产有机磷农药降解酶菌株的筛选及酶学性质研究

通过用乙酰胆碱酯酶抑制法检测有机磷农药,从土壤中分离筛选出能降解敌敌畏的7个菌株,从其中降解能力较强的菌株OPD7提取胞内酶,并进行酶学性质的研究。结果表明,该酶分解敌敌畏的最适pH为7.0,最适温度为42℃,pH稳定范围为6-8,在低于47℃时稳定;该酶也能降解乙酰甲胺磷、甲胺磷、乐果和氧化乐果。     

有机磷农药降解酶opdA的提取和酶学性质

采用硫酸铵进行分级沉淀,使有机磷农药降解酶opdA得到了纯化,提纯倍数为2.29,回收率为55.1%,用SDS-PAGE聚丙烯酰胺进行电泳,确定opdA的分子量为35KDa。该酶在温度为25～40℃区间时稳定性良好,35℃时酶活最佳。在pH6～10区间稳定,最适反应pH9。重金属Mg²⁺、Mn²⁺对酶活呈现促进作用,而Fe²⁺、Al³⁺对酶活抑制作用明显。本文选择5种有机磷农药进行降解试验,降解酶opdA均呈现很好的降解作用。     

大豆过氧化物酶基因的克隆及其表达载体的构建

大豆过氧化物酶(soybean peroxidase,sbp)基因的克隆及其表达载体的构建将有利于人们更深入的从分子生物学角度研究sbp 基因的结构与功能。首先从大豆根中获取总RNA,通过RT-PCR 获得sbp 基因。再将sbp 基因与表达载体pPICZα-A 双酶切后连接,构建重组表达载体pPICZα-A-sbp。将pPICZα-A-sbp 转化大肠杆菌筛选阳性克隆体并测序。结果表明：获得的sbp 基因序列与已报道的sbp[U51191(GmEpa1)]基因序列有92% 的同源性。重组表达载体pPICZα-A-sbp 的成功构建为其在毕赤酵母中表达奠定了基础。     

我国研制成功“有机磷农药降解酶制剂”

中国农业科学院宣布，一项新技术成果“有机磷农药降解酶制剂”，近日在我国研制成功。这种新型的、具有完全自主知识产权的科研创新成果，能够有效降解有机磷农药、彻底除去农产品的农药残留。据介绍，该成果已在中试水平上（3吨发酵罐）确立了利用基因工程酵母菌生产有机磷降解酶的稳定的发酵工艺，其发酵方法简单易行，发酵原料易得，技术指标优越，     

玉米赤霉烯酮降解酶基因mbZHD的原核表达及其降解毒素初步研究

玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是由镰刀菌属产生的次生代谢物,是极易污染粮食作物的真菌毒素之一。ZEN具有强烈的雌激素样效应及致癌性,给人类和动物的健康造成巨大威胁。本研究在NCBI数据库中进行同源比对,获得了一些ZHD101降解酶的同源基因,其中,1个来源于真菌——杨盘二孢菌(Marssonina brunnea)的蛋白序列与ZHD101具有32%的同源性,基因大小为861 bp。通过化学合成方法得到该全长基因,通过构建E.coli原核表达系统进行蛋白表达,蛋白经亲和色谱纯化后对ZEN分子进行降解活性验证,HPLC结果表明,该蛋白在6 h内对10μg ZEN分子的降解率为98%,酶活为200 U/m L,从而获得了1个新的ZEN降解酶基因。     

鞘氨醇单胞菌属菊粉酶基因lev的克隆、表达及酶学性质的研究

基于454高通量测序细菌JB13全基因组,获得一个编码菊粉酶的基因lev,该基因全长为1518bp,编码505个氨基酸组成的多肽,成熟蛋白的理论分子量为55.70ku。将基因lev克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物具有菊粉酶活性,并初步研究了该酶的酶学性质。结果表明:酶作用的最适pH为5.5,最适温度为50℃,该研究为鞘氨醇单胞菌属来源菊粉酶的首次报道。     

白菜中二硫代磷酸酯类有机磷农药降解动力学研究

培养8 叶期无菌白菜幼苗,添加5 种二硫代磷酸酯类有机磷农药（马拉硫磷、乐果、甲拌磷、乙拌磷及特丁硫磷）,用气相色谱及液相色谱-质谱联用法检测二硫代磷酸酯类农药及O,O-二甲基二硫代磷酸酯残留量。结果表明：二硫代磷酸酯类农药的含量在实验过程中呈减少的趋势,农药在样本培养过程被逐渐降解,10 d内降解水平为13.4%～65.0%,无菌苗添加药物组降解速率明显低于正常培养添加药物对照组。使用一级反应动力学模型对农药代谢动力学进行评价,无菌条件下马拉硫磷降解速率最快,降解速率常数为0.034 67,降解半衰期为19.9 d,特丁硫磷降解速率常数最小,降解速率常数为0.007 17,降解半衰期为96.7 d,乐果、甲拌磷及乙拌磷相对稳定,但降解动力学差别较大。     

超声波/臭氧降解有机磷农药的研究进展

有机磷农药降解技术正受到越来越多的关注.本文介绍了超声/臭氧技术降解有机磷农药的基本物理化学机理以及在国内外的研究现状,讨论了有机磷农药超声/臭氧降解的研究成果,分析了今后有机磷农药降解新的研究方向.     

臭氧对有机磷农药残留降解效果及检测方法的研究

实验采用臭氧对敌敌畏、甲胺磷、久效磷、乙基对硫磷四种有机磷农药残留进行降解,并分别采用了酶抑制法和气相色谱法对其降解效果进行检测.结果表明,一定浓度的臭氧,作用不同时间,对上述四种有机磷农药残留均有不同程度的降解作用,作用10min即可达到较为理想的降解效果.其中,对甲胺磷降解作用最强为81.72%,敌敌畏57.86%、乙基对硫磷56.78%、久效磷47.53%.     

酶抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留

对酶抑制法快速检测有机磷农药残留进行研究.以鲫鱼脑、肝脏和肌肉乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)为检测用酶,对5种蔬菜中有机磷农药残留进行检测.根据AChE酶活抑制率和农药抑制方程,判断农药残留情况.当AChE酶活抑制率大于35%时,可判断该样品中农药残留超标.结果表明,试验中5种蔬菜样品农药残留均未超标.除豆角外,该方法的回收率均在80%～120%之间,表明该方法的检测结果准确可靠.     

生物荧光酶抑制法快速定性测定粮食中有机磷类和氨基甲酸酯类农药残留

建立了生物荧光酶抑制法测定粮食及其制品中的有机磷类及氨基甲酸酯类的农药残留快速定性检测方法.样品通过乙酸乙酯∶丙酮(体积比为95∶5)提取离心净化,取50 μL上清液45℃氮气吹干,1 mL蒸馏水或去离子水复溶进行检测.结果表明,本方法测定粮食及其制品中的有机磷类及氨基甲酸酯类农药残留时,最低检测限为0.1 μg/kg...     

高通量酶抑制法快速测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留

目的 建立一种室温下高通量酶抑制法快速测定蔬菜中农药残留的方法。方法 从酶抑制法检测原理出发,以阳性蔬菜样品为研究对象,通过对提取剂、提取时间及反应体系的选择和优化,确立酶反应体系。采用该方法检测市售蔬菜样品,对筛选出阳性样品进行定量检测复核,验证方法有效性。结果 蔬菜样品用乙腈作为提取液,采用超声提取,上清液氮吹后加入磷酸盐缓冲溶液(pH 8.0)作为最终样液,农药提取效率最高,且不会对酶抑制法反应体系造成影响。采用优化后的高通量农药速测方法,以室温(25±5)℃下酶抑制率≥40%作为阳性判定标准,对筛选出的734个阳性样品进行仪器定量分析复核,检出符合率达到92.1%。结论 该方法有效提升了农药提取效率和检测效率,可有效用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。     

超声波农药降解机降解效果研究

以超声波农药降解机为主的净菜加工生产线为试验设备,研究超声波功率和超声波辐射时间对小青菜表面残留的有机磷和氨基甲酸酯类农药降解的影响。结果表明,超声波功率对于有机磷和氨基甲酸酯类农药降解的影响非常明显,但当功率达到一定程度时农药降解趋于稳定。有机磷和氨基甲酸酯类农药降解率随着超声波辐射时间的延长而提高。考虑生产效率,对有机磷和氨基甲酸酯类农药的降解超声波功率可取2.4kW,超声波辐射时间取4 min,降解率可达到80%。     

乙酸异戊酯高产菌株脂肪酶基因Lip2的克隆及表达研究

通过PCR扩增了乙酸异戊酯高产菌Loq-c的脂肪酶基因Lip2,其序列与Gene Bank中的Candida cylindracea Lip2 gene（序列号X64704.1）的序列相似度最高,为89%。构建原核表达载体p QE-lip2,转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3）,获得了重组菌BL21（p QE-lip2）。经过表达条件探索,用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,脂肪酶Lip2原核可溶表达最佳条件为:诱导温度30℃,IPTG使用浓度为1.5 mmol/L,150 r/min转速的条件下诱导表达5 h。      

基于酶抑制法的农药残留快速检测仪器现状及评价

为了确保果蔬类农产品的食用安全, 对蔬菜瓜果进行农药残留的检测十分重要。本文通过对我国农药残留快速检测仪器的发展现状和评价方法的讨论, 分析了基于酶抑制法的农残速测仪器现存的主要问题, 并提出进行农残速测仪器评价工作的必要性。     

酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留

目的 建立一种酶抑制-数字图像比色法检测和鉴别食品中二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药残留的分析方法。方法 采用简单的胶带黏贴剥离方式,结合低共熔溶剂洗脱对食品样品中的农药进行高效提取。基于二硫代氨基甲酸酯、氨基甲酸酯和有机磷类农药对酪氨酸酶的抑制活性,使酪氨酸酶对酚类物质的氧化能力降低,进而影响酚类物质与氯化铁生成有色物质的反应,建立酪氨酸酶、酚类物质和氯化铁的比色阵列传感器,实现农药的残留分析,并结合主成分分析实现多种农药的区分。结果 本研究建立的酶抑制-数字图像比色法对番茄、苹果和玉米中福美锌残留在0.008～8.000mg/kg的范围内线性良好,检出限为0.003 mg/kg,定量限为0.008 mg/kg,回收率为75.2%～94.9%,相对标准偏差小于5.0%。结论 本研究建立的酶抑制-数字图像比色法绿色环保、简单高效,且易于推广,适用于蔬菜、水果和谷物等食品样品中农药残留的检测,并且在多种农药的残留分析方面有良好的应用前景。     

脉冲强光杀菌对酶的钝化作用研究

采用自己研制的脉冲强光杀菌装置，研究了脉冲强光杀菌对酶的钝化作用，结果表明，脉冲强光能使溶液状态的淀粉酶和蛋白酶钝化，两种酶的活力均随闪照次数的增加而明显降低，闪照４０次后，酶活力分别下降７０．４％和９０．３％。两种酶若以固体状态被闪照，其活力均基本没变。输入电压、闪光间隔及分段闪照等因素对酶活力无显著影响。     

Effects of storage conditions and fruit processing on the degradation of parathion methyl on apples and lemons

Degradation of parathion methyl on lemon and apple on the trees, during storage of these fruits in refrigerated rooms, and during juice production was studied. The pesticide was applied to the trees according to the recommended application procedures. Apples and lemons received a single application of parathion methyl at 40 g active ingredient/100 litres. Residues were determined with a simple gas-chromatographic method; the recovery rate of parathion methyl from apples and lemons was 85-108% and the limit of determination was 0.004 mg kg^-1. The half-lives of parathion methyl on the trees were 7 days for apples and 5 days for lemons. The duration of storage of the fruits in a refrigerated room have been largely extended to 65 and 63 days, respectively. The high acidity of lemons was found not to affect the degradation rate of parathion methyl. When fruit juice was produced from both apples and lemons, parathion methyl residues were detected in apple but not in lemon juice.     

臭氧降解蔬菜中农药残留机理与效果研究

研究了臭氧降解蔬菜中农药残留机理和效果。结果表明，臭氧对甲胺磷、氧化乐果、敌敌畏、对硫磷和溴氰菊酯均有较强的降解作用。甲胺磷降解速度最快，其次为溴氰菊酯、氧化乐果、敌敌畏、对硫磷。不同种类蔬菜中以叶菜中农药残留最易降解，其次为莱豆、果莱。经5min处理结果比较，臭氧与果蔬清洗剂对叶菜中农药残留的清洗效果相当，对茄果类蔬菜臭氧清洗效果优于果蔬清洗剂。