碳纳米生物传感检测金黄色葡萄球菌

目的建立一种基于碳纳米材料的适配体传感器快速检测金黄色葡萄球菌的方法。方法利用核酸适配体与其靶标之间的特异性结合能力以及碳纳米管的荧光猝灭特性,构建一种新型快速的金黄色葡萄球菌检测方法。结果该方法特异性良好,与非目标菌株无交叉反应。同时,该方法对金黄色葡萄球菌的检出限为10~5 CFU/mL,线性范围为10~5～10~9 CFU/mL,而且在此浓度范围之间呈现良好的线性关系,线性方程为Y=53.22X-39.99,线性相关系数r~2=0.992。结论该方法具有检测速度快、操作简便、检测成本低等特点,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了一种有效手段。     

从牛奶中检出产肠毒素的金黄色葡萄球菌

牛奶及其制品污染金黄色葡萄球菌的机会较多。近年来,在国内一些城市中,由该类食品引起葡萄球菌食物中毒的事件屡有发生[1、2]。为了解我市奶牛所产牛奶污染金黄色葡萄球菌的情况,我们特对本市奶牛场患有乳腺炎的奶牛取奶样进行金黄色葡萄球菌的检验,并对检出菌株作了凝固酶、耐热脱氧核糖核酸(DNA)酶与肠毒素检查,以进一步了解金黄色葡萄球菌与这些代谢产物之间的相关性。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)作为与食品中毒相关的重要毒素之一而被广泛报道。同时由于其具有热稳定性、易制备、高毒及易传播等特点引起科研人员的高度重视,因此,建立SEB高效的检测方法非常重要。本文对SEB的检测方法进行了综述,主要讨论了生物学检测、免疫凝集实验、琼脂糖扩散法、酶联免疫检测技术、放射性免疫检测技术、免疫荧光检测技术、胶体金试纸条检测技术、基因探针、仪器分析、生物传感检测等检测方法的原理及相关国内外研究进展的应用和局限,这对提前预防金黄色葡萄球菌肠毒素B引起的食物中毒具有重要意义,同时也为今后开发新型检测方法提供理论参考和技术支持。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化

为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B（SEB）,在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B。实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用。      

金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化

为了分离纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB),在离心、浓缩后,将浓缩液依次经羧甲基阳离子交换纤维素CM-32和葡聚糖凝胶G-75两步柱层析,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,获得了电泳纯的金黄色葡萄球菌肠毒素B.实验证明,该简化的二步柱层析分离得到的SEB纯度高,方法简便易行,一般实验室均可采用.     

基于酶联适配体快速检测食品中葡萄球菌肠毒素A

该研究基于双适配体夹心原理,建立了一种酶联适配体检测葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)的新方法,并对适配体浓度、链霉亲和素-辣根过氧化物酶浓度、反应体系、封闭条件、反应时间等条件进行了优化.结果显示,在适配体浓度40 nmol/L、牛血清白蛋白(Bovine serum...     

金黄色葡萄球菌B型肠毒素的构象研究

采用扫描电镜、X-射线衍射仪、原子力显微镜、傅立叶红外光谱仪等现代结构分析手段,对金黄色葡萄球菌B型肠毒素的蛋白质聚集态结构、立体形貌、分子链构象等进行较为系统的结构表征.结果表明:SEB结构中有结晶区的形成,结晶度为37.8%,SEB分子聚集在一起,形态主要为片状和平板状,具有一定的规整性;SEB在稀溶液状态下其单分子链长度约为1500 nm,分子链宽度约为20～40 nm,分子链高0.6 nm;SEB是一种β-折叠结构含量较多的蛋白质.     

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素检测方法的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起人类疾病和细菌性食物中毒的主要致病因子,目前已知有10个血清型。在食品卫生检验工作中,曾有过多种检测肠毒素的方法,通过对各种检测方法的原理及特点的概述,介绍了各种方法的应用范围和优缺点。     

利用简并引物检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因

通过设计简并引物建立一种PCR技术同步快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A和B基因的方法。根据金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因编码序列,设计一对特异性简并引物SEAB来扩增靶基因片段,长度分别为105bp和135bp,通过对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B菌株和4株对照菌株进行PCR检测,评价该引物的特异性;对金黄色葡萄球菌肠毒素B的DNA系列10倍稀释,对其灵敏性进行PCR检测。结果显示,金黄色葡萄球菌肠毒素A和B菌株的DNA检测结果呈阳性,4株对照菌株的检测结果呈阴性,通过基因测序证实了PCR产物的特异性,SEB的DNA最低检测浓度为3.58ng,整个检测过程不超过20h。建立了一个特异、快速灵敏的在同一条件下,金黄色葡萄球菌肠毒素A、B基因的PCR检测方法。     

基于纳米抗体的酶联免疫吸附法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B

在前期已获得抗金黄色葡萄球菌肠毒素B (Staphylococcal enterotoxin B,SEB)纳米抗体的基础上,建立一种用于检测食品中SEB的酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),为食品及农产品质量监管提供技术支持。优化表达条件后,通过大肠杆菌原核表达获得抗SEB的纳米抗体B7;以纳米抗体B7作为捕获抗体,以噬菌体展示的抗SEB纳米抗体B6为检测识别元件,建立夹心ELISA方法;以牛奶、牛肉及西瓜汁为样本对其进行方法学评价。结果显示,纳米抗体B7在大肠杆菌中成功表达,表达量为6. 2 mg/L;该方法在16～1 024 ng/m L具有良好的线性关系(R2=0. 990 4),最低检出限为(9. 58±0. 07) ng/m L;该方法与SEC有42. 18%的交叉,与SEA及另外3株金黄色葡萄球菌无明显交叉;牛奶、牛肉和西瓜汁的加标回收率分别为87. 26%～108. 43%,79. 36%～106. 56%和83. 81%～99. 43%。该方法以纳米抗体作为识别元件,可应用于实际食品及农产品中的SEB高灵敏检测,具有广阔的应用前景。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C在草莓中 表达的研究

目的研究金黄色葡萄球菌在草莓中生长情况及与3种肠毒素SEA、SEB、SEC产生的相关性。方法将实验菌株进行肠毒素分型确认后,分别制备10~4 CFU/g(高)、10~2CFU/g(低)两个浓度菌液,采用浸泡方式人工污染到草莓上,分别于8℃、25℃下贮存,贮存过程中参照GB 4789对草莓进行金黄色葡萄球菌计数和金黄色葡萄球菌肠毒素(A-C)检测。结果适宜条件下,无论初始污染程度高低,金黄色葡萄球菌都能在草莓上正常生长代谢并产生肠毒素,特别是SEA的产生较SEB和SEC迅速。其中,25℃贮存条件下,金黄色葡萄球菌累计到10~4 CFU/g以上就可从样品中检测到SEA,累计到10~5 CFU/g以上可以检测到SEC,累计到10~7CFU/g以上可以检测到SEB;8℃贮存条件下,48 h内未检测到肠毒素。结论以草莓作为金黄色葡萄球菌培养基质,获得了金黄色葡萄球菌生长及与3种常见肠毒素产生的相关性,对草莓微生物风险评估及相关标准制订具有参考意义。     

基于核酸适配体识别-时间分辨荧光共振能量转移检测牛奶中培氟沙星兽药残留

培氟沙星(pefloxacin,PEF)广泛用于畜禽疾病的预防和治疗,常造成兽药残留,影响人体健康.因此,有必要对其构建有效快速的检测方法.实验采用溶剂热法合成具有时间分辨特性的荧光纳米材料NaYF4:Ce/Tb,并基于分子对接辅助设计PEF适配体的互补链.纳米金与发光纳米材料分别修饰在适配体、互补链上,通过碱基互补配...     

Effect of heat treatment on activity of staphylococcal enterotoxins of type A,B, and C in milk

Intoxication by staphylococcal enterotoxins (SE) is among the most common causes of food-poisoning outbreaks resulting from the consumption of raw milk or products made thereof. The aim of our study was to analyze the thermal stability of SE and evaluate the inactivation of SE types A, B, and C (SEA, SEB, SEC) by autoclaving at 100°C, 110°C, and 121°C. Milk samples were inoculated with 38 Staphylococcus aureus strains that possessed the ability to produce SEA, SEB, or SEC and incubated at 37°C for 24 h. This incubation was followed by heat treatment at 100°C, 110°C, or 121°C for 3 min. Samples were analyzed by Staph. aureus plate count method on Baird-Parker agar and specifically for the presence of SE. An enzyme-linked immunofluorescent assay (ELFA) on a MiniVIDAS analyzer (bioMérieux, Marcy l'Étoile, France) was used to detect SE, which were determined semi-quantitatively based on test values. The obtained results were analyzed by means of nonparametric statistical methods. All samples (100%; 38/38) were SE-positive before heat treatment, and the positivity rates decreased after heat treatment at 100°C, 110°C, and 121°C to 36.8% (14/38), 34.2% (13/38), and 31.6% (12/38), respectively. The rates of positive samples differed between SEA, SEB, and SEC producers: SEA was detected in the highest amounts both before and after heat treatment. The amount of SE (expressed as test values) decreased significantly after heat treatment. Comparing amounts of SE in positive and negative samples before and after heat treatment, we can conclude that the success of SE inactivation depends on the amount present before heat treatment. The highest amount of SE and the highest rate of SE-positive samples after all heat treatments were found in samples with strains producing SEA. For SEB and SEC, lower amounts of enterotoxin were present and were inactivated at 100°C. Although temperatures of 100°C, 110°C, and 121°C may inactivate SE in milk, the key measures in prevention of staphylococcal enterotoxicosis are avoiding initial contamination of milk by Staph. aureus, promoting consumption of heat-treated milk, and preventing disruption of the cold chain during milk production and processing.     

基于核酸适配体的电化学法检测铅离子

目的 建立基于核酸适配体的铅离子电化学检测方法。方法 铅离子适配体能够与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的铅离子适配体互补单链DNA形成稳定的结构, 当向溶液中加入铅离子时, 铅离子适配体与铅离子结合, 导致电极上固定的HRP减少。HRP能够催化溶液中双氧水(H2O2)和对苯二酚(hydroquinone quinol, HQ)发生氧化还原反应产生电化学信号。通过电化学信号的改变实现对铅离子的定量检测。结果 在铅离子浓度为1.0×10?4~1.0×10?1 g/L时, 电流与铅离子浓度呈线性关系为I(μA)=?17.678LogC/(g/L)+ 1.331(r2=0.995), 检测限为9.0×10?5 g/L。结论 该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好等优点, 可用于食品安全检测和分析中铅离子的测定。     

A novel electrochemical immunosensor based on Fe3O4@graphene nanocomposite modified glassy carbon electrode for rapid detection of Salmonella in milk

Foods contaminated by foodborne pathogens have always been a great threat to human life. Herein, we constructed an electrochemical immunosensor for Salmonella detection by using a Fe₃O₄@graphene modified electrode. Because of the excellent electrical conductivity and mechanical stability of graphene and the large specific surface area of Fe₃O₄, the Fe₃O₄@graphene nanocomposite exhibits an excellent electrical signal, which greatly increased the sensitivity of the immunosensor. Gold nanoparticles were deposited on Fe₃O₄@graphene nanocomposite by electrochemical technology for the immobilization of the antibody. Cyclic voltammetry was selected to electrochemically characterize the construction process of immunosensors. The microstructure and morphology of related nanocomposites were analyzed by scanning electron microscopy. Under optimized experimental conditions, a good linear relationship was achieved in the Salmonella concentration range of 2.4 × 10² to 2.4 × 10⁷ cfu/mL, and the limit of detection of the immunosensor was 2.4 × 10² cfu/mL. Additionally, the constructed immunosensor exhibited acceptable selectivity, reproducibility, and stability and provides a new reference for detecting pathogenic bacteria in milk.     

时间分辨荧光免疫层析快速检测牛奶中地塞米松

目的 建立基于时间分辨荧光微球对牛奶中的地塞米松残留进行快速检测的方法,并对该方法性能进行评估。方法 使用地塞米松抗体标记时间分辨荧光微球,分别采用湿法和干法制备检测试纸条,比较两种方法的灵敏度,同时确定微球的最佳抗体标记量,并对试纸条的重复性、检测灵敏度进行评估。结果 以20μg抗体/mg微球的标记量,湿法制备的试纸条检测灵敏度更佳。该方法重复性检测中变异系数(coefficientof variation, CV)为8.2%,地塞米松溶液的检出限为0.07 ng/mL,检测牛奶中地塞米松的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)为0.24 ng/mL。结论 该方法具有测试简单、灵敏度高等特点,制备的试纸条可满足牛奶中地塞米松残留的检测要求。     

基于双重聚合酶链式反应技术检测掺假驴乳中的牛乳

目的 建立双重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测驴乳中掺假的牛乳的鉴别方法 。方法 将牛乳按比例掺入驴乳制备掺假乳,经热处理提取DNA,以驴和牛的12S-RNA、16S-RNA为靶标设计特异性引物,进行相应的PCR扩增,优化双重PCR退火温度,同时考察该方法 在巴氏杀菌、高温灭菌和冷冻干燥条件下的适用性及灵敏度。结果 牛和驴的引物特异性均良好,与非目标物种DNA不发生交叉反应,DNA检出限最低为10 ng;优化后的双重PCR最佳退火温度为55.7℃;单重PCR由于干扰因素少,对驴乳中牛乳的掺假检出限均为0.1%,而双重PCR也表现出较好的适用性及灵敏性,在原料乳中检出限为0.5%,巴氏杀菌乳、高温灭菌乳和冷冻干燥驴乳中检出限均为2.0%。相较于单重PCR,双重PCR大大缩短了检测时间成本。结论 本研究为驴乳中牛乳的掺假检测提供了一种准确、灵敏和经济的方法 ,具有实际参考价值。     

基于核酸适配体杂交链式反应比色法检测鼠伤寒沙门氏菌

该研究探讨了基于核酸适配体特异性识别机制和杂交链式反应（hybridization chain reaction,HCR）扩增策略,以金纳米粒子（gold nanoparticles,AuNPs）颜色变化为比色信号,设计了一种无标记、无酶、灵敏的鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium,S. typhimurium）比色检测法。根据鼠伤寒沙门氏菌核酸适配体设计引发链和两个发夹探针,核酸适配体捕获鼠伤寒沙门氏菌,触发引发链打开发夹探针,发生杂交链式反应,在实现目标菌信号放大同时,利用反应前发夹探针粘性末端以及反应后形成的杂交长链对金纳米粒子结合差异性,产生比色信号,实现鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。通过对杂交链式反应时间、发夹探针与金纳米粒子结合时间以及发夹探针浓度等实验参数进行优化,提高实验灵敏度。在最优实验条件下,鼠伤寒沙门氏菌浓度对数值与紫外吸光比值（A630/525）在103~107 CFU/mL范围内呈现良好的线性关系,检测限为6.3×101 CFU/mL,在牛奶样品中加标回收率为90.05%~109.97%。本比色法操作方便,无需要化学修饰以及复杂仪器且实验结果可视,为鼠伤寒沙门氏菌监测提供一种新的方法。