流动注射-光度法自动测定多种植物样品中过氧化物酶活性

基于愈创木酚(GA)/过氧化物酶(POD)/过氧化氢(H_2O_2)反应体系,建立一种新的流动注射分析流路,测定多种植物样品中过氧化物酶活性。结果表明,系统参数优化如下:系统流速1.91 mL/min,样品进样体积40μL,试剂注入体积150μL,反应盘管长度150 cm,磷酸盐缓冲溶液浓度0.05 mol/L,pH 6.0;HCl清洗液进样体积150μL,浓度0.24 mol/L;底物为4.5 mmol/L GA和1.5 mmol/L H_2O_2混合溶液;反应产物的表观摩尔吸光系数测定结果为0.006 4 L/(μmol·cm)。本方法测定范围在153～2 752 U/L之间,检出限为25.7 U/L,重现性较好(RSD≤3.38%,n=11),分析速度为90样/h。对五种植物样品中的过氧化物酶活性测定并进行加标回收实验,回收率在95%～105%之间。     

流动注射-光度法自动测定多种植物样品中过氧化物酶活性

基于愈创木酚(GA)/过氧化物酶(POD)/过氧化氢(H2O2)反应体系,建立一种新的流动注射分析流路,测定多种植物样品中过氧化物酶活性.结果表明,系统参数优化如下:系统流速1.91 mL/min,样品进样体积40μL,试剂注入体积150μL,反应盘管长度150 cm,磷酸盐缓冲溶液浓度0.05 mol/L,pH 6....     

超声波对固定化辣根过氧化物酶活性影响研究

为了研究超声波对固定化酶活性的影响,以固定化辣根过氧化物酶为对象,研究了不同超声波处理条件(超声功率,超声时间)以及超声条件下催化体系的pH、温度对固定化酶活性的作用。同时对超声波处理后固定化酶活的重复利用性进行测定。结果表明,超声波处理对提高固定化酶在高温、强酸碱条件下催化活性有一定帮助,最佳处理条件为:超声波功率50 W,超声时间30 min,pH 8,温度35℃,在此条件下,与未经超声波处理相比,固定化酶活性提高了17.6%,固定化酶重复利用性增强,经7次使用后,固定化酶催化活性是未经处理的1.8倍。     

有机过氧化物检测方法的研究进展

介绍滴定法、气相色谱法、高效液相色谱法、质谱法和气相色谱-质谱联用法在有机过氧化物检测中的应用,对比不同检测方法的优缺点。目前,有机过氧化物检测方法方面的研究仍比较浅显,仅选取不同类型样品进行研究,建立的有机过氧化物检测方法不具有普遍适用性。未来应重点开发无需样品前处理、无损、实时、快速、简便、高灵敏度、高分辨率的检测方法,并研究多种检测方法的结合使用。     

基于金属硫蛋白铜纳米簇的过氧化物酶活性检测尿酸

将金属硫蛋白铜纳米簇的过氧化物酶活性与尿酸酶的催化活性相结合,设计了比色/光度法检测血液样品中尿酸的生物传感平台。方法检测尿酸的线性范围为25.47～750.00μmol/L,检出限7.72μmol/L,相对标准偏差为3.02%～4.62%,在实际血液样品的测定中加标回收率96.34%～105.39%。方法简便易行,能满足实际应用需要。     

基于金属硫蛋白铜纳米簇的过氧化物酶活性检测尿酸

将金属硫蛋白铜纳米簇的过氧化物酶活性与尿酸酶的催化活性相结合,设计了比色/光度法检测血液样品中尿酸的生物传感平台。方法检测尿酸的线性范围为25.47～750.00μmol/L,检出限7.72μmol/L,相对标准偏差为3.02%～4.62%,在实际血液样品的测定中加标回收率96.34%～105.39%。方法简便易行,能满足实际应用需要。     

超高压处理对橙汁中过氧化物酶活性的影响

为了推进超高压钝酶技术的工业化进程,以橙汁中的过氧化物酶（POD）为研究对象,通过实验对影响超高压钝酶效果的处理条件（压力、保压时间、pH、温度）进行了考察与评价.在处理温度为室温、保压时间分别为5和20 m in的条件下,200 MPa以下压力范围内POD被激活,其活性随压力的增加出现上升趋势,当压力大于200MPa,随着处理压力增加酶活性下降;压力较高时（500 MPa）酶的活性随着保压时间的增加而降低,而在较低的压力（200 MPa）,其活性随着保压时间的增加而升高;酶活性随pH的增大先上升后下降;随着温度的上升,酶活性降低.实验结果表明,压力、保压时间、pH值、温度是影响超高压钝酶效果的重要因素.     

辣根过氧化物酶降解苯酚废水催化特性研究

采用辣根过氧化物酶催化降解苯酚,研究了辣根过氧化物酶浓度、pH值、反应温度对苯酚去除率的影响。结果表明,辣根过氧化物酶生物催化体系对苯酚有良好的降解效果。当温度为30℃,pH值为6时,在苯酚、H2O2、辣根过氧化物酶浓度分别为1 mmol/L,1.2 mmol/L,0.5μg/mL条件下,反应25 min,可以获得70%左右的苯酚去除率。利用双倒数作图法测定了不同酶浓度的催化动力学参数,动力学参数Kcat,Kcat/Km表明,苯酚的去除率和催化反应速率随着酶浓度的增加而增大;辣根过氧化物酶的催化效率与催化体系中酶和底物浓度有关,过高的底物浓度会降低酶的催化效率。     

黄连木叶过氧化物酶活性及其同工酶酶谱分析

用愈创木酚法测定黄连木叶中过氧化物酶活性,用PAGE技术分析雌雄株同工酶酶谱,结果:雌雄株的叶子同工酶谱存在差异。结论:雌雄株过氧化物酶活力有逐渐降低到稳定值的规律性差异,雌雄株间过氧化物酶同工酶酶谱也存在明显差异,雄株酶带都比雌株多,酶谱带差异可以作为鉴定雌雄株的依据!     

氢供体组与辣根过氧化酶活性光谱研究

对邻苯二酚-苯胺和苯酚-氨基安替吡啉构成的两组测定HRP酶活性的体系进行了研究和比较。紫外可见光光谱和高效液相色谱分析表明,在HRP催化过程中,邻苯二酚-苯胺氢供体对会生成为一种粉红色产物,该产物最大吸收波长在510咖,可用于HRP的活性测量。且与常规使用的苯酚-氨基安替吡啉氢供体对的情况相比,具有更高的灵敏度、更低的检测限值和很好的重复性,在对HRP分别进行20次酶活测量,所得相对标准偏差仅为2．9％。使用邻苯二酚-苯胺氢供体对的方法可计算得到酶动力学参数Km（12．5mM）和Vmax（12．2mMmin^-1mg^-1）。     

酶偶联分光光度法测定胞内黄嘌呤氧化酶活性

建立了新的酶反应体系显色分光光度法检测节杆菌胞内黄嘌吟氧化酶的活性。考察了温度、pH值和底物浓度对检测体系的影响,确定了黄嘌呤氧化酶活性检测的最优条件,获得了良好的检测线性关系。此检测方法操作简便,结果准确可靠,可作为普通实验室和临床上测定黄嘌呤氧化酶活性的有效生化手段。     

白腐真菌产锰过氧化物酶的研究

以锰过氧化物酶活性为评价指标,研究各种因子对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶的影响。结果表明:藜芦醇、苯甲醇和吐温80的添加有利于促进白腐真菌的生长及产锰过氧化物酶活性,在浓度分别为150mg·L-1、150mg·L-1、14mg·L-1时对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶促进作用最好;Ca2+、Fe2+对白腐真菌生长及产锰过氧化物酶活性的影响是一致的,均表现为"先促进,后抑制"的作用;Cu2+浓度小于0.4mg·L-1时能略微促进白腐真菌的生长及产锰过氧化物酶活性,大于该浓度时具有较明显的抑制作用。     

辣根过氧化物酶处理邻苯二酚废水的研究

研究了用辣根过氧化物酶催化处理邻苯二酚废水的效果.结果表明,用辣根过氧化物酶可以有效地去除邻苯二酚.其最佳处理条件为:pH值4.4、过氧化氢与邻苯二酚的摩尔比约2∶1、反应时间30 min,适当增加酶用量可以明显缩短反应时间.     

高活性生化腐植酸对酶催化活性的影响

以葡萄、苹果、番茄等果渣类废弃物,树皮、树叶、杂草等植物类废弃物作为生化腐植酸(BHA)的制备原料,在不同菌种、不同发酵时间下进行固态发酵,合成几种含吲哚乙酸、脱落酸或赤霉素的高活性生化腐植酸。研究了这几种高活性生化腐植酸对α-淀粉酶、过氧化氢酶和植酸酶的活性及对植物种子萌芽的生长情况的影响。试验结果表明:生化腐植酸在浓度适宜的情况下对α-淀粉酶、过氧化氢酶和植酸酶的活性以及植物种子的生长有促进作用,但浓度过高时就出现抑制现象。本研究以廉价的原料制备高附加值的生化腐植酸,农业应用前景广阔。     

Detecting Operational Inactivation of Horseradish Peroxidase using an Isoconversional Method

Kinetic parameters of operational inactivation of horseradish peroxidase during the enzymatic oxidation of 2‐aminophenol with hydrogen peroxide were estimated using an isoconversional method. This method only requires the progress kinetic curves obtained at constant initial concentrations of the substrates. In order to investigate the possible pathways of low‐reactive species compound III formation, a kinetic model was proposed and several rate constants were calculated using an optimization computing program. Generation of an oxygen reactive species in the reaction system was also considered in the reaction scheme. Sensitivity analysis, corroborated with the overall inactivation kinetics observed with the isoconversional method, allows the conclusion that the inactivation of the enzyme occurs mainly via the reaction of compound II with hydrogen peroxide.     

应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后,构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ,经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变,得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ　ｐｌｕｓ）,表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ,接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。     

Construction of a Artificial Glutathione Peroxidase with Temperature‐Dependent Activity Based on a Supramolecular Graft Copolymer

A supramolecular artificial glutathione peroxidase (PNIPAM‐CD‐g‐Te) was prepared based on a supramolecular graft copolymer. PNIPAM‐CD‐g‐Te was constructed by supramolecular host–guest self‐assembly. Significantly, PNIPAM‐CD‐g‐Te displayed noticeable temperature‐dependent catalytic activity and typical saturation kinetics behavior. It was also proved that the change in the self‐assembled structure of PNIPAM‐CD‐g‐Te during the temperature‐dependent process played a significant role in the temperature‐dependent catalytic behavior. The construction of PNIPAM‐CD‐g‐Te based on supramolecular graft copolymer endows artificial GPx with temperature‐dependent catalytic ability, enriched catalytic centers, and homogeneously distributed catalytic centers. This work bodes well for the development of other biologically related host–guest supramolecular biomaterials.