恶性疟原虫DNA疫苗免疫效果的评估

以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）为载体,由其基因构建了含有不同时期不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ￣ＡＷＴＥ和ＣＴＢ￣ＮＡＮＰ,前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外,还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位,后者含有子孢子期的Ｂ、Ｔｈ细胞表位。将纯化的质粒免疫Ｂａｌｂ／ｃ纯系小鼠,３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫,免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验     

人工设计的HIV-1重组鸡痘病毒诱导恒河猴产生免疫应答的研究

将人工设计的HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒rFPV-MEGp24大量制备并纯化后,分别在0周、8周、18周肌肉注射至实验恒河猴中,在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性.结果表明:HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒可刺激恒河猴产生HIV-1特异性抗体;免疫猴的PBMC在HIV-1抗原肽刺激下细胞增殖能力加强,针对HIV-1靶细胞的特异性CTL杀伤活性产生,分泌Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2的水平升高.研究提示,HIV-1多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒能诱导恒河猴产生特异性细胞和体液免疫应答.     

DDA提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的研究

将编码结核杆菌的三种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段分别插入到真核表达载体中,混合后作为组合疫苗免疫小鼠,DDA作为佐剂提高了三价疫苗的免疫原性和免疫保护效果.添加DDA后Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ的含量分别为(265.37±79.2)U/ml,(185.31±58.3)U/ml,(108.13±54.4)U/ml,分别比非佐剂组高16U/ml,45U/ml,2 U/ml.IL-4的含量在各组中相差不多,仅为纳克级.攻毒后细菌计数结果显示,肺脏和脾脏的载菌量在添加佐剂的三价组中降低了三个数量级,都达到了未加佐剂组相应脏器的一半菌量.病理切片显示结果与载菌量一致,添加佐剂组肺部淋巴细胞相对较少,巨噬细胞增多.因此,DDA作为佐剂提高了组合疫苗的免疫效果.     

结核分枝杆菌DNA疫苗的免疫原性和保护效率的比较研究

对结核分枝杆菌两种DNA单价疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价和比较。将结核分枝杆菌抗原蛋白。MPT70(22kDa)和PstS-3(40kDa)克隆到原核表达载体pET22b中,酶切和测序鉴定正确后转化入E．coli BL21(DE3)PLysS宿主菌株内中,通过诱导表达纯化获得目的蛋白用于DNA疫苗效价鉴定。用真核表达载体pJW4303构建了MPT70,PstS-3(包括信号肽的全基因)两种重组真核质粒(DNA疫苗),进行了酶切鉴定和序列分析,确定含有正确的读码框。用上述DNA疫苗分别肌注免疫小鼠,三免小鼠后21天MPT70和PstS-3抗体均达到为1：12800,三免后21天小鼠的脾脏细胞诱导产生较高水平的MPT70和PstS-3特异性的细胞因子γ-干扰素,浓度分别为16872．82pg／ml和11460．98pg／ml.三次免疫后经静脉强毒攻击,两组DNA疫苗免疫鼠的肺脏和脾脏的载菌数均比阴性对照组少,表明这两种疫苗都能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,而且以前者为主。综合各项指标发现,DNA疫苗MPT70要优于PstS-3。     

HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

将HIV－1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中进行表达,以期获得重组痘苗病毒,与核酸疫苗混合免疫,评价免疫效果,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV－1中国流行株gp120基因片段插入到pJ38载体启动子下游,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒,SDS－PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB／c小鼠,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4＋CD8＋T细胞数目以及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38pg120能够表达Gp120蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫,具有良好的免疫原性,其免疫效果以2rVV-DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp120。