青霉素酰化酶在高磁性无机复合材料上的固定化研究

利用共沉淀方法制备出饱和磁化强度为66.2emu/g的Fe3O4,通过溶胶-凝胶进行氨基功能化改性后饱和磁强度仍高达27.2e-mu/g,其剩磁和矫顽力均为0。对不同反应工艺制备的磁性复合载体进行固定化青霉素酰化酶（PGA）,当戊二醛的浓度为0.02%时,固定化酶的起始表观酶活为3198.38 IU/g,当戊二醛的浓度为0.1%时,进行持续间歇8次使用后,活性为起始活性的86.1%。     

新型复合材料MnFe_2O_4@SiO_2-NH_2的制备及其固定青霉素G酰化酶

通过溶剂热法制备出高磁性的聚合物微球MnFe_2O_4,经正硅酸乙酯(TEOS)和3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTS)对微球表面进行改性修饰,制备出新型复合材料MnFe_2O_4@SiO_2-NH_2,并将其用于固定青霉素G酰化酶。在Si/Fe比为7 mmol/g、n(TEOS)∶n(APTS)=1∶1时,固定化酶PGA/MnFe_2O_4@SiO_2-NH_2在37℃下水解青霉素G钾合成6-氨基青霉烷酸,表观酶活为1 660 IU/g、载酶量为107.1 mg/g、比酶活为15.5 IU/mg、活性回收率为46.9%。经过6次重复使用,保留初始酶活的81.3%,在使用中固定化酶在磁场的作用下能够快速沉降与产物分离。     

亲水性环氧聚合物磁性微球的制备及其固定化青霉素酰化酶

通过设计反相悬浮聚合体系,制备了聚甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）-甲基丙烯酸羟乙酯（HEMA）- N,N′-亚甲基双丙烯酰胺（MBAA）亲水性磁性聚合物GHM微球。球中的Fe₃O₄微晶呈倒立尖晶石结构,在微球表面存在着大量环氧基和亲水性的羟基及酰胺等基团,这些功能性基团为青霉素酰化酶（PGA）的固定化提供了适宜的微环境;同时,GHM微球具有的大孔结构和较高的比表面积,使其制备的固定化酶的载酶量高,这些有利因素使得固定化酶PGA/GHM在37℃下水解青霉素G钾合成6-氨基青霉烷酸的表观活性达748 IU·g^-1。 PGA/GHM经15次重复使用,其催化活性未出现明显的衰减,在使用中,固定化酶在磁场的作用下能够快速沉降与产物分离。     

木聚糖成分对木聚糖酶合成的影响

分别以两种含有不同组成的木聚糖为碳原进行产酶研究,结果发现木聚精成分对里氏木霉产木聚糖酶的效果具有重大影响。实验结果表明,用全组分的木聚糖（即用酒精等有机溶剂沉淀下来的木聚糖）诱导合成本聚糖酶的效果要比仅以水不溶性高聚合度木聚糖的效果好。当以全组分的木聚糖为碳源产酶时,不仅产酶周期缩短（仅需2．5d）,而且有利于提高木聚糖酶活力,酶活力、比活力、酶得率及酶产率分别达到34．27IU／mL、78．21;IU／g蛋白质、4895．7IU／g木聚糖和13708．0IU／L·d,酶活力和酶产率分别是以水不溶性木聚糖为碳源时的2．7倍和3．3倍。     

壳聚糖载体柔性固定化木瓜蛋白酶

用酶柔性固定化模型,以壳聚糖为载体,双醛淀粉为柔性链,对木瓜蛋白酶进行柔性固定化. 通过对固定化条件的优化,得出选用壳聚糖、双醛淀粉制得的柔性载体(Chitosan-DAS50)在酶用量为14.4 mg/g(酶/干球)、pH 8的条件下,固定木瓜蛋白酶18 h,所得的固定化酶活力回收率达72%,相当于采用壳聚糖-戊二醛(Chitosan-GA)手臂载体的3倍. 结果表明,酶的柔性固定化模型可以改善传统共价结合法固定化及手臂固定化酶活力回收率不高的缺陷.     

假丝酵母产脂肪酶在壳聚糖和硅胶上的固定化研究

本实验分别壳聚糖和氨基化后的硅胶作为固定化载体,用戊二醛作为交联剂,将脂舫酶共价固定化于载体上,壳聚糖的最佳固定化条件是戊二醛浓度2．5％,给酶量为4125U／g,氨基化硅胶的最佳固定化条件为戊二醛浓度2％,最佳给酶量在3456U／g,固定化酶活为2952U／g,最佳酶活表现率为85％。两种方法所得的固定化酶的耐温性和储藏稳定性都有了显著提高。氨基化硅胶固定化酶在50℃下保温3小时后仍保留有14％的酶活。结果显示假丝酵母产脂肪酶固定于弱亲水性载体上要比固定于强亲水性载体上效果更好。     

聚烯烃纳米级催化剂载体及其纳米复合材料

采用纳米级柱撑插层载体制备烯烃聚合催化剂。载体比表面积为721．23m^2／g，孔体积为0．4536cm^3／g，孔径在4～40nm间分布。所得催化剂比表面积为140．47～300m^2／g，孔体积为0.1519～0．2057cm^3/g及较宽孔径分布1～40nm。对催化剂进行常压聚合考核及其影响因素研究，每克催化剂的活性为20～100g／h,适于烯烃聚合。X射线表征表明其纳米颗粒结构的形成。     

响应面优化淫羊藿抗氧化多酚超声提取工艺

以总多酚得率和DPPH自由基清除率为指标,采用响应面设计法优化淫羊藿抗氧化活性多酚超声提取工艺。结果表明以多酚得率为指标时,最佳工艺条件为：57％乙醇,料液比28 mL／g,在50℃下超声提取25 min,总多酚得率为34．58 mg／g;以DPPH自由基清除率为指标时,最佳工艺条件为：58％乙醇,料液比30 mL／g,在50℃下超声提取22 min, DPPH自由基清除率为88．4％。     

新型填料PVF的制备及其同时硝化反硝化反应的研究

制备了一种新型的高分子多孔载体-活性PVF泡沫填料。这是一种在悬浮填料移动床工艺中为微生物提供附着生长的新型载体。由于具有通孔结构，使载体从表面到内部形成不同溶解氧梯度，因此能够在一个反应器内发生同时硝化反硝化反应（SND）。研究表明，PVF填料适宜的活性炭含量是8％，表观密度0．85g／cm^3，孔隙率60％，具有一定的强度，可以很好抵御水力冲刷。在复合式生物反应器中加入活性PVF泡沫填料处理模拟生活污水，发生SND的工艺条件为：溶解氧（DO）为2．0～2．2mg／L，碳氮比（COD／NH4^＋-N，简写为C／N）为20。     

广藿香精油对斜纹夜蛾拒食活性

采用不同浓度的广藿香的全草精油，研究其对斜纹夜蛾幼虫拒食作用。试验使用2．5～40mg／ml广藿香油分别对斜纹夜蛾幼虫进行饲喂。结果都表现出较强烈的拒食活性。在非选择性条件下处理后24h的拒食中浓度AFC50为68．88μg／ml，处理后48h的AFC50为94．40μg／ml。在选择性条件下处理后24h的拒食中浓度AFC50为36．23μg／ml。     

微波辅助法提取紫甘薯中的原花青素及含量的测定

研究了以紫甘薯为原料,利用微波辅助法提取原花青素时提取剂浓度、料液比、微波处理时间等因素对提取率的影响。结果表明,在此最佳实验条件下,即以盐酸的乙醇溶液为提取液,在乙醇的体积分数为50％,料液比（g：mL）为1．70,微波处理70s,所得的原花青素浸提量为0．96mg／g。     

刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体在大肠杆菌中表达及在tPA纯化中的应用

目的构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化。方法设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达。表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA。结果rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104IU/mg。偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105IU/mg。结论已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化。     

泥炭对重金属废水中Cu^2＋、Pb^2＋最佳吸附条件的研究

泥炭中富含有机质与腐植酸,其中含有大量的极性基团,对金属离子有较强的吸附性能。本试验通过对泥炭吸附重金属废水中Cu^2＋、Pb^2＋种离子的吸附条件进行研究,得出最佳吸附条件为：当重金属离子浓度为30mg／L时,泥炭投加量分别为7g／L和5g／L,最佳吸附pH值分别为5和8,吸附时间均为30min．且离子浓度越高,表观吸附量越大,但除金属率越低。最佳条件下Cu^2＋、Pb^2＋的表观吸附量分别为4．24mg／g和6．00mg／g,除铜率和除铅率分别为98．8％和999％。     

载脂肪酶壳聚糖/海藻酸钙微胶囊的制备

针对固定化脂肪酶的研究背景,以壳聚糖、海藻酸钠为微载体制备材料,采用脉冲电场液滴工艺制备壳聚糖/海藻酸钙微胶囊。以脂肪酶为生物模型,系统考察了制备条件对载脂肪酶壳聚糖/海藻酸钙微胶囊酶活力的影响。结果表明:海藻酸钠质量浓度和酶与海藻酸钠载体配比是影响固定化酶活力的主要因素,载酶量为15mg/mL,海藻酸钠质量浓度为10mg/mL时载酶微胶囊酶活力最高,球形度好。通过改变壳聚糖质量浓度和相对分子质量,可以调控微胶囊膜的厚密程度进而影响固定化酶活力。成膜液pH值依次影响壳聚糖与海藻酸盐分子中官能团的电离状态、成膜反应静电络合程度、酶蛋白包封率,最终影响固定化酶活力。在载酶量为15mg/mL,海藻酸钠质量浓度为10mg/mL,壳聚糖相对分子质量、质量浓度和pH值依次为50kDa、1mg/mL和3.0的条件下,固定化酶活力为187IU/g。     

SBA-15固定化漆酶及其稳定性研究

以大孔径介孔分子筛SBA-15为载体,用吸附法对漆酶进行固定化,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐为底物考察了漆酶的最适pH值以及固定化体系中给酶量对固定化漆酶活性及其稳定性的影响。结果表明,在pH值为3时,漆酶具有较好的活性;固定化漆酶的活性随着酶和载体质量比的升高先升高后降低,当酶和载体质量比为48 mg/g时,固定化漆酶的活性最高;与游离漆酶相比,固定化漆酶可以重复利用,经过8批次的反应后,固定化漆酶的剩余活性仍然达到85%以上,表现出良好的操作稳定性。     

异形玉叶金花果实不同提取部位抗氧化活性研究

以乙醇为溶剂提取异形玉叶金花果实,经减压浓缩后,依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。用DPPH自由鼙的清除能力来评价两个部位的抗氧化活性。结果表明,己酸乙酯部位浓度为283．20μg/mL时自由基清除率大于50％,IC50=304．85μg／mL,正丁醇部位浓度为17760μg／mL．时自由基清除率大于50％,IC50-224．07μg／mL。正丁醇部位抗氧化能力比乙酸乙酯部位更好。     

重组人粒细胞刺激因子注射液比活性的对比分析

目的评估国产重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)注射液比活性的总体水平。方法收集2009及2017年国家抽验性评价部分批次rhG-CSF样品的比活性数据,并与近5年进口注册检验部分批次rhG-CSF样品进行比较分析。结果 2009部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 74×10^8IU/mg,标准差为0. 10×10^8IU/mg;2017部分批次rhG-CSF样品比活性均值为0. 83×10^8IU/mg,标准差为0. 15×10^8IU/mg;进口注册批次比活性数据的均值为0. 93×10^8IU/mg,标准差为0. 17×10^8IU/mg。结论国产rhG-CSF注射液质量不断提升,与进口制品间的差距在逐渐缩小,部分企业制品的质量已达到进口药品水平。     

磁性聚乙烯醇缩丁醛微球固定化α-淀粉酶

制备出磁性聚乙烯醇缩丁醛微球,并用该微球做载体,采用共价交联法固定α 淀粉酶。最佳固定化工艺条件为:pH=6 07,激活和交联时戊二醛的质量分数分别为4%和0 025%。在最佳固定化条件下所制磁性固定化酶的活力为25426 3U/g微球,蛋白载量为187 2mg/g微球,比活为135 8U/mg蛋白,活性回收率为36 9%。磁性固定化酶的理化性质为:磁性固定化酶的最适温度(60℃)比自由酶(50℃)高,最适pH(6 97)与自由酶相同,磁性固定化酶Km(米氏常数)值(5 7×10-4kg/L)较自由酶Km值(5 0×10-4kg/L)大,热稳定性、pH稳定性及操作稳定性均比自由酶有所提高。     

Cu2+改性SBA-16固定化漆酶的研究

以介孔分子筛SBA-16为载体,用浸渍法将Cu2+负载于SBA-16上制备了Cu/SBA-16,然后用吸附法固定化漆酶,以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐为底物考察了漆酶的最适pH值、固定化体系中的载酶量以及Cu2+对固定化漆酶活性的影响。结果表明,在p H值为3时,漆酶具有较高的活性;固定化漆酶的活性随着酶和载体质量比的升高先快速升高然后趋于稳定,当酶和载体质量比为96 mg/g时,固定化漆酶的活性达到较高值;负载Cu2+后,Cu/SBA-16固定化漆酶的活性与Cu2+负载量呈现一定的正相关性。     

11种杀菌剂对水稻纹枯病菌的毒力比较

采用菌丝生长速率法测定了11种杀菌剂对水稻纹枯病菌的抑菌活性。结果表明,水稻纹枯病菌对三唑类杀菌剂己唑醇、苯醚甲环唑、腈菌唑、戊唑醇、烯唑醇、三唑醇的敏感性依次下降,EC50值均在0．5μg／mL以下,EC90值均低于10μg／mL;水稻纹枯病菌对1227和C8—10两种季铵盐阳离子表面活性剂的敏感性高于井冈霉素,但低于三唑类杀菌剂,EC50分别为15．0394μg／mL和4．0735μg／mL;水稻纹枯病菌对苯并咪唑类杀菌剂甲基硫菌灵和多菌灵毒力差异较大,甲基硫菌灵抑菌活性低于井冈霉素,EC50为10．2330μg,／mL,多菌灵的抑菌活性远高于井冈霉素,其毒力与三唑类药剂相当,其EC50为0．2656μg／mL。