荷斯坦种公牛HSF1和HSBP1基因多态性分析

[目的]研究荷斯坦种公牛HSF1和HSBP1基因多态性.[方法]通过DNA测序技术对牛HSF1和HSBP1基因进行SNPs位点扫描,利用CRS-PCR和PCR-RFLP方法对4个单核苷酸多态性(SNPs)进行基因型分型,分析162头荷斯坦种公牛HSF1和HSBP1基因的多态性.[结果]扫描结果表明,在HSF1基因1451(G/T)处发现1个新SNP.在HSBP1基因第2内含子上发现3个新SNPs,分别为324(G/C)、589(C/T)和651(C/G).多态性分析结果表明,HSF1基因1451(G/T)住点的SNP的AA基因型频率最高,优势等住基因为A,而HSBP1基因3个SNP频率最高的基因型分别为AB、AA和BB,优势等位基因589(C/T)为A,而324(G/C)和651(C/G)均为B.χ<'2>适合性检验表明,HSF1基因1451(G/T)位点在荷斯坦种公牛群体中已达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而HSBP1基因324(G/C)、589(C/T)和651(C/G)位点的突变在荷斯坦种公牛群体中均未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05).[结论]该研究可为HSF1和HSBP1基因的功能研究提供试验依据.     

ADAMTS-1基因多态性与母猪产仔数的关系

用PCR-RFLP方法对118 头大长杂交母猪的ADAMTS-1基因进行分型,并分析了ADAMTS-1不同基因型母猪的产仔数差异.结果表明,在所检测的大长杂交猪群体中,基因A为0.56,基因B为0.44;不同基因型间产仔数表现出AB＞BB＞AA的趋势,AA型与BB型以及AB对猪的产仔数和产仔活数差异不显著.     

宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因多态性分析

[目的]对宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体生长激素受体(GHR)基因的多态性进行分析,为宁夏黄牛杂交改良选育提供理论参考.[方法]采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对该群体70个个体的GHR基因多态性进行检测.[结果]扩增出了338 bp的目的片段,PCR产物被限制性内切酶Alu I消化后表现出多态性,其中AA基因型频率为75.71%;BB基因型频率为24.29%.[结论]共检测到AA和BB 2种基因型,六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因具有多态性.     

蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因5'侧翼区多态性在广东汉族人群中的分布

目的:探讨蛋白磷酸酶2A-Aα亚基基因PPP2R1A启动子区的遗传多态性在中国南方汉族人群中的分布特征.方法:随机选取部分广东汉族人群,获取全血基因组DNA.PCR扩增获得PPP2R1A基因5'-侧翼区的目的片段产物直接再测序,筛查并确证潜在的基因多态性位点,采用HaploView软件进行该人群多态性等位基因分布频率的分析、并与HapMap结果进行分布特征比较.结果:PCR扩增和成功测序63例健康人(126条染色体)PPP2R1A基因-1 844～+201 nt的目的片段,序列比对发现该人群中6个已知多态性位点及其人群最小等位基因频率分别为-1 039 G>T(+Ins)(rs10414793,但其中T等位基因型含有29个碱基片段的插入)(8.73%)、-568 G>A(rs1864007)(25.40%)、-241 -/G(rs11453459)(26.90%)、+87 T>C(rs13344984)(7.94%)、+107 -/C(rs3833207)(30.16%)和+108 A>G(rs17554825)(7.94%);且其中2个位点在该人群中的分布与HapMap公布的国外人群数据存在不同(P<0.05);同时,该人群中还发现-512 G>A(2.38%)的潜在新多态性位点.结论:筛查PPPwR1A基因5'-侧翼区在中国广东汉族人群中多态性位点的等位基因分布,为进一步开展多态性功能性分析提供基础.     

抗精神分裂症药物诱发迟发性运动障碍与COMT基因多态性的关联性分析

目的:通过分析中国北方汉族人群中精神分裂症患者COMT基因多态性Val158Met 分布,研究COMT基因多态性与精神分裂症及迟发性运动障碍(TD)发生的关系.方法:采集356例并发TD的精神分裂症患者( TD组)、419例不发生TD的精神分裂症患者(非TD组)及471例正常健康人 (正常对照组)的全血样本,提取基因组DNA,应用TaqMan探针检测COMT基因多态性Val158Met基因型和等位基因的分布.结果:正常对照组与精神分裂症组比较,基因型与等位基因频数分布差异均无统计学意义(χ2=3.08,df=3,P=0.21;χ2=2.067,df=2,P=0.15).TD组与正常对照组比较,基因型与等位基因频数分布差异均无统计学意义(χ2=1.857,df=3,P=0.40;χ2 =1.281,df=2,P=0.26).非TD组与正常对照组比较,基因型与等位基因频数分布差异均无统计学意义(χ2=2.505,df=3,P=0.29;χ2=1.709,df=2,P=0.19).TD组与非TD组比较,基因型与等位基因频数分布差异均无统计学意义(χ2=0.021,df=3,P=0.99;χ2=0.013,df=2,P=0.91).结论:精神分裂症的发生与COMT基因多态性Val158Met无关联性,精神分裂症患者并发TD与COMT基因多态性Val158Met无关联性.     

COMT基因多态性rs4818与精神分裂症及迟发性运动障碍的关联性分析

目的:检测中国北方汉族人群中精神分裂症患者COMT基因多态性rs4818基因型及等位基因频数分布,探讨其与精神分裂症及迟发性运动障碍(TD)发生的关系.方法:以273例并发TD的精神分裂症患者(TD组)、114例未发生TD的精神分裂症患者(非TD组)和286例正常健康人群(正常对照组)为研究对象,采用Taqman探针方法检测COMT基因多态rs4818基因型和等位基因频数的分布.结果:与正常对照组比较,精神分裂症患者rs4818 G/G基因型频数分布差异有统计学意义(χ2=6.186,df=3,P=0.045);与正常对照组比较,TD组患者rs4818 G/G基因型频数分布差异有统计学意义(χ2=6.081,df=3,P=0.048);非TD组患者与正常对照组比较,G等位基因频数分布差异有统计学意义(χ2=4.049,df=2,P=0.044);TD组与非TD组比较,rs4818基因型及等位基因频数分布差异无统计学意义(χ2=0.634,df=2,P=0.426;χ2=0.848,df=3,P=0.654).结论:COMT基因多态性与精神分裂症的发生有关联,但与精神分裂症TD的发生无关联性.     

rcanl-1l基因的克隆和表达

从小鼠脑组织中通过总mRNA的提取、RT-PCR方法,利用pEASY-T1载体克隆出了鼠源rcanl-1l基因,并构建出了重组有rcan1-1l基因的PET21a原核表达质粒,进行了表达条件的初步摸索,这为今后研究roanl-1l基因以及蛋白的结构与功能打下了前期实验基础.     

Tim-3基因4个SNP位点多态性与宁夏地区回族人群类风湿性关节炎易感性的关联性分析

目的:探讨宁夏地区回族人群中Tim-3基因4个单核苷酸多态性(SNP)位点多态性与类风湿性关节炎(RA)易感性的关联性,为RA的早期预防提供理论依据.方法:采用序列特异性引物聚合酶链式反应(SSP-PCR)及限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)2种方法检测113例RA患者及111例健康个体Tim-3基因-574、-882、-1541和4259共4个位点的单核苷酸多态性.结果:宁夏回族健康人群和RA患者中,Tim-3基因-574、-882、-1541基因型频数和等位基因频数的分布差异均无统计学意义(P>0.05),4259位点基因型和等位基因频数分布差异有统计学意义(P<0.05),RA患者组G等位基因频数(6.36%)显著高于健康组(1.58%).结论:宁夏回族人群Tim-3基因-574、-882、-1541和4259位点存在单核苷酸多态性变异,其中4259T>G的变异与宁夏回族人群RA发生有关.     

鸡催乳素受体基因的多态性分析

[目的] 研究PRLR基因对鸡就巢和产蛋性状的影响.[方法] 设计10对引物,采用PCR-SSCP方法,扩增了旧院黑鸡、固始鸡、山地乌骨鸡以及新扬州鸡PRLR基因部分外显子及邻近内含子序列.[结果] 检测到4个多态位点,分别为外显子3处的SNP1(A10862G,位于5'-UTR)、外显子6处的SNP2(A25670G,为同义突变)、内含子8处的SNP3(G30716A)以及外显子10处的SNP4(A31900G).卡方独立性检验结果发现,4个多态位点不同基因型在4个群体间的分布差异极显著(P<0.01). [结论] PRLR基因可能是影响鸡就巢和产蛋性状的一个主效基因.     

雄激素受体基因E211G》A多态性与汉族女性青春期后痤疮的关联性分析

目的:探讨雄激素受体(AR)基因E211 G>A单核苷酸多态性与汉族女性青春期后痤疮的关联性,为汉族女性青春期后痤疮发病遗传学研究奠定基础.方法:将女性青春期后痤疮患者79例和正常女性志愿者80例分为女性青春期后痤疮组和女性正常对照组,采用PCR技术扩增出AR-E211 G>A基因多态位点的片段,用限制性内切酶StuⅠ进行酶切,产物在2%琼脂糖凝胶上电泳,确定G>A基因的3种基因型,即GG、GA、AA,观察两组基因型频数和等位基因型频数分布的差异.结果:女性青春期后痤疮组GA+AA基因型频数低于对照组(P=0.028,OR=0.937,95% CI=0.885～0.992).女性青春期后痤疮组A等位基因频数低于对照组(P=0.029,OR=0.968,95% CI=0.941～0.996).结论:AR-E211 A等位基因的存在使青春期后女性患痤疮的风险性明显降低.     

Immunohistochemical pattern of insulin-like growth factor (IGF) I, IGF II and IGF binding proteins 1 to 6 in carcinoma in situ of the testis

AIM: To study the immunohistochemical localisation of insulin-like growth factor (IGF) I, IGF II, and IGF binding proteins 1-6 in intratubular germ cell neoplasia in the vicinity of solid germ cell tumours of the testis. METHODS: Testes were obtained from 13 patients (20-35 years old) who had undergone orchidectomy for treatment of a solid germ cell tumour. Tumour cells were verified histologically by their distinctive morphology and by visualisation of placental alkaline phosphatase immunoreactivity. RESULTS: The majority of carcinoma in situ (CIS) cells were immunopositive for IGF I, whereas no CIS cells stained for IGF II. Of all the IGF binding proteins investigated, CIS cells showed intense immunoreactivity for IGF binding protein 5 and lower expression of all other IGF binding proteins. CONCLUSIONS: These results suggest that the action of IGF binding protein 5 in CIS cells may modulate the activity of IGF I. This may be related to a proliferative advantage that could facilitate tumour development.     

奶牛OLR1 3′UTR A223C多态的生物学信息分析

[目的]探索氧化型低密度脂蛋白受体OLR1 3′UTR A223C 多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制.[方法]用miRanda(1.0)软件装载牛microRNA数据库,预测OLR1 3′UTR潜在的microRNA.[结果]共预测16个microRNA靶标,OLR1 3′UTR A223C突变定位于bta-miR-370 靶标种子序列的互补区.[结论]由于OLR1 3′UTR A→C突变导致bta-miR-370 靶标的消失,为OLR1 3′UTR A223C 多态与奶牛乳脂率高低紧密关联的分子机制深入研究提供依据.     

策勒黑羊BMPR-IB基因exon6的多态性分析

本实验利用限制性内切酶Eco471检测策勒黑羊骨形态发生蛋白受体基因(BMPR-IB)外显子6(exon 6)序列限制性片断长度多态性(RFLP),结果显示:30只策勒黑羊BMPR-IB基因exon 6酶切后出现140bp、11Obp和30bp长度的片段.BB型3只,占9.09%; B+型12只,占36.36%; ++型18只,占54.55%0.B基因频率为0.27,+基因频率为0.73.     

甜菜夜蛾核多角体病毒Se29基因的克隆与序列分析

[目的]克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua muhicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)ORF29全长基因(Se29).[方法]用PCR的方法扩增Se29基因,将其克隆至pMD18-T载体上,获得了重组质粒T-Se29,进行序列测定和分析.[结果]获得大小为642 bp左右的序列.扩增序列与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性100%.序列分析结果表明,Se29基因编码蛋白(SE29)存在一个可能的跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,1个微体C末端靶信号位点.蛋白序列比对结果表明,SE29与棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpa armigera single nueleocapsid nucleopolyhedrovir-as,HaSNPV)ORF128(Ha128)的编码蛋白(HA128)具有较高的同源性,其在病毒侵染过程中的作用值得关注.[结论]成功克隆出Se29基因,为研究其在病毒侵染过程中的作用奠定了试验基础.     

野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析

[目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析.[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序.[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1 252和908 bp.rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525 bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448 和107 bp.[结论]为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础.     

番茄抗花叶病毒基因类似序列扩增研究

[目的]研究番茄抗花叶病毒基因类似序列扩增.[方法]以选育和生产上广泛使用的20个番茄品种为试材,对其进行了田间和实验室抗花叶病毒病(ToMV)筛选、基因类似序列扩增、RAPD聚类分析及特异引物PCR扩增.[结果]美味樱桃番茄、中杂9号、旱红宝、W2624、OH-2-2-11、黄圣果和美国番茄对ToMV具有较强的抗性;根据聚类分析,受试品种可分为3类,从中选出9个抗性和非抗性品种进行抗ToMV,基因类似序列分析,其中非抗性和购买无抗性番茄品种未扩增出任何谱带,而抗性品种扩增出约300 bp的谱带,初步认为该谱带为抗ToMV类似序列基因.[结论]为培育抗花叶病毒病的番茄品种提供了理论依据.     

Structural changes in insulin-like growth factor (IGF) I mutant proteins affecting binding kinetic rates to IGF binding protein 1 and IGF-I receptor

Ligand binding properties of five single amino acid substituted variants (V11A, D12A, Q15A, Q15E, and F16A) of human insulin-like growth factor I (IGF-I) were analyzed with respect to their binding affinities and binding kinetics to recombinant IGF binding protein 1 (IGFBP-1) and a soluble form of the IGF type I receptor (sIGF-I(R)), respectively. Side chains of the substituted residues are all predicted to be the most surface exposed in the alpha-helical portion of the B-region of the IGF-I molecule. The IGF-I variants were produced as fusion proteins to a IgG(Fc) binding protein domain, Z. Ligand binding kinetic rates were determined using BIAcore biosensor interaction analysis technology. All IGF-I variants showed altered binding affinities to both IGFBP- I and sIGF-I(R). Secondary structure content of the IGF-I variants was estimated using far-UV circular dichroism spectroscopy, followed by variable selection secondary structure calculations. The amount of calculated alpha-helicity is reduced for all the mutants, most predominantly for IGF-I(V11A) and IGF-I(F16A) proteins. Surprisingly, most of the effects of reduced binding affinities to both target proteins are attributed to lowered on-rates of binding, and these are correlated with the amount of alpha-helicity in each IGF-I variant. In addition, in some of the IGF-I variants, lowered off-rates of binding are observed. From the results, we propose that IGF-I is unusually sensitive to structural changes by surface amino acid substitutions in the B-region of the molecule. Therefore, biochemical or biological properties of amino acid substituted variants of IGF-I cannot be used in a straightforward way to dissect the direct involvement in binding of individual amino acid residues since structural changes may be involved.     

固原鸡线粒体基因组ATPase 8基因的克隆及序列分析

[目的]扩增固原鸡(白羽、麻羽、红羽)、肉鸡品种AA鸡及蛋用品种罗曼鸡线粒体ATPase 8(ATP酶第8亚基)基因.[方法]从鸡血液中提取基因组DNA.然后,利用已经公布的鉴别检测鸡的源性成分的特异性引物,PCR扩增线粒体ATPase 8基因并测序.[结果]固原鸡不同品系和AA鸡的ATPase 8基因全序列为165 bp,罗曼鸡为168 bp.[结论]不同品系固原鸡的ATPase 8基因序列与罗曼鸡和AA肉鸡均有较高的同源性,但是与鹌鹑、鹧鸪、鸵鸟、鹅、火鸡的同源性相对较差.