所得到的平行试验结果的标准偏差(relative standard deviations,RSD)介于8.40%~24.50%,准确度试验结果显示标准偏差RSD值介于5.97%~12.64%,均达到了对方法精密度RSD和准确度RSD小于25%的要求。综上所述,本研究所建立的duplex-ddPCR定量分析方法可用于转基因油菜RF1的定量检测。     

实时荧光定性聚合酶链式反应标准方法检测转基因产品的验证及应用

目的验证实验室大豆、玉米和水稻及其制品转基因检测方法,并应用于实际样品检测。方法根据GB 19495.4-2018《转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法》要求对无转基因标识的样品进行转基因成分检测。结果方法验证满意。40批次样品(大豆、玉米和水稻及其制品)中发现1批次的转基因成分检出,检出率为2.5%。结论市场中绝大部分未标示转基因成分的大豆、玉米和水稻及其制品确实未检出转基因成分,仅有极少数产品含有转基因成分,但未进行有效标识。     

转基因油菜Ms8品系的LAMP检测

目的 建立一种快速敏感的转基因油菜籽Ms8品系应用环介导等温扩增技术检测方法。方法 针对转基因油菜籽Ms8品系外源基因与内源基因结合处序列设计1组特异性引物, 对反应体系进行优化。 结果 LAMP检测方法反应速度快, 在60 min内即可完成扩增, 检测结果易于观察, 通过肉眼观察染色情况即可分辨, 该方法灵敏度高, 检测限可达到65.12 pg/?L, 并且具有良好的特异性。结论 LAMP检测方法快速、灵敏、特异性强, 适用于转基因油菜籽Ms8品系基层和现场检测。     

利用多重PCR方法检测7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)研究

为对商业化进口7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)进行高通量、快速、准确检测,建立可用于鉴定7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)多重PCR检测方法。首先建立7种转基因油菜籽品种(系)稳定单重PCR检测体系,在此基础上再建立和优化7种转基因油菜籽品种(系)多重PCR检测体系;获得4组可用于鉴定7种转基因卡诺拉油菜籽品种(系)多重PCR检测体系,其中1组为四重PCR检测体系,3组为两重PCR检测体系。优化多重PCR体系具有较高稳定性和重复性,可作为检测该7种转基因油菜籽品种(系)有效方法。     

Event-specific qualitative and quantitative PCR detection of genetically modified rapeseed Topas 19/2

The herbicide-tolerant transgenic rapeseed Topas 19/2 (synonym HCN92) has been approved for environmental release in Canada, Japan, Australia and the USA, and exported to a number of other countries as raw material. The purpose of this study was to establish event-specific qualitative and quantitative detection methods for Topas 19/2. The 3′-integration junction sequence spanning the host plant DNA and the integrated transgene of the Topas 19/2 event was isolated and identified. The event-specific qualitative detection method was established to produce an amplicon of 110 basepairs (bp) with an absolute detection limit of 10 initial template copies. The event-specific quantitative detection method was developed with the limit of detection (LOD) and limit of quantification (LOQ) being approximately 5 and 50 initial template copies, respectively. The developed real-time PCR systems were assessed using two mixed rapeseed samples with known Topas 19/2 contents. Expected results were obtained.     

油菜籽干燥技术研究进展

油菜籽干燥技术是油菜籽加工过程中的重要环节,干燥方法及工艺的不同对油菜籽的品质有显著影响。依据国内外关于油菜籽干燥机理、数学模拟、干燥工艺及品质分析等研究成果,综述国内外油菜籽干燥技术的研究进展,对油菜籽热风干燥、就仓干燥、微波干燥、高压电场和过热蒸汽干燥等方法进行归纳总结,指出目前油菜籽干燥技术研究中存在的问题和不足,展望了油菜籽干燥研究的发展方向,旨在为后续的油菜籽干燥技术研究提供参考。     

基于全二维气相色谱-飞行时间质谱法鉴定冷榨菜籽油的挥发性风味成分

以甘蓝型、白菜型和芥菜型3种不同基因型菜籽为原料,采用全二维气相色谱-飞行时间质谱法对冷榨菜籽油中挥发性风味成分进行鉴定,结合嗅觉检测器对其进行气味分析,并通过感官评定构建冷榨菜籽油风味轮廓图。研究表明:全二维气相色谱-飞行时间质谱法共分离共鉴定出156种挥发性成分,其中38种物质具有特征气味,主要包括异硫氰酸酯、含硫化合物、醇类、醛类、酸类、酮类、内酯和杂环类化合物;对于不同基因型原料而言,异硫氰酸酯和含硫化合物是冷榨菜籽油中风味差异的关键组分,甘蓝型、白菜型和芥菜型3种冷榨菜籽油的异硫氰酸酯总量分别为6. 94%、40. 86%和54. 94%,含硫化合物总量分别为2. 7%、0.44%、1.73%;通过感官评定,3种冷榨油中甘蓝型菜籽油中的辛辣味最弱,卷心菜味最强,白菜型菜籽油中青草味最明显,芥菜型中的酸味最明显;3个不同品种间种子味、坚果味、腐败味、发霉味、苦味差异不显著(P0.05)。     

Kernel lot distribution assessment (KeLDA): a study on the distribution of GMO in large soybean shipments

The reliability of analytical testing is strongly affected by sampling uncertainty. Sampling is always a source of error and the aim of “good” sampling practice is to minimize this error. Generally the distribution of genetically modified (GM) material within lots is assumed to be random in order to use binomial distribution to make inferences. This assumption was never verified in practice and no experimental data investigating the distribution of genetically modified organisms (GMOs) exist. The objectives of the KeLDA project were: (1) to assess the distribution of GM material in soybean lots (2) to estimate the amount of variability of distribution patterns among lots. The GM content of 15 soybean lots imported into the EU was estimated (using real-time PCR methodology) analyzing 100 increment samples systematically sampled from each lot at predetermined time intervals during the whole period of off-loading. The distribution of GM material was inferred by the one-dimensional (temporal) distribution of contaminated increments. All the lots display significant spatial structuring, indicating that randomness cannot be assumed a priori. The evidence that the distribution of GM material is heterogeneous highlights the need to develop sampling protocols based on statistical models free of distribution requirements.     

电子鼻在两种类型浓香菜籽油识别中的应用

采用电子鼻对6种不同炒籽温度和7种不同原料产地油菜籽分别制取的两种类型浓香菜籽油进行了分析。结果表明:通过采集各样品气味信息,电子鼻能够灵敏地检测到浓香菜籽油的香气差异,经数据主成分分析判定,电子鼻既可以很好地区分不同炒籽温度的菜籽油样品,又可以区分不同原料产地的菜籽油样品,因此利用电子鼻技术能建立一种客观、快速区分不同工艺或不同原料浓香菜籽油的评价方法。     

7 种十字花科种子中黑芥子酶降解油菜籽饼粕中硫苷的产物比较分析

比较7 种十字花科植物种子中的黑芥子酶的活性,利用气相色谱-质谱法（gas chromatography-massspectrometry,GC-MS）分别测定这7 种黑芥子酶降解油菜籽饼粕中硫代葡萄糖苷（简称硫苷）的产物组分和相对含量。结果表明：7 种来源的黑芥子酶比活力存在差异（P＜0.05）,比活力由高到低依次为西兰花籽黑芥子酶（broccoli seeds myrosinase,BSm）、油菜籽黑芥子酶（rape seeds myrosinase,RPSm）、白菜籽黑芥子酶（whitecabbage seeds myrosinase,WCSm）、萝卜籽黑芥子酶（radish seeds myrosinase,RDSm）、芥蓝籽黑芥子酶（kaleseeds myrosinase,KSm）、甘蓝籽黑芥子酶（cabbage seeds myrosinase,CSm）和芥菜籽黑芥子酶（mustard seedsmyrosinase,MSm）。GC-MS比较分析7 种黑芥子酶降解油菜籽饼粕中硫苷的产物发现,RPSm降解产物有6 种,即1-丁烯基-4-异硫氰酸酯、烯丙基异硫氰酸酯、2-苯乙基异硫氰酸酯、苯丙腈、致甲状腺肿素和2,1-苯并异恶唑。CSm降解产物中1-丁烯基-4-异硫氰酸酯含量最高（33.22%）,RPSm次之,含量为32.20%,而MSm降解产物中未检测到。WCSm、KSm、MSm和CSm降解产物中检测到新组分丁基异硫氰酸酯。与RPSm降解产物相比,其他6 种黑芥子酶降解产物中恶唑类及腈类物质种类增多,有4 种恶唑类和3 种腈类,但降解产物中未检测到2,1-苯并恶唑。不同来源的黑芥子酶在相同环境下降解油菜籽饼粕中的硫苷的产物种类和相对含量存在明显差异,虽RPSm活性低于BSm,但其降解产物中恶唑类及腈类种类最少,含量最低,是较好的降解油菜籽饼粕中硫苷的酶源。     

微波处理油菜籽对油脂品质影响的研究

应用微波加热技术,对油菜籽进行干燥处理,然后采用气相色谱和红外光谱分析经处理后的油脂品质的变化。实验结果表明:通过微波加热可使含水量11.85%的菜籽在11min后降至2.85%;经微波处理后的油料提高了出油率;脂肪酸组成基本无变化,不存在反式脂肪酸;油脂过氧化值随处理时间的延长而升高;微波辐射时间对酸价和蛋白质含量影响不大,而对水溶性蛋白有一定影响。     

Detection of GM Canola MS11, DP-073496-4, and MON88302 events using multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis

As of 2020, 11 GM canola events have been authorized as food for humans in Korea. However, there are no simultaneous multiplex detection methods for 3 GM canola events (DP-073496-4, MON88302, and MS11). Thus, we established the multiplex polymerase chain reaction (PCR) method coupled with capillary electrophoresis to detect 3 GM canola events. To verify the specificity of event-specific primers, various GM crops of 3 GM soybean events, 6 GM maize events, 2 GM cotton events and 11 GM canola events were prepared. The limit of detection of the developed multiplex PCR was approximately 0.0125% for 3 GM canola events. Certified GM canola and stacked events were analyzed to validate the developed multiplex PCR. This study focuses on establishing multiplex PCR coupled with capillary electrophoresis for newly approved GM canola events and contributes to efficient monitoring GM canola samples in Korea.     

油菜籽脱壳与分离设备研究

油菜是我国重要的油料作物之一 ,油菜籽是重要的油脂与蛋白质资源。本文分析了油菜籽脱壳制油的必要性 ,还介绍了油菜籽脱壳与分离设备及用其作过 2 2 0 0 0Kg油菜籽脱壳与分离生产试验的结果 :脱壳率为 85 % ,仁中含壳率为 4 % ,壳中含仁率为 1% ,粉末率为 3% ,结果表明 ,该设备是一种能用于生产的实用性设备