链霉菌Streptomyces sp. FJS31-2次级代谢产物UK-78623的分离鉴定及抑菌活性研究

该研究对卤化II型聚酮类抗生素zunyimycins产生菌链霉菌（Streptomyces sp.）FJS31-2的次级代谢产物进行挖掘。次级代谢产物经乙酸乙酯萃取浓缩后,依次采用硅胶柱层析法、薄层层析（TLC）法、高效液相色谱（HPLC）法等方法进行分离和纯化,通过质谱（MS）法和核磁共振（NMR）等分析单体化合物的结构,并采用滤纸片法对其抗菌活性进行测试。结果表明,初次从该菌发酵物中分离得到多环内酯类化合物UK-78623,其对小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）具有明显抑制作用,其抑菌圈直径为25.2 mm。     

赤水丹霞山土壤来源抗菌活性链霉菌的分离及放线菌素产生链霉菌Streptomyces sp.CSDX001发酵产物分析

分离、鉴定赤水丹霞地区土壤来源的抗临床耐药菌活性的链霉菌。采集赤水丹霞山区不同海拔的土样并利用多种培养基分离、纯化菌株。热酚法提取菌株基因组DNA,PCR扩增16S r RNA基因并测序后在线比对以确定其系统分类学地位。利用多种测试菌测试抗菌活性,通过HPLC和LC/MS分析菌株发酵抽提物并与数据库比较。分离得到菌株600株,其中59株链霉菌中有41株具有1种以上的抗测试菌活性。Streptomycetes sp.CSDX001具有抗耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、抗耐万古霉素金黄色葡萄球菌、抗多药耐药鲍曼不动杆菌、抗枯草芽孢杆菌、抗藤黄微球菌、抗白色念球菌的活性,具有抗多种微生物的活性和产生多种新结构次级代谢产物潜力,可能是抗微生物新天然活性产物的重要来源。     

一株酯化酶霉菌的分离、鉴定及代谢产物特征

研究不同培养条件下产酯化酶霉菌的代谢产物特征。从浓香型大曲中分离得到一株产酯化酶霉菌,用Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,改变培养温度、发酵时间、碳源物质等培养条件,用乙醇对发酵液进行萃取,并用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对其进行鉴定分析。结果表明,该分离菌株为黄曲霉(Aspergillus flavus)。随温度的升高,其代谢产物分子量逐渐加大,高级醇的合成逐渐增多,碳链逐渐加长;随时间的延长代谢产物的合成大致呈醇-酸-酯的变化规律,碳链短的产物先于碳链长的产物出现;分别以淀粉、蔗糖、麸皮为碳源物质时,正丁醇、异戊醇是其共有的代谢产物,以蔗糖为碳源时合成的代谢产物多为一些短链的醇、酸,以淀粉为碳源时生成了琥珀酸乙酯,以麸皮为碳源时,合成的代谢产物较少。     

中间代谢产物对白色链霉菌ε-聚赖氨酸合成的影响

探讨白色链霉菌ε-聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine,ε-PL)生物合成过程中,中间代谢产物柠檬酸、L-天冬氨酸和L-赖氨酸对ε-PL合成的影响。单因素实验结果表明,在摇瓶发酵开始(0 h)添加柠檬酸至终质量浓度为1.0g/L,培养到12 h分别添加终质量浓度为0.3 g/L的L-天冬氨酸和终质量浓度为1.0 g/L的L-赖氨酸,可分别提高ε-PL产量42.5%、28.7%和44.1%。正交试验显示,只有柠檬酸和L-赖氨酸对ε-PL合成影响显著(P0.05),而L-天冬氨酸影响不显著;在培养基中添加1.0 g/L的柠檬酸和L-赖氨酸ε-PL产量可提高60.1%。在破碎的无细胞体系中,只有添加L-赖氨酸可以检测到ε-PL的生成,进一步证实了L-赖氨酸是ε-PL合成的直接前体。因此,通过添加合适的中间代谢产物,可以有效提高ε-PL产量。     

一株放线菌的分离鉴定及其代谢产物研究

利用高氏平板从酱香型白酒生产环境土壤中筛选分离得到1株放线菌NS01,利用形态学、16SrRNA序列同源性鉴定目的菌株为链霉菌属(Streptomyces sp.)。分别采用液态与固态培养基培养目的菌种,通过顶空固相微萃取技术进行萃取,再利用气相色谱质谱联用仪分析代谢产物,结果发现该菌代谢大量的萜烯类物质。代谢产物中的倍半萜烯类物质:2-甲基异莰醇、土臭素具有土臭味和霉味,该类物质可能与酱香型白酒酿造过程中出现霉味有关。     

一株片栗内生真菌的分离鉴定及其次级代谢产物对癌细胞的抑制作用

本文采用组织分离法从片栗叶部分离获得一株内生真菌,通过28s r DNA序列测定和系统发育树分析对此菌株进行了鉴定。用PD培养基和YM培养基分别发酵培养此菌株,其次级代谢产物通过高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)进行了分析。在YM培养基条件下对此菌株大量培养,利用硅胶层析等手段对其次级代谢产物进行分离纯化,采用MTT法测定了次级代谢产物对癌细胞的毒性。结果表明,从片栗叶部分离得到的内生真菌鉴定为Eupenicillium sp.NF2_PD013。经HPLC和MS分析表明,此内生真菌的次级代谢产物在YM培养基条件下比在PD培养基条件下丰富且产量大。从YM培养基条件下的次级代谢产物中分离得到4个化合物,分别为geodin,dihydrogeodin,3’-chlorotrypacidin和monochlorosulochrin,4个化合物均含有氯元素。化合物geodin和3’-chlorotrypacidin对乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞Hep G2都有明显的增殖抑制作用。     

甜酱1号酵母菌的分离,鉴定及代谢产物的分析

我国的酱类酿造历史悠久,风味独特,素有“东方特产”之美称。其中甜面酱的酿造又别具一格,其产品色泽鲜艳、酱香酯香浓郁、鲜甜适口、粘稠适度,不仅是广大劳动人民日常生活的必需调味品,而且也是酱制酱菜的基     

氨基酸添加对吸水链霉菌5008发酵过程中有效霉素A合成的影响

氨基糖苷类抗生素的生物合成与氨基酸代谢密切相关,通过在吸水链霉菌5008发酵过程中分别添加9种不同种类氨基酸,研究了氨基酸对有效霉素A生物合成的影响。结果表明,在这9种氨基酸中,有7种氨基酸对有效霉素A产量有提升作用。其中异亮氨酸对产量提升幅度最大,与对照组相比,可以将产量提高约49%(16.76 g/L);同时发现甲硫氨酸对有效霉素A产量有着明显的抑制作用,与对照相比,将产量降低约25%(8.47 g/L);随后对添加氨基酸发酵过程中蛋白积累量,糖利用量以及有效霉素A前体合成相关碳代谢途径的酶活力情况进行检测,结果显示氨基酸能够影响碳代谢途径上关键酶的活性,导致碳代谢流向改变,从而促进有效霉素A前体的积累与有效霉素A的生物合成。     

藿香内生真菌次级代谢产物抗菌活性研究

【目的】分离纯化藿香花中内生真菌,测定内生真菌次级代谢产物抑菌活性。方法采用组织分离法从藿香花中分离内生真菌,根据显微形态结构进行初步鉴定;用微量肉汤稀释法测定藿香内生真菌次级代谢产物的最低抑菌浓度(MIC)。结果从藿香茎中共分离得到13株内生真菌,鉴定出12株,分别属于丝核菌属、黑孢霉属、长蠕孢菌属、短蠕孢菌属、丝孢菌属、链格孢菌、镰刀菌属、头孢霉属。大多数藿香内生真菌次级代谢产物的乙酸乙酯部位具有抗菌活性。菌株H-2的乙酸乙酯部位抑菌活性最强,对六种供试菌的MIC均为250μg/mL。菌株H-9的乙酸乙酯部位对无乳链球菌的抑制活性最好,为31.25μg/mL,对其他供试菌在500μg/mL能够表现出抑制活性。结论藿香内生真菌的次级代谢产物具有抑菌活性,为进一步的活性指导分离提供了理论依据。     

草本龙芽中黄酮的分离及其结构鉴定

从草本龙芽中提取、分离黄酮类化合物。利用乙醇萃取、大孔树脂精制、聚酰胺柱层析分离纯化得到一种黄酮类化合物,结合颜色反应、紫外吸收光谱（UV）、红外光谱（IR）、核磁共振氢谱（1H-NMR）、核磁共振碳谱（13C-NMR）鉴定其结构。从草本龙芽中提取得到这种黄酮类化合物鉴定为3,5,7,3’,4’-五羟基黄酮醇,即槲皮素。      

产磷脂酶D链霉菌发酵条件优化

以链霉菌为发酵菌株,研究了10 L发酵罐中不同培养条件对链霉菌发酵产生磷脂酶D和链霉菌生长的影响。结果表明,10 L发酵罐中最佳发酵条件为:接种量12%,种龄17 h,温度28℃,通气量0.8 L/h,转速600 r/min。在最佳发酵条件下,酶活可达到3.48 U/m L。     

链霉菌9-1-1产几丁质酶的发酵条件研究

从烟草根际土样中分离、筛选得到1株几丁质酶活性比较高的链霉菌9-1-1,为评价该菌株利用价值,对其发酵条件(碳源、氮源、初始pH、表面活性剂及发酵时间)进行了研究.结果表明:该菌株的最佳发酵条件以1%胶体几丁质为碳源,发酵液初始pH值为6.5,以1%蛋白胨为氮源,0.1%吐温80作为表面活性剂,发酵时间为96 h,接种量为1%,最高酶活达到56 U/mL.     

8株窖泥链霉菌对酸、乙醇的适应性研究

对分离自窖泥的8株放线菌进行鉴定,并考察其对窖泥环境中pH值、乙醇的耐受性.采用ISP2液体培养基在pH值2.0～3.5、乙醇浓度3%vol ～6%vol条件下培养链霉菌菌株,结果显示,分属于链霉菌属的8个种的8株放线菌均不能耐受pH值2.0及6%vol的乙醇浓度,均能耐受pH值3.5及3%vol的乙醇浓度,5株链霉菌在pH值3.0时可以生长,2株链霉菌可耐受5%vol乙醇,说明分离自窖泥的多数链霉菌对窖泥环境的适应能力较好,但不同种链霉菌的适应能力存在差异,窖泥环境在长期生产过程中对链霉菌属菌株具有一定的选择驯化作用.     

1株产类胡萝卜素盐盒菌的分离鉴定及培养条件优化

对分离自运城盐湖黑泥中的一株产类胡萝卜素嗜盐菌G14进行分离鉴定,经菌落形态观察、生理生化特性及16S rRNA基因 序列分析,确定该菌株隶属于盐盒菌属（Haloarcula sp.）。 通过单因素与正交试验对菌株G14的培养条件进行优化。 结果表明,菌株G14 最佳培养条件为NaCl质量浓度0.23 g/mL,初始pH值为7.0,43 ℃光照培养。 在此优化条件下,培养的菌液OD600 nm值达2.24,类胡萝卜素 产量为0.65 mg/L。     

高产林可霉素链霉菌的筛选及发酵条件的优化

采用平板划线,摇瓶复筛等方法从福清近海海域泥土中分离筛选到一株林可霉素产率较高的链霉菌株6204;采用单因素试验和正交设计试验,从葡萄糖添加量、磷酸二氢钾条件两及金属离子对菌株6204产林可霉素影响,并对其发酵条件进行优化。结果表明,最适的发酵条件为葡萄糖添加量10.0%,镁离子质量浓度0.10 g/L,磷酸二氢钾添加量0.020%,在此优化发酵条件下,菌株6204产林可霉素的含量可达3 907.738 μg/mL,与优化前相比较,林可霉素的含量提高了1 823.082 μg/mL。     

红油豆瓣酱中产气芽孢杆菌的分离、鉴定与抑制研究

在储藏过程中,红油豆瓣酱中的微生物会利用剩余营养物质二次发酵产生气体导致胀罐,影响产品品质。该实验对产气胀罐的红油豆瓣酱中微生物进行分离、鉴定,共分离得到两株产气菌分别为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）;而后利用复配防腐剂对产气菌株PX012进行抑制,并通过正交试验确定最佳的防腐剂复配配方为Nisin 0.2‰,尼泊金复合酯0.2‰,双乙酸钠0.6‰,富马酸3.0‰,可有效抑制产气微生物的生长,保证产品质量。     

番木瓜叶中生物碱的分离与结构鉴定

干燥的番木瓜叶用含1%HCl的90%乙醇溶液于常温下提取5次,浓缩、过滤、石油醚脱脂,NH3·H2O调pH至8.0~9.0,三氯甲烷萃取,得生物碱粗提物。采用硅胶柱柱层析对粗体物进一步进行分离纯化,得到番木瓜碱,并通过IR、MS和NRM对其进行了结构鉴定。