MsiR高可溶性蛋白突变株的筛选

外源蛋白在表达宿主中的可溶性是影响其应用的关键因素。采用mCherry 报告基因,构建MsiR-mCherry融合蛋白,通过测定荧光值定性定量的测定MsiR蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。随后,利用易错聚合酶链反应（Errorprone-PCR）和致突变菌株（XL1-Red）两种方式构建了msiR-mCherry 基因突变文库,经筛选得到了4株在大肠杆菌中以37 ℃作为诱导温度下可溶性明显提高的蛋白突变体。     

组成型纤维素酶高产菌的筛选及产酶条件优化

从富含植物纤维素的土样中筛选得到一株组成型纤维素酶产生茵LC-9,结合Biolog微生物自动鉴定仪和16S rDNA序列分析,该茵株鉴定为Bacillus subtilis.通过发酵与产酶条件优化,确定了菌株最佳培养条件.在优化条件下发酵35 h后,内切纤维素酶活力可达1 301.4U/ml,,木聚糖酶活力可达289.2 U/mL.该菌株产酶发酵周期短,无需纤维素类物质的诱导,推测为一株新型组成型多功能纤维素酶高产菌株.     

酒精酵母的紫外诱变呼吸缺陷型突变株的筛选

通过对酒精酵母进行紫外诱变及 2 ,3,5 -氯化三苯基四氮唑 (TTC)鉴别性培养 ,获得了 2 6株呈白色菌落表型的呼吸缺陷型突变株。诱变条件为 :紫外 (灯管功率 15 W)波长 2 5 3. 7nm ,照射距离 2 1cm ,照射时间为 1m in、 3min分别获得突变菌株 15和 11株     

何谓温度敏感型突变株？利用温度敏感型突变株进行谷氨酸发酵时，影响产酸的关键是什么？

在正常培养温度下，菌体生长良好，当温度提高到一定程度时（如30℃提高到40％），停止生长，而只产酸，具有这种特性的菌株就称为温度敏感型突变株。谷氨酸温度敏感型突变株的位置是发生在决定与谷氨酸分泌有密切关系的细胞膜结构的基因上，发生碱基的转换或颠换，一个碱基为另一个碱基所置换，这样为基因所指导释出的酶，在高温下失活，导致细胞膜某些结构的改变。     

整蛋白型肠内营养制剂的研制

根据创伤代谢的特点,以牛奶中的酪蛋白为氮源,糊精为碳水化合物来源,添加一定比例的中链甘油三酯(MCT)和玉米胚芽油,研制符合创伤及其恢复者的整蛋白型肠内营养制剂。     

组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶的重组粪肠球菌的构建

该研究以高效组成型启动子P10替换pSIP401-gtamyhds中诱导型启动子,构建重组载体pSIP401Z-gtamyhds,并以其为基础框架,分别导入粪肠球菌（Enterococcus faecalis）来源的8种信号肽（s1～s8）,采用电转化法将信号肽筛选载体转入具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27,构建组成型分泌表达嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的重组粪肠球菌。以发酵上清液中α-淀粉酶活性为评价指标,对8种信号肽进行筛选,并对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy进行分离纯化和酶学性质研究。结果表明,信号肽s7对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy的分泌效率最高,发酵上清液中α-淀粉酶活性达到310 U/mL。重组Gt-amy的最适反应pH值为5.0,在pH 4.0～8.0范围内具有较好的稳定性,最适反应温度为80 ℃,于80 ℃的半衰期为3 h,在40 ℃条件下反应3 h,对玉米淀粉的降解率可达55.8%。     

双重营养缺陷型（Met^-，Ile^-）黄色短杆菌突变株SFL8-3的选育

以一株黄色短杆菌SFL-8为出发茵株，经紫外线、盐酸羟胺和硫酸二乙酯等多次诱变处理，单菌落分离、摇瓶初筛和摇瓶复筛，获得了一株蛋氨酸和异亮氨酸双重缺陷型突变株SFL8-3(Met^-，Ile^-)，摇瓶发酵L-亮氨酸产量达18．98g／L。     

凝固型双蛋白酸奶的发酵配方优化

以豆粉、全脂奶粉为主要原料,研制动植物蛋白相结合的凝固型双蛋白酸奶。在单因素试验的基础上采用正交试验方法,以感官评价为主要评价指标优化双蛋白酸奶的发酵配方参数,通过测定酸奶理化指标和微生物指标,最终确定双蛋白酸奶的最佳发酵配方:菌种添加量0.004%,豆乳蛋白与牛乳蛋白比1︰1,蔗糖量6%,稳定剂0.03%。在此最优配方下,酸奶口感细腻,酸甜适中,感官评价最好,乳酸菌数达3.6×10⁸CFU/mL,具有商品化开发的价值。     

浓缩组织蛋白康泰31CT在颗粒型肉制品中应用的研究

康泰3lCT是索宝公司生产的浓缩组织蛋白,它与一般的大豆组织蛋白不同,一般的大豆组织蛋白的蛋白质含量为50%,康泰31CT蛋白质含量大于67%,并且为红色,有清淡的风味.1份康泰(contex)31CT能够保住2.5～3份水,在热水与冷水中附水速度均很快,并且蒸煮后仍能保住水并具有很好的组织结构,红色还能保持不褪色,该红色为赤藓红,国家卫生部于2007年7月允许加入肉制品中.所以在香肠与罐头产品中,我们可以用附水的康泰31CT替代部分猪瘦肉,可以提高肉制品的质量并且降低成本.应用康泰31CT在颗粒型肠类产品中是一个很好的选择.     

马铃薯块茎中多酚氧化酶互作蛋白的筛选

多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)是导致马铃薯酶促褐变的关键酶，探究马铃薯酶促褐变过程中与PPO存在互作的蛋白质至关重要。通过采取构建StPOT32原核表达载体，利用His标签纯化树脂进行纯化并获得纯度较高的StPOT32蛋白的方法，以纯化得到的马铃薯StPOT32为抗原制备了抗体，然后通过免疫沉淀-质谱联用技术分析了可能与PPO存在相互作用的蛋白质。质谱结果表明，大量蛋白被StPOT32抗体富集，共富集到2种蛋白酶、60种蛋白酶抑制子、18种氧化应激蛋白、28种防御蛋白作为与PPO互作的候选蛋白。这些候选蛋白中包括已被证明可以影响PPO活性的蛋白，以及与PPO存在相似生理功能的蛋白。该文章初步探究与PPO可能存在互相作用的蛋白，为阐明PPO活性的调节机制提供一定的理论基础。     

花色苷对LO2细胞核受体报告基因的影响

研究花色苷矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-D-glucoside,C3G)及其苷元矢车菊素(cyanidin)对代谢综合征紧密相关的一系列核受体转录活性的影响。将维甲酸X受体(RXR)、孕烷X受体(PXR)、雌激素受体(ER)、法尼醇X受体(FXR)、肝脏X受体α和β(LXRα,LXRβ)、3种过氧化物酶体增殖剂激活受体(PPARα、PPARγ、PPARδ)等核受体-萤光素酶报告基因和绿色荧光蛋白基因内参转染至人肝细胞LO2建立模型,分别以1、10、100μmol/L的Cyanidin或C3G干预培养细胞24h,筛选可被Cyanidin或C3G激活的核受体类型。结果显示,与溶剂对照组(0.1%DMSO)相比,3种浓度的Cyanidin对RXR都有抑制作用,但是仅在100μmol/L浓度条件下对PXR有较弱的激活作用(1.42±0.19,P<0.05);C3G则对PXR、ER、LXRα、LXRβ、PPARγ、PPARδ等多种核受体有激活作用(P<0.05),其中对PXR、LXRα、LXRβ、PPARγ等核受体的激活倍数超过对照组50%以上。实验结果提示,花色苷改善代谢综合征的作...     

High copy number mutants derived from Corynebacterium glutamicum cryptic plasmid pAM330 and copy number control

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Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶突变文库热稳定性提高突变体的筛选及鉴定

利用易错聚合酶链式反应技术引入随机诱变,构建一个Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶突变体库。经过筛选,获得一个芳香基硫酸酯酶热稳定性提高的突变株4-153。序列分析表明,该突变体有2个氨基酸替换,包括D84A和H260L。以对硝基苯硫酸钾为底物,突变酶4-153(M4-153)的最适反应温度为55℃,在45、50、55、60℃处理30 min后,M4-153分别保留85%、83%、48%和13%的残留酶活力。野生型酶(WT)在45、50、55、60℃处理30 min后,分别保留79%、68%、21%和1%的残留酶活力。M4-153与WT相比具有更好的热稳定性。M4-153的最适反应pH值为8.0,在pH 5.0~9.0范围内保持稳定。EDTA对突变酶的抑制作用表明,金属离子在突变酶的催化过程中起重要作用。M4-153对一些洗涤剂,包括Triton X-100、Tween 20、Tween 80和Chaps,有好的耐受性。M4-153对龙须菜粗多糖硫酸基团的脱硫率为79.5%。     

菜热休克蛋白基因HSP81.1启动子的克隆与功能验证

本研究从甘蓝型油菜（Brassica napus）基因组中扩增获得热休克蛋白基因启动子,并将其克隆至双元载体pBI121的GUS报告基因上游,构成双元表达载体pBI121 HSP GUS。通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导法转化烟草后获得转基因植株。对T1转基因植株研究表明,外源基因在42℃处理1h后开始表达,且即使用同样条件诱导,GUS基因的表达率和表达量在不同生长时期也有差异。在第50d左右的苗期,GUS基因的表达率和表达量高,但随植株老化而逐渐下降。研究显示,利用油菜的热休克蛋白启动子可以达到通过温度控制烟草基因表达的目的。     

用于文库筛选的植物瞬时表达载体的构建

利用绿色荧光蛋白基因可以指示目的基因表达,因此本实验构建了含有稀有酶切位点的植物瞬时表达载体,并且目的基因和绿色荧光蛋白基因有各自独立的表达框架。目前在大果型的离体番茄果实上尚未有进行EGFP 的瞬时表达研究,本实验利用农杆菌介导的瞬时表达技术在烟草叶片和大果型离体番茄果实上瞬时表达了绿色荧光蛋白,验证了载体进行瞬时表达的可行性。