饲料玉米中优质乳酸菌的分离和鉴定

[目的]从饲料玉米中筛选适合做青贮饲料添加剂的高效乳酸菌.[方法]用MRS+CaCO<,3>固体培养基筛选乳酸菌,经形态学和生理生化试验进行初步鉴定,测定其产酸效率;挑选出12株产酸率强的乳酸菌进行耐盐和耐酸能力的测定,并时其进行16 S rDNA 鉴定.[结果]从饲料玉米中共分离得到44 株乳酸菌,12株产酸能力强的菌株经生理生化试验鉴定分别属于明串珠菌属、乳杆菌属和肠球菌属,且12株菌株都具有良好的耐盐、耐酸能力.经16 S rDNA鉴定:A4、B9、B11、B12 和B14 为植物乳杆菌;A1、A2、A7、A11和B8为肠膜明串珠菌葡聚糖亚种;A8和A9为兼性肠球菌.[结论]从饲料玉米中筛选出具有较强产酸能力的乳酸菌,作为青贮饲料添加剂.     

高抑制金黄色葡萄球菌活性放线菌的分离及分子鉴定

从医院土壤中筛选分离代谢物具有较高抑制金黄色葡萄球菌活性的放线菌,并对其进行分子鉴定.结果得出,采用影印平皿法,以金黄色葡萄球菌为指示菌进行放线菌的分离,通过16S rDNA序列分析进行鉴定.结果得出,A01菌株发酵液对金黄色葡萄球菌抑制效果较好,与Streptomyces sp.VTTE-042674亲缘关系最近,达到99.86%,应属于链霉菌属.该菌株的16S rDNA序列已被GenBank收录,序列登录号为 HQ660584.     

BIOLOG自动微生物鉴定系统在水产动物病原菌检测中的应用

[目的]了解BIOLOG自动微生物鉴定系统对水产动物病原菌鉴定结果的可靠性,为水产动物细菌性疾病的诊断提供参考.[方法]选用BIOLOG自动微生物鉴定系统对9株分离自发病水产动物的病原菌进行鉴定,同时采用16S rDNA序列分析对其中的4株进行鉴定,比较2种鉴定结果的符合率.[结果]采用自动微生物鉴定系统对9株病原菌进行鉴定均取得良好结果,采用16S rDNA序列分析对4株病原菌进行鉴定的结果与应用自动微生物鏊定系统所得结果完全一致,二者符合率为100%.[结论]应用BIOLOG自动微生物鉴定系统对水产动物病原菌进行鉴定具有操作简便、快速、准确等特点,是实验室鉴定水产动物病原菌的一种可行方法.     

泡菜中乳酸菌的分离及其发酵液抑菌活性研究

[目的]从泡菜中分离筛选优势乳酸菌并时其产抑菌物质进行研究,为生产纯菌乳酸茵发酵剂、改进传统乳酸发酵食品生产提供参考.[方法]利用乳酸菌分离培养基从泡菜中分离产酸菌,并通过产酸试验、形态学及生化特性判断是否为乳酸菌属;取发酵上清液进行抑菌活性研究.[结果]从泡菜中分离获得11株产酸菌,产酸试验表明J-4、J-5、J-9、J-11为优势产酸菌;通过形态学及生化特性,初步鉴定4株产酸菌均为乳酸杆菌属;发酵上清液抑菌试验表明,4株菌均具有较强的抑菌活性,其中,J-4还具有广谱抑菌活性.[结论]研究对于纯种发酵及乳酸菌抑菌素的开发应用具有一定的启发和借鉴价值.     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌的分离鉴定及对废胎面胶的脱硫再生

从河北兴隆某硫铁矿筛选到一株硫杆菌YT-1,经理化性能和16S rDNA序列分析鉴定为嗜酸氧化亚铁硫杆菌(At.ferrooxidans YT-1),研究了该菌对废胎面胶(GTR)的脱硫再生作用.研究结果表明,三元共混物丁苯橡胶(SBR)/炭黑(CB)/再生GTR比SBR/CB/未再生GTR拉伸强度和断裂伸长率分别提高了5.3%和11.1%;X射线光电能谱检测表明SBR/CB/再生GTR表面硫元素质量分数降低13.92%,且峰位往高氧化态偏移0.2 eV,说明再生GTR表面硫元素被氧化;共混胶断裂面扫描电子显微镜显示再生GTR与SBR/CB基体粘合性能显著提高,说明再生GTR表面硫交联键被打断.     

多环芳烃厌氧降解菌的筛选与鉴定

[目的]筛选并鉴定多环芳烃厌氧降解菌.[方法]通过富集,在厌氧条件下从受焦油长期污染的土壤中筛选出多环芳烃的高效厌氧降解菌,并对其进行了生理生化试验和16S rDNA鉴定.[结果]从受焦油长期污染的土壤中分离出2株多环芳烃降解菌W2和Y3,经综合表征和16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株W2为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomo sp.),菌株Y3为芽孢杆菌属(Bacillus sp.).[结论]为多环芳烃的生物降解研究提供了理论依据.     

普通荞麦染色体的原位PCR技术研究

[目的]探索一种适合荞麦的简单易行的染色体原位PCR技术.[方法]采用16S套式引物、4.5S套式引物与psbA引物,以栽培甜荞为材料,进行染色体原位PCR、原位套式PCR与多次原位PCR试验.[结果]高温干燥可以起到与包埋类似的作用;染色体的原位套式PCR效果比原位PCR明显,多次原位PCR次数为5～6效果较佳.16S引物和4.5S引物均显示了4对信号,但位置不同;而psbA引物是单拷贝的,仅显示出1对信号.根据这些信号的位置差异可以区分普通荞麦的5对染色体.[结论]所使用的荞麦染色体原位PCR技术简单易行.     

一株絮凝剂产生菌TS-1的分离与鉴定

[目的]筛选鉴定出高絮凝活性的微生物絮凝剂产生菌:[方法丁通过培养基培养分离纯化出高絮凝活性的菌株并通过培养特征观察和生理生化特征测定鉴定筛选出的菌株.[结果]通过用稀释涂布平板法和平板划线法从土壤中分离、纯化和初筛后,从供试土样中共分离到14株具有絮凝性能的细菌,经复筛后得到5株絮凝活性较高(絮凝率>70%)的絮凝剂产生菌,其中1株经多次传代培养后絮凝活性仍很稳定(絮凝率始终>90%),其标记为TS-1.TS-1菌为具有荚膜的革兰氏阳性杆菌,并且菌体内无类脂物质如聚β-羟基丁酸.TS-1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),故将该菌定名为Bacillus TS-1.[结论]该试验筛选出的菌株可用于淀粉工业废水的絮凝处理和生化处理.     

一株产氨浸铜细菌的分离与鉴定

从内蒙古某处土壤中分离出一株分解尿素的产氨细菌（命名为 JAT-1）,革兰氏阴性,菌落表面平整湿润,乳白色,短杆状.菌体尺寸为φ0.2~0.4μm×1.5~2.0μm.结合16S rDNA测定和菌株系统发育树分析,其与Providencia Sp. Sam 130-9A同源性高达99%.对其生长特性研究结果表明：JAT-1以10 g×L^-1柠檬酸钠作为碳源,20 g×L^-1尿素作为氮源,最佳生长pH值范围为8.0——9.5,最佳初始接种浓度20%.采用该细菌进行碱性铜矿摇瓶浸出实验,144 h后铜浸出率可达42.38%,表明该菌株具有应用于碱性铜矿浸出的潜力.

     

角蛋白分解真菌的分离筛选及初步鉴定

[目的]为动物角蛋白的高效、经济降解和利用提供新种质资源.[方法]采用传统分离筛选、固体基质降解和动物试验相结合的方法,对角蛋白降解菌进行了分离筛选及初步鉴定.[结果]得到1株非致病、降解效率较高的丝状真菌,并初步鉴定为毛霉科(Mucora-ceae)的一个种.[结论]该菌株的发现丰富了角蛋白降解菌的家族成员,为动物角蛋白的降解利用提供了新种质资源.     

酵母菌的倍性及其鉴定方法

[目的]鉴别单、二倍体酵母菌株.[方法]分析了2种倍性酵母菌的特征及其联系,对酵母菌体进行美兰染色、产孢后子囊孢子的番红染色以及低温特殊处理,对单、二倍体酵母进行区分与鉴定.[结果]酵母菌株经美兰染色后能清晰观察到两者的活性及其菌体大小的差异;产孢后的二倍体菌株,子囊孢子被染成红色,菌体为蓝色,而单倍体菌株只有蓝色的菌体;低温处理后,在长有单、二倍体混合菌株的平板上,二倍体的菌落明显大于单倍体.[结论]单、二倍体酵母菌在形态上、遗传上和生理上存在很大差异,可以借助一些辅助试验很好地把它们区分开来.     

Identification and characterization of a basic cell surface-located protein from Lactobacillus fermentum BR11

Extraction of Lactobacillus fermentum BR11 cells with 5 M LiCl yielded a preparation containing a single predominant polypeptide with an apparent molecular mass of 32 kDa. A clone encoding an immunoreactive 32-kDa polypeptide was isolated from a pUC18 library of L. fermentum BR11 DNA by screening with an antiserum raised against whole cells of L. fermentum BR11. Sequence determination of the insert in the clone revealed a complete 795-bp open reading frame (ORF) that defines a 28,625-Da polypeptide (BspA). N-terminal sequencing of the LiCl-extracted polypeptide from L. fermentum BR11 confirmed that it is the same as the cloned BspA. BspA was found to have a sequence similar to those of family III of the bacterial solute-binding proteins. The sequences of two ORFs upstream of bspA are consistent with bspA being located in an operon encoding an ATP-binding cassette-type uptake system. Unusually, BspA contains no lipoprotein cleavage and attachment motif (LXXC), despite its origin in a gram-positive bacterium. Biotin labelling and trypsin digestion of whole cells indicated that this polypeptide is exposed on the cell surface. The isoelectric point as predicted from the putative mature sequence is 10.59. It was consequently hypothesized that the positively charged BspA is anchored by electrostatic interaction with acidic groups on the cell surface. It was shown that BspA could be selectively removed from the surface by extraction with an acidic buffer, thus supporting this hypothesis.     

马铃薯炭疽病菌分离与鉴定

[目的]对进境船舶上携带的带病马铃薯薯块进行了病原真菌的分离鉴定,明确其检疫重要性,并对病菌的快速鉴定方法进行研究.[方法]通过形态学观察和ITS序列分析对病菌进行了鉴定,并对已有的巢式PCR方法进行了验证.[结果]形态学观察和ITS序列分析表明,病原菌为球炭疽菌(Colletotrichum coccodes).巢式PCR中用特异性引物Cc1NF1/Cc2NR1扩增 C.coccodes得到了349 bp特异性条带.[结论]巢式PCR方法可以用来对C.coccodes进行快速鉴定,该病原菌是进境植物检疫潜在危险性病原真菌,在国内口岸属首次截获.     

红树林湿地土壤萘降解菌的分离与鉴定

[目的]研究降解菌株对萘的降解能力,为其应用于被石油污染滨海湿地的生物修复提供参考.[方法]采用富集培养方法,从珠海市淇澳岛被石油污染的红树林湿地土壤中富集、分离和筛选出能降解萘的菌株,观察各菌落及菌体形态特征;研究菌株N4的生理生化特征,并应用16S rDNA序列分析方法进行鉴定.[结果]从土壤样中分离得到26个能以萘为唯一碳源生长的菌株,其中4个在平板上菌落较明显且具有不同的菌落特征,分别命名为N1、N2、N3和N4.菌株N4对萘的降解能力最强,在初始萘浓度为100 mg/L的无机盐培养基中培养5 d,萘降解率为54.2%,而菌株N1、N2和N3的降解率分别为52.7%、52.5%和47.8%.菌株N4经16S rDNA序列分析方法鉴定为赤红球菌.[结论]从被石油污染的红树林湿地土壤分离筛选出对萘具有较高降解能力的菌株.     

牙鲆鱼肠道鼠李糖乳杆菌P15的分子鉴定与系统发育分析

[目的]对1株分离自健康牙鲆鱼肠道固有菌群的乳杆菌P15进行分子鉴定.[方法]利用PCR技术测定该菌株的16S rRNA基因序列,然后在GenBank中进行相关细菌相应序列的同源性比对,利用MEGA(4.0)软件进行系统发育学分析.[结果]获得了该菌株的16S rRNA基因序列(登录号为 AY852248).菌株P15与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)的亲缘关系最近.[结论]菌株P15被鉴定为鼠李糖乳杆菌.     

Identification of an antihypertensive peptide from casein hydrolysate produced by a proteinase from Lactobacillus helveticus CP790

Casein hydrolysate, produced by an extracellular proteinase from Lactobacillus helveticus CP790, was fractionated by two-step reverse-phase HPLC. Only one fraction showed antihypertensive activity as measured by systolic blood pressure in spontaneously hypertensive rats after oral administration. Ten peptides in the fraction were further purified and identified by analysis of amino acid sequences. Each identified peptide was chemically synthesized, and the antihypertensive activity of each peptide was evaluated in spontaneously hypertensive rats. The synthetic peptide with a sequence of Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Gln, found in beta-casein, indicated strong antihypertensive activity from 2 to 10 h after oral administration of 2 mg of peptide/kg of BW, and the effect was maximal at 6 h after oral administration (-31.5 +/- 5.6 mm Hg). Moreover, the antihypertensive effect of the peptide was dependent on the dosage of peptide from 0.5 to 2 mg of peptide/kg of BW. Interestingly, the antihypertensive peptide showed lower inhibitory activity of angiotensin I-converting enzyme, but the activity was increased after pancreatin digestion.     

高效盖草能降解菌的分离与鉴定

针对海南地区长残效除草剂残留对后茬产生药害问题,以高效盖草能作为研究对象,采用富集培养的方法从长期施用长残效除草剂的土壤中分离到3株细菌,经过对这3株降解菌的培养特性及生理生化特征的测定试验,经传统鉴定方法对3种菌种进行鉴定,结果显示,HM1和HM2同为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),HM3为甲基球菌属(Methyloeoccus sp.).并分别研究了培养含糖量、温度、pH和高效盖草能初始浓度对分离出的3株降解菌生长的影响,结果表明,HM1和HM3的最适含糖量是0.HM2的最适含糖量为0.5%;HM1和HM3的最适温度范围相同,为20～37℃,HM2的最造温度为25～41℃;HM1、HM2和HM3的最适生长温度分别是35、30和30℃;HM3的生长对酸碱度要求不严格,最适生长pH范围为6.0～9.0.HM1适宜在中性偏酸的条件下生长,而HM2则适宜在中性偏碱的条件下生长,其最适生长pH均为6.0～8.0;HM1和HM2生长的最适高效盖草能浓度是100 mg/L,HM3生长的最适高效盖草能浓度为200mg/L.