柚皮素通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭、诱导凋亡作用的研究

目的:探究柚皮素（NAR）通过PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的机制。方法:体外培养卵巢癌细胞,并分为空白组、低剂量柚皮素组、中剂量柚皮素组和高剂量柚皮素组;使用柚皮素预处理后,检测NAR对卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响情况;检测细胞侵袭迁移及凋亡相关蛋白和PI3K/AKT/NF-κB通路相关蛋白的表达情况。结果:使用柚皮素处理后,各组卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭受到显著抑制,凋亡受到显著促进,且对柚皮素呈剂量依赖性。相比空白组,使用柚皮素各组PCNA、Bcl-2、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax、Caspase-3、E-cadherin、PI3K蛋白表达水平及AKT、p65磷酸化水平显著升高（P<0.01）,且随着柚皮素使用剂量的增加呈剂量依赖性,总AKT蛋白表达无显著变化（P>0.05）。结论:NAR可能通过抑制EMT及PI3K/AKT/NF-κB通路抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,并促进卵巢癌细胞的凋亡,在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的: 研究中华眼镜蛇毒组分C Ⅱ (FC ⅡNNAV) 对多药耐药白血病细胞K562/A02 的抑制作用及机制。方法: 应用MTT 法观察FC ⅡNNAV 体外对K562 和K562/A02 的毒性作用, 流式细胞仪法观察FC ⅡNNAV 体外对K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达的影响, 比色法检测Caspase-3 活性变化。结果: FC ⅡNNAV 对耐药K562/A02 及敏感K562 细胞均有抑制作用, IC50 分别为0.75±0.01 μg·ml^-1 和0.67±0.11 μg·ml^-1。流式细胞仪检测发现FC ⅡNNAV 能使K562/A02 细胞的P-gp, Bcl-2 蛋白表达明显下调;Caspase-3 活性明显增强。结论: FC ⅡNNAV 对细胞K562/A02 及细胞K562 均有较强的抑制作用, 且抑制作用与剂量呈正相关, FC ⅡNNAV 可能通过抑制K562/A02 细胞P-gp, Bcl-2 蛋白表达, 激活Caspase-3 活性而诱导K562/A02 细胞凋亡。     

罗格列酮对人肥大细胞株HMC-1细胞迁移的影响及机制研究

目的: 观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ (PPARγ) 激动剂罗格列酮（RG）对干细胞因子（SCF）诱导的人肥大细胞迁移的影响,并探讨其机制。方法: 体外培养人肥大细胞株（HMC-1）,逆转录PCR方法检测HMC-1细胞上PPARγ的表达。MTT法和流式细胞术检测RG和GW9662对HMC-1细胞的细胞毒性。将HMC-1细胞分为空白对照组、SCF 组、SCF+1 μmol/L RG组、SCF+3 μmol/L RG组、SCF+10 μmol/L RG组,采用Transwell Chamber检测细胞迁移。另取HMC-1细胞分为空白对照组、SCF组、SCF+10 μmol/L RG组、SCF+10 μmol/L RG+0.1 μmol/L GW9662组、SCF+10 μmol/L RG+0.3 μmol/L GW9662组、SCF+10 μmol/L RG+1 μmol/L GW9662组,采用Transwell Chamber检测细胞迁移。结果: HMC-1细胞株表达PPARγ,RG和GW9662对HMC-1细胞没有毒性。RG呈浓度依赖性抑制SCF诱导的HMC-1细胞的迁移。PPARγ阻断剂GW9662（0.3 μmol/L及1 μmol/L）可以阻断RG对HMC-1细胞迁移的抑制作用。结论: PPARγ激动剂罗格列酮通过PPARγ途径抑制SCF诱导的HMC-1细胞的迁移。     

NF-κB介导的连翘酯苷B对宫颈癌细胞增殖活性的抑制作用

目的:研究连翘酯苷B是否通过抑制NF-κB调控p21/Cyclin E/CDK2信号通路,对宫颈癌细胞（HeLa）增殖产生影响。方法:在培养的HeLa细胞,不同浓度（1,2,4 μmol/L）连翘酯苷B处理24、48、72 h后采用MTT实验观察细胞活力变化。观察不同浓度的连翘酯苷B对肿瘤细胞克隆形成的影响。连翘酯苷B处理细胞后,观察转录因子NF-κB（p-p65、p65）蛋白调控变化,并检测蛋白p21、以及细胞周期蛋白Cyclin E、CDK2的表达变化。结果:连翘酯苷B浓度依赖性抑制肿瘤细胞克隆形成,且对HeLa细胞增殖效应的抑制呈时间及浓度依赖性。连翘酯苷B浓度依赖性上调p21蛋白水平,并且下调p-p65、Cyclin E与CDK2水平。 结论:连翘酯苷B通过抑制转录因子NF-κB,影响p21/Cyclin E/ CDK2信号通路抑制了HeLa细胞增殖。     

姜黄素通过调控组蛋白乙酰化修饰上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中MDR1表达

目的:从组蛋白乙酰化修饰角度探讨姜黄素上调乳腺癌MCF-7和MCF-7/DOX细胞中多药耐药基因1（multidrug resistance protein 1,MDR1）表达水平的作用机制。方法: CCK-8（Cell Counting Kit-8）法观察姜黄素对MCF-7和MCF-7/DOX细胞生长增殖以及多柔比星敏感性的影响;Real time PCR和Western blot方法检测姜黄素处理前后两种细胞中MDR1 mRNA和蛋白质表达水平的变化;染色质免疫共沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay,CHIP）检测姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4乙酰化水平的影响。结果: 不同浓度姜黄素处理72 h对MCF-7和MCF-7/DOX细胞的生长增殖有显著抑制作用,其IC50值分别为22.03 μmol/L和27.46 μmol/L;10 μmol/L姜黄素处理72 h可显著提高两种细胞多柔比星敏感性,多柔比星IC50值分别下降了57.14%和54.52%（P<0.05）;姜黄素处理MCF-7和MCF-7/DOX细胞后,MDR1在mRNA水平分别上调(32.90±0.96）和（5.70±0.55）倍（P<0.05）,在蛋白质水平分别上调（2.26±0.18）与（2.90±0.21）倍（P<0.05）;CHIP结果显示姜黄素对两种细胞中MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平均有显著上调作用。结论:姜黄素在增强MCF-7和MCF-7/DOX细胞多柔比星敏感性的同时,可通过调控MDR1启动子区相关组蛋白H3、H4的乙酰化水平而上调MDR1的表达。     

中药胡椒碱在终板软骨细胞退变中的保护作用的研究

目的: 探讨中药胡椒碱对椎间盘终板软骨细胞退变的保护作用。方法: 分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞加力退变模型。设空白对照组 (未加力细胞)、加力组(10％间歇性循环牵张力,10％ICMT,0.5 Hz,8 h/d,加力3 d)及加力加药物组（加力组中加入中药胡椒碱40 μmol/L）。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型。实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,II型胶原,蛋白聚糖,MMP13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65表达变化。结果: 细胞体外加力后表型丢失,甲苯胺蓝染色可见细胞外基质减少,加力加药组细胞外基质未见明显减少。加力组细胞（ICMT）较空白对照组细胞(NC组)SOX-9(ICMT/NC=0.22, P<0.01)、蛋白聚糖(ICMT/NC=0.15, P<0.01)、II型胶原(ICMT/NC =0.18, P<0.01)表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,NF-κB信号通路相关基因MMP13(ICMT/NC=1.68, P<0.05)表达明显上升。40 μmol/L胡椒碱处理的加力加药组较加力组细胞核内p-P65减少, NF-κB信号通路相关基因MMP13(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT=0.70, P<0.05)表达降低,40 μmol/L胡椒碱处理的加药加力组中II型胶原(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT =1.93, P<0.05)、蛋白聚糖(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT=1.78, P<0.05)、SOX-9(40 μmol/L胡椒碱/ ICMT =1.70, P<0.05)等基因表达明显回升。结论: 中药胡椒碱可以抑制椎间盘终板软骨细胞的退变发生,从而起到对椎间盘及终板软骨的保护作用。     

硫化氢、同型半胱氨酸和环格列酮对胱硫醚-γ-裂解酶基因及蛋白表达的影响

目的: 探讨硫化氢、同型半胱氨酸及环格列酮对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）内胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）基因及其蛋白表达的影响。方法: 应用不同浓度的硫氢化钠(300、1 000 μmol/L) 、同型半胱氨酸(10、100、1 000 μmol/L)及环格列酮(10、100 μmol/L)作用于HUVEC,48 h 后提取细胞总RNA,应用荧光定量PCR(realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR)及蛋白质印迹技术（Western blot）检测CSE基因和蛋白表达的变化。结果: 硫氢化钠在生理浓度(300 μmol/L) 时可增加HUVEC CSE基因及蛋白的表达( P< 0.05)。高浓度同型半胱氨酸引起 HUVEC CSE基因及蛋白表达减弱(P<0.05)。环格列酮适宜浓度(10 μmol/L)时也可增加 HUVEC CSE 基因及蛋白的表达(P<0.05) 。结论: 高浓度同型半胱氨酸对细胞水平上CSE的转录与翻译有抑制作用。从基因水平和蛋白质水平检测发现硫化氢和环格列酮可以调节CSE的转录与翻译,并可逆转高浓度同型半胱氨酸对CSE的作用。     

β-asarone对Aβ1-42激活的ACM所致PC12细胞损伤的保护作用研究

目的：探讨不同浓度β-淀粉样蛋白（Aβ1-42）激活的星形胶质细胞条件培养液（ACM）对PC12细胞存活率及脑源性神经营养因子（BDNF）、乙酰胆碱酯酶（AChE）蛋白表达的影响,以及β-细辛醚（β-asarone）的保护作用。方法：首先,将对数生长期的PC12细胞随机分为正常对照组、ACM（Aβ1-42 3.3 μmol/L）组、ACM（Aβ1-42 10 μmol/L）组、ACM（Aβ1-42 30 μmol/L）组,分别采用实时无标记动态细胞分析技术（Real Time Cell Analysis, RTCA）和MTT法检测各组PC12细胞的存活率,Western blot检测PC12细胞BDNF、AChE蛋白的表达;其次,将对数生长期的PC12细胞随机分为正常对照组、ACM（Aβ1-42 10 μmol/L）组、β-asarone（18.5、55.5、166.7 μg/mL）组,RTCA法检测PC12细胞存活率的改变,Western blot检测PC12细胞BDNF、AChE蛋白表达的变化。结果：ACM作用24 h,各组PC12细胞存活率无统计学差异（P>0.05）,ACM作用36 h,ACM（Aβ1-42 10 μmol/L）组、ACM（Aβ1-42 30 μmol/L）组PC12细胞存活率显著降低(P<0.01);BDNF、AChE蛋白表达随Aβ1-42 浓度增加显著升高(P<0.05或P<0.01);β-asarone(18.5、55.5、166.7 μg/mL)能显著提高PC12细胞的存活率,β-asarone(55.5、166.7 μg/mL)组AChE表达相比于模型组显著下降(P<0.05或P<0.01),β-asarone(55.5 μg/mL)组与模型组比较BDNF表达增加(P<0.05)。结论：β-asarone能抑制AChE的上调,对BDNF的表达有促进作用,提示β-asarone对神经元细胞有一定的保护作用。     

氟西汀对人结膜上皮细胞TLR2/NF-κB信号通路和炎性因子的影响

目的:观察氟西汀对人结膜上皮细胞Toll样受体2（toll-like receptor 2,TLR2）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路和炎性因子的影响,探讨五羟色胺再摄取抑制剂（selective serotonin reuptake inhibitor,SSRI）引起干眼症的潜在机制。方法:将结膜上皮细胞分为空白对照组和药物组,药物组采用氟西汀进行干预。采用CCK-8法明确氟西汀对人结膜上皮细胞半数抑制率作为后续实验浓度。采用RT-PCR法检测TLR2、NF-κB、白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-2、IL-6和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α的mRNA水平;免疫荧光法和Western blot法检测TLR2和NF-κB的蛋白表达水平;ELISA法检测IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平。结果:10-9～10-5mol/L范围内氟西汀对结膜上皮细胞具有增殖抑制作用,且具有浓度依赖性。RT-PCR法检测结果显示,氟西汀组TLR2、NF-κB、IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α mRNA水平均高于空白对照组（P＜0.05）。药物组TLR2和NF-κB的累积光密度（IOD）值明显高于空白对照组（P＜0.05）,提示药物组TLR2和NF-κB蛋白表达量高于空白对照组。Western blot法检测结果显示药物组TLR2和NF-κB的蛋白表达水平均高于空白对照组（P＜0.05）。ELISA检测结果显示药物组IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α蛋白表达水平均高于空白对照组（P＜0.05）。结论:本研究发现氟西汀可能通过激活结膜上皮细胞TLR2/NF-κB信号通路,促进炎症因子水平,这可能是氟西汀所致干眼症潜在的生物学机制。     

夏枯草水提取物对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探讨夏枯草水提取物对血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖作用及对Daxx/PTEN/NF-κB信号通路的影响。方法:培养VSMCs,体外用血管紧张素II （angiotensin II,Ang-II）(1 μmol/L)诱导细胞增殖模型,MTT和BrdU法分别检测夏枯草水提取物不同浓度(10、20、40、80、160 μg/mL)作用24 h后对VSMCs活性和增殖的影响、划痕法观察细胞迁移力,Western blot检测细胞中Daxx、PTEN、NF-κB蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组VSMCs活力及细胞迁移能力明显增强;同时细胞中Daxx、PTEN蛋白表达明显降低,NF-κB蛋白显著上调;与模型组比较,20、40、80 μg/mL夏枯草水提取物成浓度依赖性显著抑制VSMCs活力与细胞迁移能力,以80 μg/mL浓度最显著;同时,夏枯草水提取物处理组细胞Daxx、PTEN蛋白表达明显上调,NF-κB蛋白下调。结论:夏枯草水提取物能显著抑制Ang-II诱导的VSMCs增殖与迁移,其机制可能与Daxx/PTEN/NF-κB信号通路有关。     

夏枯草总三萜对PDGF-BB干预的肝星状细胞中TGF-β1/Smad通路调控作用

目的: 观察夏枯草总三萜（TTP）对血小板衍生因子（PDGF-BB）干预的肝星状细胞（HSC-T6）中TGF-β₁/Smad通路调控以及其抑制HSC增殖的作用。方法: 用不同浓度的TTP（10、30、100、300、1 000 μg/mL）及PI3K抑制剂（LY294002,10 μmol/L）对PDGF-BB刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖;RT-PCR和Western blot法检测HSC-T6中TGF-β₁信号转导通路下游中介分子smad2、smad3、smad7表达。结果: TTP给药组可抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,下调smad2、smad3表达,升高smad7表达。结论: TTP对PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖具有较好的抑制作用,其机制可能与阻断TGF-β₁/Smad信号通路传导有关。     

新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K562 A02 细胞的多药耐药性

目的 研究新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K562/A02 细胞多药耐药性的作用及机制。 方法 在CPUE1 的作用下, 用MTT 法检测长春新碱(vincristine, VCR) 对K562/A02 多药耐药细胞的细胞毒作用的变化, 使用DNA 分析和Annexin-Ⅴ/PI 双染法研究CPUE1 对VCR 诱导K562/A02 细胞凋亡的影响, 流式细胞仪检测CPUE1 对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp) 外排罗丹明123 (rhodamine123, Rh123)的作用。 结果 CPUE1 能明显提高VCR 对K562/A02多药耐药细胞的细胞毒作用以及凋亡诱导作用,10 μmol·L^-1的CPUE1 能使K562/A02 对VCR 的IC₅₀值由60.54 μmol·L^-1 降至4.17 μmol·L^-1。CPUE1还能抑制Rh123 外排从而增加细胞内Rh123 的蓄积浓度。 结论 CPUE1 通过抑制P-gp 的活性逆转K562/A02 细胞的多药耐药性。     

UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中的表达及对紫杉醇化疗耐药的影响

目的: 探讨UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中的表达及对紫杉醇化疗耐药的影响。方法: 采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中UTP23、P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药基因（MDR1）的mRNA表达水平,使用特异性UTP23-siRNA转染上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞,使用RT-PCR和 Western blot法检测转染后UTP23、P-gp、MDR1基因的表达,使用MTT法检测UTP23-siRNA对上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞生长的影响及耐药性。结果: 耐药组UTP23基因mRNA表达水平明显低于敏感组（P<0.05）,耐药组P-gp、MDR1基因mRNA表达水平明显高于敏感组（P<0.05）;转染组与未转染组、阴性对照组相比较,UTP23 mRNA水平明显升高（P<0.05）, 未转染组与阴性对照组相比较,UTP23 mRNA水平和蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）;转染组与未转染组、阴性对照组相比较,P-gp、MDR1 mRNA表达水平明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,未转染组与阴性对照组相比较,P-gp、MDR1 mRNA表达水平无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）; 紫杉醇对UTP23-siRNA转染后上皮性卵巢癌耐药细胞的IC50浓度明显高于未转染组和阴性对照组（P<0.05）。结论: UTP23基因在上皮性卵巢癌紫杉醇耐药细胞中低表达,其可能通过间接调控MDR1及P-gp的表达而参与上皮性卵巢癌紫杉醇细胞对紫杉醇的耐药。     

姜黄素靶向抑制SW480细胞信号通路研究

目的: 探讨姜黄素抑制SW480细胞的作用机制。方法: 应用内盐法（MTS）检测方法观察SW480细胞活性及姜黄素的干预影响;应用Western blot、实时定量PCR研究姜黄素对SW480细胞的信号干预机制,检测上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、β-链蛋白（β-catenin）、T细胞转录因子4（TCF4）基因等表达量。结果: SW480细胞增殖活性在姜黄素干预下被明显抑制,姜黄素对SW480细胞增殖IC50分别为（75.75±3.17） μmol/L（12 h）、（21.15±2.47） μmol/L（24 h）、（18.95±1.75） μmol/L（48 h）、（17.93±1.55） μmol/L（72 h）;姜黄素干预下,SW480细胞内E cadherin、Vimentin明显上调,而β catenin、TCF4明显下调,且呈剂量依赖性。结论: 姜黄素能抑制SW480细胞活性,并通过Wnt/β catenin信号通路发挥靶向抑制作用。     

联合应用化疗药物对三氧化二砷耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的: 探讨化疗药物联合应用对三氧化二砷(As2O3)耐药白血病细胞(K562/AS2)的毒性作用。方法: 细胞毒实验采用MTT 法, 二药合用时细胞毒性作用采用Chou-Talalay 联合指数法分析, 细胞表面P-糖蛋白(P-gp)和细胞内柔红霉素(DNR)浓度测定采用流式细胞术测定。结果: K562/AS2 细胞对三氧化二砷、柔红霉素、鬼臼乙叉苷(VP16)、三尖杉酯碱(H)、米托蒽醌(NVT)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为7.4、2.9、3.8、3.6、2.8 和1.1。K562 细胞和K562/AS2 细胞的细胞表面P-gp 或细胞内任意荧光强度无显著的统计学意义(P >0.05)。As2O3 与DNR、VP16、H 或NVT 联合应用时, 对K562、K562/AS2 和P-gp 表达的白血病细胞(K562/A02)细胞的联合指数均大于1。异搏定与DNR 联合应用时, 对K562 和K562/AS2 细胞的联合指数均大于1, 但是对K562/A02 细胞的联合指数均小于1。结论: K562/AS2 细胞对As2O3、DNR、VP16 和NVT 耐药, 其机制与P-gp 表达无关。异搏定联合应用DNR 可以逆转K562/A02 对DNR 的耐药性, 不能逆转DNR 对As2O3耐药细胞的耐药性。As2O3 与DN、VP16、H 和NVT联合应用时, 对K562、K562/AS2 和K562/A02 细胞的毒性均为拮抗作用。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2 mRNA及蛋白表达水平的影响

目的: 研究中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2(COX-2)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法: 常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷 10 μmol/L 组、柚皮苷 20 μmol/L 组、柚皮苷 40 μmol/L 组、阳性对照组(塞来昔布 80 μmol/L)。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real-time PCR和Western Blot法测定培养48 h后各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果: MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48 h后,Real-time PCR结果显示,与空白对照组(1.094±0.053)比较,10、20 μmol/L 柚皮苷即对SKOV3细胞COX-2 mRNA表达抑制作用(0.828±0.006,0.753±0.011,P<0.05),而 40 μmol/L 柚皮苷则明显下调 COX-2 mRNA的表达(0.412±0.216,P<0.01),与塞来昔布组(0.321±0.017)的抑制程度相近。Western Blot法检测结果显示,与空白对照组(1.7325±0.0826)相比,10 μmol/L 柚皮苷组相对表达量(1.7925±0.0880)虽略有上调,但无统计学差异,20、40 μmol/L 柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达(1.2225±0.0822,1.2725±0.0763,P<0.05),塞来昔布组也明显抑制COX-2蛋白的表达。结论: 柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达。     

胰岛素通过PI3K/AKT及PI3K/ERK通路减轻脂多糖对钠泵α1亚基的抑制

目的:研究胰岛素减轻脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达抑制的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,脂多糖（1 μg/mL）诱导8 h后,再加用胰岛素（100 nmol/L）处理4 h,采用Western blot法检测Na+-K+-ATPase α1亚基表达及AKT、ERK1/2、p70s6k、NEDD4-2总蛋白表达及其磷酸化水平变化。结果:A549细胞在1 μg/mL脂多糖作用下,Na+-K+-ATPase α1亚基蛋白表达显著降低。胰岛素处理可部分解除脂多糖对A549细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制。胰岛素上调Na+-K+-ATPase α1亚基表达是通过改变PI3K/AKT及PI3K/ERK通路中关键蛋白AKT、NEDD4-2、ERK1/2、p70s6k的磷酸化水平来实现的。结论:胰岛素通过调控PI3K/AKT及PI3K/ERK通路部分解除脂多糖对肺泡II型上皮细胞Na+-K+-ATPase α1亚基表达的抑制,这为临床上采用胰岛素干预急性呼吸窘迫综合征提供了初步实验依据。     

CD40调节胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的: 研究CD40L对胰腺癌细胞生物学特性、干性的影响。方法: CCK-8活细胞计数法分析CD40可溶性配体（sCD40L）不同浓度（0、1、2、4 μg/mL）在不同时间对人胰腺癌细胞系panc02生长增殖的影响,AnnexinV/PI双染法检测凋亡;细胞划痕实验检测迁移的改变。Q-PCR检测4 μg/mL sCD40L处理panc02 48 h后c-Myc、OCT-4、Sox-2水平的改变。建立Balb/c裸鼠胰腺癌荷瘤模型,随机分为2组,对照组（生理盐水）和sCD40L（10 mg/kg）组,分别腹腔注射sCD40L 10 mg/kg以及等体积生理盐水,每天注射3次,游标卡尺测量0、7、14、21、28 d时肿瘤体积。结果: 与对照组比较,浓度为1、2、4 μg/mL的sCD40L处理panc02 96 h时可显著抑制panc02的增殖（P＜0.01）,并促进panc02的凋亡（P＜0.01）,并呈剂量依赖性地抑制panc02的迁移能力（P＜0.01）;sCD40L 4 μg/mL组可明显抑制panc02细胞的c-Myc、OCT-4、Sox-2的表达（P＜0.01）。在裸鼠荷瘤实验中,与对照组比较,sCD40L处理28 d明显抑制肿瘤体积（P＜0.01,252±13 vs. 189±9）。结论: CD40通路的活化能够抑制胰腺癌细胞增殖迁移、促进凋亡,同时抑制胰腺癌细胞系体内的增殖能力,而这一效应可能与CD40L抑制胰腺癌细胞系干性相关。     

当归多糖对DPN大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制影响

目的: 分析当归多糖对糖尿病神经病变（DPN）大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制影响。方法: 选取SPF级Wistar雄性大鼠105只,随机选取15只作为正常组,剩余90只大鼠制备DPN模型,成功造模75只,随机分成5组,模型组、当归多糖低、中、高剂量组和阳性对照组,每组15只。模型组和正常组大鼠采用2 mL/100 g生理盐水灌胃,当归多糖低、中、高剂量组大鼠给予当归多糖药液灌胃,阳性对照组给予弥可保+二甲双胍溶液灌胃,每日给药体积均为2 mL/100 g。每天1次,连续灌胃10 d。给药3、10 d后检测大鼠机械缩足反应阈值（PWT）、热缩足反射潜伏期（PWL）,末次给药后检测大鼠空腹血糖、血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、白细胞介素-6（IL-6）、髓鞘碱性蛋白（MBP）、TNF-α及C反应蛋白（CRP）含量,检测大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）,大鼠坐骨神经内核因子-κB（NF-κB） mRNA、髓样分子因子88（MyD88） mRNA及Toll样受体4（TLR4） mRNA表达。结果: 模型组及当归多糖低剂量组大鼠空腹血糖、MDA含量显著高于正常组,CAT、SOD及GSH-Px含量显著低于正常组,当归多糖中、高剂量组大鼠空腹血糖、MDA含量显著低于模型组、阳性对照组,CAT、SOD及GSH-Px含量显著高于模型组、阳性对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;模型组、当归多糖低剂量组大鼠血清IL-6、MBP、TNF-α及CRP含量均显著高于正常组,当归多糖中、高剂量组大鼠血清IL-6、MBP、TNF-α及CRP含量均显著低于模型组、阳性对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;模型组、当归多糖低剂量组大鼠NF-κB mRNA、MyD88 mRNA及TLR4 mRNA表达量均显著高于正常组,当归多糖中、高剂量组大鼠NF-κB mRNA、MyD88 mRNA及TLR4 mRNA表达量均显著低于模型组、阳性对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论: 当归多糖可显著改善DPN大鼠的周围神经损伤状态,促进神经传导的恢复,其机制可能与阻断TLR4/MyD88/NF-κB信号路径的转导,降低炎性因子水平,减轻神经的氧化应激损伤有关。