小麦芽部分阿魏酸酯酶酶学性质的研究

以脱淀粉麦麸作为底物测定小麦阿魏酸酯酶的酶活,探讨了小麦阿魏酸酯酶的部分酶学性质。结果表明,阿魏酸酯酶最适反应温度为35℃,酶活为0.126 U/g;最适反应p H为6.0,酶活为0.125 U/g;在25~35℃保存120 min比较稳定,存活率在97.9%以上;60℃保温120 min,酶的存活率仅为4.6%,基本失活;65、70、75℃保存时,分别在80、20、10 min的时候,酶失活;阿魏酸酯酶在p H5.5~p H6.0条件下保存最稳定。Ca2+对酶活力有显著的激活作用;Hg+和EDTA对酶活力有显著的抑制作用。     

鼠李糖乳杆菌LGG芳香酯酶的酶学表征与结构分析

为获得新型益生菌酯酶资源,通过挖掘鼠李糖乳杆菌（Lacticaseibacillus rhamnosus GG,LGG）的基因组信息,对芳香酯酶LggAE进行基因克隆、表达纯化、酶学表征与结构分析。结果表明：LggAE的最适反应pH值为7.5,在pH 7.0～10.0范围内保持75%以上酶活力,最适反应温度为50℃,偏好水解中链对硝基苯酚酯,最适底物为对硝基苯酚辛酸酯,在40℃条件下具有一定热稳定性,乙二醇可提升LggAE 17.3%酶活力,LggAE耐受二甲基亚砜,在较高盐浓度柠檬酸钠和氯化钠存在下能保持39.1%～71.0%酶活力,脱氧胆酸钠在高温下显著抑制酶活力。结构分析显示LggAE的底物结合口袋呈较小孔洞状,主要由脂肪族氨基酸残基构成。     

固定化对动植物酯酶性质的影响

比较了离子交换法得到的固定化小麦酯酶和固定化鸡肝酯酶的主要性质与相应的游离酶的性质。结果表明 ,固定化小麦酯酶的最适pH在 5 5附近 ,比游离小麦酶的最适 pH增加了0 8个 pH单位 ;固定化鸡肝酯酶的最适pH在 8 0附近 ,比游离鸡肝酯酶的最适 pH增加了 0 5个pH单位 ;固定化小麦酯酶的最适温度与游离酶的相当 ,但酶活力 温度曲线的峰形变小 ;固定化鸡肝酯酶的最适温度比游离鸡肝酯酶的下降了 5℃ ,酶活力 温度曲线的峰形也略变陡峭。这 2种固定化酯酶对有机磷类农药 (敌敌畏 )抑制的响应明显高于游离酶对农药抑制的响应     

超嗜热细菌Thermotoga maritima酯酶Tm1350克隆、表达及其酶学性质研究

以超嗜热细菌Thermotoga maritima基因组DNA为模板,通过PCR法扩增酯酶Tm1350基因,构建重组质粒p ET15b-Tm1350,在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中实现表达,并采用p-NPA方法测定其酶活性。研究结果表明,酯酶Tm1350可以水解不同碳链长度(10C)的对硝基苯酚酯,其中对硝基苯酚戊酸酯(p NP-C5)是该酶最适合底物;该酶最适反应温度和p H分别为70℃和6.5,90℃处理5h,仍有50%以上的酶活力,具有较强的热稳定性。酯酶Tm1350对金属离子、抑制剂、变性剂和有机溶剂具有较强的抗性。     

真菌木聚糖酶产生菌的筛选及酶学性质研究

本实验通过土壤稀释涂布法,经过初筛、复筛,筛选出了两株酶活力较高真菌菌株C4 和G1,在此基础上对它们生长的最佳碳源选择、酶学性质进行了研究。结果表明：菌株C4 产酶的最佳碳源为玉米芯－麸皮,培养24h 就可以达到产酶高峰,其酶活力达6582.29U/ml。此酶反应最适温度为40℃,在50℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,并且pH 稳定性比较好;菌株G1 产酶的最佳碳源为玉米芯,培养96h 就可以达到产酶高峰,其酶活力到达6301.04U/ml。此酶反应的最适温度是40℃,在40℃以下比较稳定,最适反应pH 值为5.0,但pH 值稳定性不如菌株C4。     

小麦与小麦芽阿魏酸酯酶酶活力的测定及其酶学性质研究

以阿魏酸乙酯作为底物,确定了阿魏酸酯酶的酶解工艺条件:酶解时间100 min;酶液与底物的体积比为0.75;提取液pH值6.2。针对阿魏酸酯酶酶学性质的研究表明:最适温度60℃,30～35℃范围内热稳定性较强,保温60 min后其活力可保持在80%以上;最适反应pH值5.0,在pH值5.0～5.6范围内对阿魏酸酯酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可保持在80%以上;Cu2+和Zn2+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,而ED-TA则对其有明显的促进作用。对5种小麦及其麦芽的阿魏酸酯酶酶活力进行测定:麦芽中的阿魏酸酯酶酶活均高于小麦,其中以烟2415、鲁麦21、郑麦004变化较大。     

壳聚糖固定化单宁酶及其澄清绿茶汤的应用研究

以固定化单宁酶的酶活和活力回收为指标,筛选出壳聚糖海绵载体固定化单宁酶。与游离酶相比,固定化酶的最适反应pH向酸性偏移0.5,最适反应温度提高5℃;对金属离子和EDTA的稳定性均增强。固定化酶的半衰期也明显延长,4℃时半衰期由35.39h延长至324.25h,25℃时半衰期仍高达189.56h。分别以没食子酸甲酯溶液和绿茶汤为底物,经连续6批次酶促反应,固定化单宁酶的酶活保持稳定。经固定化单宁酶处理后,绿茶汤澄清度、贮存稳定性明显提高。     

黑曲霉果胶酯酶在毕赤酵母中异源表达、性质分析及脱酯工艺优化

果胶酯酶作为一种食品酶制剂,因其能够将高酯果胶的甲酯基脱去生成低酯果胶而受到广泛关注,但目前国内尚无自主研发的商品果胶酯酶。为了促进果胶酯酶的应用,该研究合成了密码子优化后的黑曲霉果胶酯酶基因,并实现了其在毕赤酵母X33中成功表达。3 L发酵罐高密度发酵96 h后,得到的发酵液上清液中果胶酯酶的活力为85.12 U/mL,是摇瓶水平的7倍,也是目前果胶酯酶表达的最高水平。对重组果胶酯酶进行分离纯化和酶学性质研究,结果表明,重组果胶酯酶的最适pH和最适温度分别是pH 5.0和55℃,K_m和V_max分别是13.8 mmol/L和9.04μmol/(L·min)。该酶的温度稳定性较好,在55℃处理40 min,剩余活力仍保持在60%以上;其pH耐受范围广,在pH 3.5～6.5下处理120 min,仍保持60%以上的剩余活力。以高酯果胶为底物,对该果胶酯酶的脱酯条件进行优化,优化得到的脱酯工艺参数为：30 g/L果胶、加酶量65.4 U/g、脱酯温度50℃、初始pH 5.5、脱酯时间60 min。在此条件下果胶的酯化度从70.8%降至13.6%。该...     

一株产酯酶窖泥细菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

该研究旨在从宋河酒厂窖泥中筛选出一株高产酯酶的菌株,通过形态观察和分子生物学技术对其进行鉴定,通过盐析法纯化酯酶并对其酶学性质进行研究。结果表明,筛选分离出一株高产酯酶的菌株SH-17,被鉴定为约氏不动杆菌（Acinetobacter johnsonii）,其产酯酶活力为2.83 U/mL;经饱和度60%的硫酸铵盐析得到该酯酶分子质量约为42 kDa,最适反应温度为40 ℃,最适pH值为8.0,高温耐受性差,在中性偏碱的环境中相对稳定,且对链长较短的底物催化活性较高,最适反应底物碳链长为6。     

绿僵菌Ma83固态发酵几丁质酶和部分酶学性质的初步研究

研究了金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeMa83菌株产几丁质酶的固态发酵条件和粗酶液的酶学性质。研究结果显示 ,当以麸皮∶蚕蛹粉为 3∶1作为培养基 ,最适氮源为1%NaNO3,起始pH为 6 5 ,发酵温度为 31℃ ,接种量为 2mL液态种子时酶活力最高。此外 ,添加稻壳对Ma83产几丁质酶有促进作用。该菌株在生长 2d时 ,酶活力达 33 9U /g干培养基。酶的最适反应温度为 5 0℃ ,最适反应 pH为 6 0 ;不同温度保温 1h后 ,酶的半失活温度为 42℃。不同 pH值的缓冲溶液中 (2 5℃ )放置 1h后 ,酶在pH 5 0～ 6 0条件下稳定性最高     

柑橘皮中果胶酯酶的生物学特性研究

研究了柑橘皮中的果胶酯酶的生物学特性。用盐析法从新鲜柑橘皮中提取果胶酯酶粗酶液,用pH-stat法测定果胶酯酶的活力。结果表明,该柑橘皮中的果胶酯酶的最适温度在50℃左右,且对热稳定性好,其最适pH在8左右。     

苹果果胶酯酶提取及其酶学性质探究

以国光苹果为原料,通过单因素和正交实验考察了Na Cl浓度、p H、提取温度和提取时间对苹果果胶酯酶酶活的影响,确定了苹果果胶酯酶最佳提取工艺参数,并研究了苹果果胶酯酶的酶学性质。结果表明:在Na Cl浓度为2.5mol/L、p H为8.5、提取温度30℃和提取时间为27h时,苹果果胶酯酶的酶活达到0.98μmol/min·m L;该酶反应的最适温度为40℃,热稳定性较差,最适p H为11;金属离子中Ca2+对果胶酯酶有显著的激活作用,Na+、K+和Fe2+也有一定的激活作用,而Ba2+、Mn2+和EDTA对果胶酯酶有抑制作用。     

曲霉型豆豉酿造中淀粉酶作用条件研究

研究曲霉型豆豉酿造用米曲霉沪酿3.042产淀粉酶的最适作用条件。利用大豆豆汁培养基对米曲霉沪酿3.042菌株进行培养,并用(NH4)2SO4溶液对所产淀粉酶进行沉淀、脱盐处理后,研究该酶的最适作用pH值及pH稳定性、最适作用温度及热稳定性以及NaCl浓度对酶活力的影响。结果显示:该淀粉酶最适作用温度为55℃,最适作用pH值为4.5,酶活力为18.0mg/h,在30~50℃,pH 4.0~6.0范围内其酶活力较稳定;NaCl对淀粉酶酶促反应有明显的抑制作用,随着NaCl浓度的升高,其抑制效果越明显。     

宏基因组来源高活性酯酶的鉴定及其酶学性质表征

土壤中大量的非培养微生物是新酶发现的重要资源。该研究利用功能宏基因组学策略筛选获得高活性酯酶,并对其进行鉴定分析。采用三丁酸甘油酯平板法对土壤微生物宏基因组文库中具有酯酶活性的克隆进行筛选,获得高活性的阳性克隆,通过生物信息学分析和生化实验对酯酶的酶学性质进行研究表征。获得一个比活力高达(3 957±3) U/mg的酯酶AesZF899,该酯酶为不含信号肽的酯酶第四家族胞内酯酶,蛋白大小34 kDa,与来自Afipia sp.P52-10中未表征的α/β水解酶(GenBank登录号为WP＿034470467.1)一致性达76.43%。AesZF899的最佳底物为对硝基苯乙酸酯,酶反应的最适pH值和最适温度分别是9.0和40℃。AesZF899在30℃温育8 h后仍可保持初始活性,在35、40℃分别温育7和4 h后仍可保持50%的活性,在反应温度大于80℃后酶活性丧失。终浓度10 mmol/L的Fe³⁺可以增强酶活性,而终浓度10 mmol/L的Na⁺、Li⁺和Mg²⁺有较强的抑制作用。体积分数为1%...     

液相色谱法测定发酵液中阿魏酸酯酶的活力

基于高效液相色谱法测定产物阿魏酸含量的方法,建立了阿魏酸酯酶酶活力的测定方法。实验采用ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, Agilent),以甲醇∶1%乙酸=70∶30作为流动相,等度洗脱(柱温35℃,流速1.0 ml/min,进样量10μl),在254 nm下测定阿魏酸含量。结果表明,该法测定酶反应产物阿魏酸含量的检测限为69.15μg/L,定量限为234.78μg/L,且在10～100 mg/L范围内呈良好的线性关系,R²=0.999 9,重复性RSD小于1%,加标收回率为99.25%。在此基础上进一步确定阿魏酸酯酶酶活力测定时的酶反应终止液为30%的乙酸溶液。当阿魏酸生成量在15～25 mg/L时,酶反应处于动力学上的线性区。试验待测酶样的最适温度为55℃,最适pH5.0。经检验,该酶活力检测方法的精密度RSD小于3.0%,达到酶活力检测要求。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的分离纯化及酶学性质研究

研究采用DEAE-Sepharose F.F离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析对嗜酸乳杆菌发酵液中的亚油酸异构酶进行了分离纯化,酶回收率为6.39,纯化倍数为37.9倍。经研究确定酶最适pH为6.0,最适反应温度为30℃。在pH 6~8之间,亚油酸异构酶可保持较高活力,超出此范围,酶活力明显下降;该酶对高温敏感,50℃保温2 h,酶活力即变得很低;亚油酸异构酶受底物LA的抑制,酶反应最适LA浓度为1.5×10-5g/mL,过高LA则对酶产生抑制作用。     

产右旋糖酐酶埃氏交替单胞菌的筛选、鉴定及酶活分析

从连云港港口海泥样本筛选到一株产右旋糖酐酶的埃氏交替单胞菌A.espejiana YSN412,对其所产的右旋糖酐酶AesDEX酶学性质进行了分析,对其产酶条件进行了摸索AesDEX最适反应温度为30℃,最适pH值为8在30 ℃下保温2.5h.残余相对酶活在95％以上,而在50℃下保温2.5h后只有14％的残余酶活力.该菌株产酶培养的最佳碳源和氮源,分别是纤维二糖和酵母粉,最适产酶培养温度为30℃,NaCl浓度为2％,初始pH为8时培养液酶活力最高.该菌株培养12h时培养液酶活力达到最高值9U/mL本实验筛选到的4.espejiana YSN412菌株产酶较为迅速,所产的右旋糖酐酶AesDEX酶活最适温度较低,在工业生产上具有潜在降低成本、提高生产效率的优势.     

里氏木霉固体发酵生产纤维素酶的研究

里氏木霉突变株RM—27是一株高产纤维素酶生产菌,采用固体发酵,发酵144h(培养温度29℃),其滤纸酶活和β—葡萄糖苷酶活分别为600和115mg葡萄糖/gDMh。本试验系统研究了各种营养成份和培养条件对RM-27菌株产纤维素酶的影响。最适发酵培养基:稻草杆或小麦杆70g、麸皮30g、硫酸铵3.0g、玉米浆2.0g,加水200ml,自然pH。酶反应最适温度和pH分别为60—65℃与pH5.0。酶pH稳定性较好,在pH3.0—7.0范围内处理3h,残余酶活力在89％以上,该酶经50℃处理30min,剩余酶活力为85.6％。     

裂褶菌(Schizophyllu.commune)酯酶的分离纯化及酶学性质研究

酯酶（esterase,EC3.1.1.1）在食品工业应用广泛。裂褶菌（Schizophyllum commune）ZM37.8的发酵液经85%饱和度的硫酸氨沉淀、DEAE Cellulose52处理后分离纯化得到一种酯酶,该酶分子量大小约为41.2ku;最适反应温度为50℃,70℃保温30min酶活保留70%,有较好的热稳定性;最适作用pH为6.4,pH在5.4～7.4之间较稳定,有较好的耐酸性;Co2＋、Cu2＋、Zn2＋、Li＋、Hg2＋对酯酶有强烈的抑制作用,而Mn2＋、Ca2＋和Fe3＋对其的促进作用明显;该酯酶属于无底物特异性的非特异性酯酶。酶学性质研究表明该酯酶在食品工业有良好的应用前景。     

桑叶多酚氧化酶的固定化及酶学性质研究

研究了桑叶多酚氧化酶(PPO)的动力学特性,结果表明,其最适温度为40℃,最适pH为7.0,酶动力学参数Km=0.093mol/L。用浓度质量分数为4%海藻酸钠、体积分数为0.2%戊二醛、0.2mol/L的CaCl2固定多酚氧化酶,固定时间2h,交联时间4h,能使固定化多酚氧化酶的活力达到最大。固定化酶的最适pH为6.0,固定化酶的最佳反应温度为50℃,固定化酶对温度的敏感度降低,温度变化对固定化酶酶活力的影响不大。