α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226-5、V-20进行抗药性标记,筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17,并以P-67和S-17为融合的亲本在溶菌酶浓度,酶解时间,酶解温度,PEG浓度和pH等不同的条件下进行原生质体融合,从而确定了其融合的最佳条件。     

α-ALDC产生菌的抗性标记与融合条件初探

利用青霉素和链霉素分别对α-ALDC产生菌枯草芽孢杆菌3226—5、V-20进行抗药性标记，筛选得到稳定的青霉素抗性标记株P-67和链霉素抗性标记株S-17，并以P-67和S-17为融合的亲本在溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度、PEG浓度和pH值等不同的条件下进行原生质体融合，从而确定了其融合的最佳条件。     

微波对α-ALDC产生菌W195的诱变效应探讨

利用微波诱变技术对产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌W195进行了微波诱变效应的研究。通过对微波辐照不同时间及不同强度的实验,对突变菌株的α-ALDC产量进行比较和分析,得出诱变剂量和诱变效应的关系及诱变的最佳剂量,同时测定所得较高产量突变菌株的遗传稳定性。研究结果表明,诱变剂量越大,菌体的致死效应越大,而诱变效应是先增大后减小,存在一个最佳值。本实验最佳诱变剂量为微波低强度间歇辐照40s,得到的突变株M3-14产量为0.375,相对出发菌株提高了55%,遗传性状基本稳定。      

微波对α-ALDC产生菌W195的诱变效应探讨

利用微波诱变技术对产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌W195进行了微波诱变效应的研究。通过对微波辐照不同时间及不同强度的实验,对突变菌株的α-ALDC产量进行比较和分析,得出诱变剂量和诱变效应的关系及诱变的最佳剂量,同时测定所得较高产量突变菌株的遗传稳定性。研究结果表明,诱变剂量越大,菌体的致死效应越大,而诱变效应是先增大后减小,存在一个最佳值。本实验最佳诱变剂量为微波低强度间歇辐照40s,得到的突变株M3-14产量为0.375,相对出发菌株提高了55%,遗传性状基本稳定。     

枯草芽孢杆菌产α-ALDC发酵条件的优化

以枯草芽孢杆菌BS059-22为供试菌株,考察了影响发酵的接种量、发酵温度、初始pH值、摇床转速及发酵时间等因素,结果表明,接种量8%,发酵温度33℃,初始pH6.5,摇床转速220r/min,发酵时间18h为生产-α乙酰乳酸脱羧酶最适发酵条件。     

α—乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中的应用

双乙酰超标是影响啤酒质量的重要问题。本文介绍了在传统发酵中使用α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)降低啤酒中双乙酰含量的实际应用,并对使用中的一些问题进行了探讨     

α-乙酰乳酸脱羧酶应用的研究

使用α-乙酰乳酸脱羧酶，可减少双乙酰还原时间，使发酵周期缩短4d，降低双乙酰峰值，成品啤酒双乙酰反弹幅度小，延长啤酒保存期，提升啤酒质量和稳定性。     

外加α-乙酰乳酸脱羧酶初探

α-乙酰乳酸脱羧酶 (α -acetolactatedecarboxylase ,ALDC)是 2 0世纪 90年代初期应用于啤酒生产的一项新技术[1] ,它能将啤酒生产过程中双乙酰的前驱物质α -乙酰乳酸迅速地分解为乙偶姻 ,从而快速地降低啤酒中双乙酰的含量 ,促进啤酒的成熟并缩短发酵周期。1　α -乙酰乳酸脱羧酶的作用机理主发酵时 ,若麦芽汁中没有足够的游离缬氨酸 ,酵母将启动自身的缬氨酸合成机制 ,在缬氨酸合成的生化途径中 ,α-乙酰乳酸是酵母合成缬氨酸的中间产物 ,它在酵母细胞内形成 ,经过细胞膜、细胞壁渗透到细胞外经非酶作用氧化脱羧形成双乙酰 ,双乙酰再…     

α-乙酰乳酸脱羧酶和α-氨基氮影响啤酒发酵中双乙酰产生的试验研究

通过对α-乙酰乳酸脱羧酶的加入与否，以及麦汁中α-氨基氮含量不同时对双乙酰产生情况的研究，结果表明：在发酵第2～12d的过程中，双乙酰变化呈现一定的规律性，在4d时达到峰值，同时α-乙酰乳酸脱羧酶的加入和高α-氨基氮含量的麦汁会减少双乙酰的产生量。     

国产α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中的应用

双乙酰的前驱物质是α-乙酰乳酸,在生产过程中添加α-乙酰乳酸脱羧酶可迅速降解α-乙酰乳酸,从而降低双乙酰含量,缩短发酵周期.通过两年来对进口和国产α-乙酰乳酸脱羧酶的试用比较,认为国产α-乙酰乳酸脱羧酶的使用效果完全可靠,能够替代进口同类酶制剂.     

α-乙酰乳酸脱羧酶发酵条件的初步研究

测定α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌3226-5的生长曲线,从而根据酶活变化确定出最佳的接种种龄。进一步考察了接种量、温度、pH、通气量、发酵时间等条件对ALDC发酵酶活的影响,结果表明:接种量9%、培养温度37℃、初始pH8.5、摇床260r/min、装液量9mL、发酵时间18h为最佳发酵条件。     

树脂固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的初步研究

采用7种树脂对α-乙酰乳酸脱羧酶进行固定化,并将固定化酶应用于啤酒发酵实验,从中筛选出降低发酵液中双乙酰能力较强的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D314FD作为固定化的载体。通过单因素和正交实验确定固定化ALDC的最优条件为:每克树脂加入1.25mL原酶液,吸附时间10h,吸附pH7.5,吸附温度15℃,在此条件下固定化效率可达44%。发酵实验亦表明,固定化ALDC可以显著降低发酵液中双乙酰的含量,降低率达40%以上。      

α-乙酰乳酸脱羧酶克隆表达方法

双乙酰是啤酒生产工艺中重要的风味物质,为控制啤酒生产中双乙酰的含量,缩短啤酒熟化时间,基因工程技术改造啤酒酵母已应用得非常广泛。综述国内外基因工程技术克隆表达方法,介绍检测策略。     

树脂固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的初步研究

采用7种树脂对α-乙酰乳酸脱羧酶进行固定化,并将固定化酶应用于啤酒发酵实验,从中筛选出降低发酵液中双乙酰能力较强的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D314FD作为固定化的载体。通过单因素和正交实验确定固定化ALDC的最优条件为:每克树脂加入1.25mL原酶液,吸附时间10h,吸附pH7.5,吸附温度15℃,在此条件下固定化效率可达44%。发酵实验亦表明,固定化ALDC可以显著降低发酵液中双乙酰的含量,降低率达40%以上。     

枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及性质

对枯草芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶采用硫酸铵分级沉淀、热处理、DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析进行纯化,经SDS-PAGE鉴定为单蛋白带,酶蛋白比活提高了15.5,回收率为20.3%。对酶学性质分析表明,分子量约为32kDa的单亚基酶;对热(40℃)敏感;最适pH值和稳定pH值均为7;以α-乙酰乳酸为底物时,α-乙酰乳酸脱羧酶的动力参数Km为232.6mmol/L和Vmax为7.1μmol/(μg·min);Mg2+,Mn2+,Zn2+,Fe2+,Cu2+等二价金属离子能激活酶的活性;加入EDTA后,酶活降低,用原子吸收分光光度计检测,发现只含有Zn2+(含量97.6nmol/mg蛋白)。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的粗酶提取优化研究

从地衣芽孢杆菌BL1中提取α-乙酰乳酸脱羧酶，为提高酶的得率，探讨了破壁方法、硫酸铵盐析提取粗酶等的条件。结果表明：菌体用超声波破壁、在频率25KHz下每次辐射2s，间隔2s，总辐射时间4．6s，输出功率500W，细胞浓度2％，破碎产酶量最高，60％～70％饱和度硫酸铵盐析提取粗酶效果较好。     

α-乙酰乳酸脱羧酶稳定剂的筛选

选用大分子有机物、醇类、无机盐等十余种物质为备选稳定剂,分别进行单因子的不同浓度实验,考察不同物质对乙酰乳酸脱羧酶热稳定性的影响。在此基础上筛选具备高效保护作用的因子,再通过正交实验设计复合因子实验,选取最佳组合,然后再利用最佳组合在不同溶剂系统中进行了酶的储存实验,在储存实验的四种溶剂系统中,其中一种不论在常温下或者冰箱条件下都显示出很好的保护作用。     

α-乙酰乳酸脱羧酶稳定剂的筛选

选用大分子有机物、醇类、无机盐等十余种物质为备选稳定剂,分别进行单因子的不同浓度实验,考察不同物质对乙酰乳酸脱羧酶热稳定性的影响。在此基础上筛选具备高效保护作用的因子,再通过正交实验设计复合因子实验,选取最佳组合,然后再利用最佳组合在不同溶剂系统中进行了酶的储存实验,在储存实验的四种溶剂系统中,其中一种不论在常温下或者冰箱条件下都显示出很好的保护作用。      

α-乙酰乳酸脱羧酶基因在酿酒酵母中稳定表达的策略

综述了宿主细胞的表达特点，外源基因的来源，表达载体和转化方法对α-乙酰乳酸脱羧酶基因在酿酒酵母中稳定表达的影响，并在此基础上提出了相应的策略。