我国首例由丁酸梭菌引起婴儿E型肉毒中毒实验室诊断研究

目的对一起疑似婴儿肉毒中毒进行实验室诊断研究。方法对1例疑似婴儿肉毒中毒病例的粪便、食用过的食品和生活环境涂抹共计30份标本/样品进行梭菌分离鉴定及肉毒毒素检测,对分离菌株进行产毒试验。结果将患儿粪便标本培养物上清液腹腔注射小鼠后可致小鼠出现典型肉毒毒素中毒表现(竖毛、呼吸困难并出现典型的蜂腰、四肢麻痹),继而死亡,且培养物上清液经胰酶处理后毒性增强,表现为小鼠出现中毒及死亡时间较未处理组明显缩短。但培养物上清液经100℃加热处理后再次染毒动物,小鼠未出现中毒和死亡。混合型肉毒毒素诊断血清及单价抗E型肉毒毒素诊断血清可对小鼠起到保护作用。从患儿的粪便标本中分离到G~+芽胞杆菌,该菌在哥伦比亚血平板上呈不规则半透明扁平菌落,边缘根状生长,并携带E型肉毒毒素产毒基因,16S rRNA将其鉴定为丁酸梭菌,产毒试验结果显示该菌株可产E型肉毒毒素。结论该起婴儿中毒事件是由感染产E型肉毒毒素的丁酸梭菌引起。     

市售婴幼儿配方奶粉和婴幼儿米粉中梭状芽胞杆菌的分离和综合鉴定分析

目的 对57件市售婴幼儿配方奶粉、50件婴幼儿米粉进行梭状芽胞菌分离鉴定分析及毒素基因检测,获得梭状芽胞杆菌的污染水平数据,并评估各鉴定方法。方法 通过分离菌株的生长特性、革兰染色、普通显微镜下形态特征等表型特征,应用微生物飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）、16S rRNA基因测序技术、全基因组测序技术对分离菌株进行综合鉴定,通过PCR对分离的梭状芽胞杆菌进行肉毒毒素基因检测,对肉毒毒素基因PCR阳性片段进行测序和比对分析。结果 57份市售婴儿配方奶粉中有26份样品中检出38株梭状芽胞杆菌,其中9份样品中同时检出超过两种细菌。50份市售婴幼儿米粉中有5份样品检出5株梭状芽胞杆菌。奶粉中分离的一株楔形梭菌E型肉毒梭菌毒素基因PCR扩增阳性,扩增片段测序比对结果显示这段序列并不是E型肉毒梭菌毒素基因,全基因组测序结果也证实。43株梭状芽胞杆菌均未检出肉毒梭菌的毒素基因。结论 梭状芽胞杆菌鉴定需要多种方法的综合分析。市售婴幼儿配方奶粉、婴幼儿米粉中存在梭状芽胞杆菌的污染,应加强婴幼儿配方食品中重要梭状芽胞杆菌的监测,为风险评估提供数据支持。     

某企业婴儿肉毒中毒乳粉相关样品中肉毒梭菌的分离与分型

目的 对从某企业获取的30批次婴儿配方乳粉样品进行肉毒毒素和肉毒梭菌检测，对分离到的1株B型肉毒梭菌进行全基因组测序分析。方法 参照GB 4789.12—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对样品进行肉毒梭菌分离及肉毒毒素分型实验；对分离到的菌株进行全基因组测序，并分析菌株的遗传特征。结果 30批次样品中均未检出肉毒毒素；将增菌液进行小鼠腹腔注射后，4批次乳粉样品出现了典型小鼠肉毒中毒症状，但仅从1批次乳粉样品中分离到肉毒梭菌。基因组测序分析显示，该菌为Ⅰ群B型肉毒梭菌，毒素基因簇为Ha型，毒素基因为B2亚型。结论 针对背景微生物复杂的婴儿配方乳粉中肉毒梭菌检测，不应以菌种分离作为金标准，而应以增菌液小鼠毒性实验结合肉毒抗血清保护实验作为确认方法。全基因组测序可对分离菌种进行精准鉴定和相关遗传特征分析，为中毒事件处理提供可靠的技术支撑。     

加拿大:不建议给1岁以下婴儿喂食蜂蜜

正婴儿肉毒中毒症非常罕见,对1岁以下婴儿可引起严重的症状,主要原因为进食含有肉毒梭状芽胞杆菌(简称肉毒梭菌)毒素污染的食物而引起的急性中毒性疾病。若不及时抢救,则病死率很高。肉毒梭菌存在于经加热杀菌及未经杀菌的蜂蜜中,因此,不要给1岁以下婴儿喂食蜂蜜是非常重要的。因肉毒杆菌孢子即使经加热(调理、蒸煮等)也难以杀灭,故同样不建议在婴儿用食品甜味剂中添加蜂蜜。     

一起由食用家庭自制辣椒酱引起肉毒中毒的实验室诊断

目的 对1例疑似肉毒中毒病例的相关样品进行实验室检测。方法 参照GB 4789.12—2016对病例暴露食品样品（自制辣椒酱、咸菜、芝麻酱、卤猪蹄）和粪便标本进行前处理,应用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测样品/标本中肉毒毒素基因,通过动物试验进行毒素检测和型别确认,经接种疱肉培养基和TPGYT培养基增菌培养,采用血琼脂平板进行分离、纯化,并做菌种鉴定。结果 5份样品/标本经实时荧光定量PCR法检测,仅在自制辣椒酱样品中检测到A型肉毒毒素基因;通过动物试验进行毒素检测,在自制辣椒酱样品中检测到A型肉毒毒素,其他样品/标本中未检测到肉毒毒素;5份样品/标本中,从自制辣椒酱和卤猪蹄样品中均分离到A型肉毒梭菌。结论 该起中毒事件是由食用肉毒梭菌污染的家庭自制辣椒酱引起。     

关于“乳饮料中含有肉毒杆菌”的科学解读

正去年,在微信朋友圈中流传一条关于"儿童乳饮料中含有肉毒杆菌,喝了会导致白血病"的信息,引起了家长们的高度关注。乳饮料中会含有肉毒杆菌吗?肉毒杆菌是什么?有何危害?专家解读一、肉毒杆菌自身并不致病,其产生的肉毒毒素才是元凶肉毒杆菌(Clostridium botulinum)又称肉毒梭菌,是一种生长在常温、非酸性和厌氧环境中的革兰氏阳性芽胞杆菌,广泛分布于土壤、淤泥及动物粪便中。肉毒杆菌的菌体并没有毒性,但在严格的厌氧环境和适宜的温度(18-3 0℃)条件下,肉毒杆菌芽胞可能萌发、生长并形成肉毒毒素,该毒素才是     

肉毒梭菌的控制

肉毒梭菌分布广泛,其芽胞热抵抗力很强,其分泌的肉毒毒素致死力极强。目前对肉毒梭菌的检测与控制存在风险。     

1959—2022年青海省食源性肉毒中毒事件流行病学分析

目的 分析青海省食源性肉毒中毒事件流行特征及影响因素,为防控提供科学依据。方法 收集1959—2022年青海省肉毒中毒数据,应用Excel 2021进行流行病学特征分析,利用R 4.2.3对事件数和病死率进行Mann-Kendall趋势检验,运用ArcGis 10.2软件制作空间分布图。结果 1959—2022年发生食源性肉毒中毒事件86起,发病348人,死亡195人,病死率为56.03%。中毒主要发生在第二、三季度,牧民为主要的发病人群,肉毒毒素型别主要为E型,“风干肉”为主要的中毒食品,生食和开锅即食为主要的食用方式。结论 青海省食源性肉毒中毒病死率整体呈下降趋势,发病地区也逐渐缩小,但作为我国高发地区之一,病死率仍处于较高水平,应进一步加强对高危人群食品安全教育,提高基层医疗机构对肉毒中毒的救治能力,减少中毒事件的发生和死亡。     

聚磷酸盐对新鲜肉糜的抗菌作用

大量研究指出!聚磷酸盐能增加肉类的容水能力和降低烹调时的水分损失。为此,它常作为一种食品添加剂而使用,其法定限量是0.5％,Molins等人在1985年发现:酸式焦磷酸钠 SAPP对烹调后在24～25°C下经48小时的真空包装的猪肉香肠,具有抑制细菌生长的作用,其中包括被接种入的产芽胞梭状芽胞杆菌PA3679。Wagnes等人也发现SAPP能抑制牛/猪肉香肠乳胶中肉毒梭状芽胞杆菌的生长和毒素的分泌。     

基于环介导等温扩增技术的产呕吐毒素 蜡样芽胞杆菌特异性检测

本研究旨在建立食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速检测方法。基于产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌合成酶基因cesB靶基因,设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立环介导等温扩增技术(LAMP)。然后采用2株产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌、19株蜡样芽胞杆菌和41株非蜡样芽胞杆菌验证了该LAMP具有很好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到1.49 pg/μL,纯菌的灵敏度为5×10~3 cfu/mL。人工污染米饭样品,当起始污染量为2 cfu/g时,37℃增菌培养6 h,用试剂盒法和煮沸法提取的DNA,都可以检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌。采用此LAMP方法进行了72份实际样品的检测,检出2份产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌阳性样品,与传统方法一致。因此,本研究建立的LAMP检测方法可应用于食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速特异检测。