高效油脂分解菌的分离筛选鉴定

油脂废水是一种典型的有机污染废水。本论文以餐饮废水为源水，对源水进行微生物的培养、分离，以源水中油脂分解率为指标筛选得到2个高效菌种，分别编号为1#、4#。经测试1#对源水的降解率为33．6％、4#的降解率为40．6％。并根据菌种的个体形态、菌落特征初步鉴定1#为链霉菌属，4#为酵母属。     

发酵木糖生产乙醇菌株的筛选与鉴定

从花圃土和腐朽树皮中各筛选得到一株可以发酵木糖产生乙醇的菌株。乙醇产量分别可达到6.98g/L和6.05g/L。经过18SrDNA同源性的分析,菌株3鉴定为间型假丝酵母（Candida intermedia）,而菌株621则为热带假丝酵母（Candida tropicalis）。对其发酵木糖、葡萄糖和混合糖的产物蒸馏后用气相色谱分析,主产物为乙醇,纯度高,副产物少。两菌株为下一步的菌种基因改造工作提供了研究基础。     

双菌混合发酵丢糟生产微生物油脂的研究

探索利用假丝酵母和皮状丝孢酵母混合发酵丢糟生产微生物油脂的最佳工艺条件.在对假丝酵母和皮状丝孢进行驯化培养的基础上,设定假丝酵母和皮状丝孢酵母的比例、接种量、培养温度、培养时间为4个因素,进行L9(34)正交试验,通过测定油脂含量,获得油脂生产的最佳工艺条件.研究结果表明,双菌发酵丢糟生产微生物油脂的最佳工艺条件:假丝酵母和皮状丝孢酵母的比例为1:1,接种量为9％,培养温度为32℃,培养时间为4d,在该条件下测得每1000g丢糟发酵物中油脂含量为21.14g.     

野生酵母的耐性研究和菌种鉴定

菌株3和621是本实验室筛选得到能发酵木糖产生酒精的野生酵母菌,具有较好的耐高渗透压生长特性,实验表明菌株3可以耐受12％的NaCl、6％的乙醇和58％的葡萄糖;菌株621可以耐受16％的NaCl、4％的乙醇和61％的葡萄糖。经过18S rDNA同源性分析,菌株3鉴定为间型假丝酵母（Candida intetmedia）,而菌株621则为热带假丝酵母（Canada tropicalis）。     

耐酸性α-淀粉酶产生菌的选育

从醋醅中筛选得到一株产耐酸性α-淀粉酶的野生菌ASA-1，经初步鉴定为假丝酵母属的水生假丝酵母(Candida aquatica)，以ASA-1为出发菌株，通过紫外诱变(UV)和硫酸二乙酯(DES)复合诱变，获得产酶较高的ASA-UD86菌株，酶活达到146u／g。     

产碱性脂肪酶热带假丝酵母LYSC-3的筛选、鉴定及发酵条件的优化

以橄榄油为唯一碳源,以溴钾酚紫为显色剂,采用琼脂平板法从富含油脂的土壤中筛选到一株产碱性脂肪酶野生型菌株LYSC-3。经形态学、生理生化和分子生物学的鉴定,确定菌株LYSC-3为热带假丝酵母（Candida tropicalis）。经发酵条件优化,菌株LYSC-3的最佳产碱性脂肪酶的发酵条件为:橄榄油10g·L-1、蛋白胨5g·L-1、蔗糖20g·L-1、（NH4）2SO40.5g·L-1、MgSO4·7H2O0.2g·L-1,K2HPO40.2g·L-1,pH8.0,35℃,150r·min-1摇床振荡培养3d,获得碱性脂肪酶最高酶活力达38.6U·mL-1。      

产碱性脂肪酶热带假丝酵母LYSC-3的筛选、鉴定及发酵条件的优化

以橄榄油为唯一碳源,以溴钾酚紫为显色剂,采用琼脂平板法从富含油脂的土壤中筛选到一株产碱性脂肪酶野生型菌株LYSC-3。经形态学、生理生化和分子生物学的鉴定,确定菌株LYSC-3为热带假丝酵母(Candida tropicalis)。经发酵条件优化,菌株LYSC-3的最佳产碱性脂肪酶的发酵条件为:橄榄油10g·L-1、蛋白胨5g·L-1、蔗糖20g·L-1、(NH4)2SO40.5g·L-1、MgSO4·7H2O0.2g·L-1,K2HPO40.2g·L-1,pH8.0,35℃,150r·min-1摇床振荡培养3d,获得碱性脂肪酶最高酶活力达38.6U·mL-1。     

假丝酵母脂肪酶催化底物水解的初步研究

通过与一种不同来源的脂肪酶作比较,研究了粗状假丝酵母诱变株z6产脂肪酶水解不同底物的相对酶活,包括对低级酯、脂肪酸甘油酯和天然油脂的水解.并对粗耿假丝酵母Z6产脂肪酶催化水解玉米油和大豆油反应中的pH值、温度、时间、油/水比、乳化剂用量和Ca2 浓度等因素进行了研究,得出pH值为7.5,温度为45℃,水解反应时间为21 h,油水比为1/10,乳化剂相对于油的浓度为4%,Ca2 浓度为75 mmol/L时,玉米油和大豆油都有较好的水解率.通过对该酶反应动力学进行研究得出其水解反应的米氏常数Km为12.25×10-3mol/L,最大反应速率Vmax为11.14μmol/min.     

粗状假丝酵母(Candida valida T2)生产脂肪酶的发酵条件

对粗状假丝酵母产生脂肪酶的培养条件进行了研究。结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜培养基组成为:桐油15mL/L,黄豆粉30g/L,糊精10g/L,硝酸铵10g/L,MgSO4·7H2O1g/L,K2HPO42g/L,Tween800.5g/L;最佳培养为温度30℃、发酵液起始pH6,摇瓶发酵脂肪酶活力达到1467U/mL。     

棉花连作土壤中二甲戊灵降解优势菌的分离及其降解能力

采用富集培养的方法分离5株降解二甲戊灵的优势菌,通过生理生化测定,并结合26S rRNA D1/D2区域的碱基序列对菌株进行鉴定。研究了外加碳源(蔗糖)浓度、接种量、二甲戊灵初始浓度对菌株XSP6降解二甲戊灵能力的影响。结果表明,酵母菌XSP6在5 d内对300 mg/L二甲戊灵的降解效果最好,降解率大于50%。通过对菌株XSP6的生理生化测定以及碱基序列分析,初步鉴定其为热带假丝酵母(Candida tropicalis)。在接种量2.5%、外加碳源2%时,XSP6对二甲戊灵的降解率达到最大值66.2%。本研究为农药污染的水体和土壤生物修复提供了理论依据。     

一株高效油脂降解菌的分离鉴定及其性能研究

从餐馆隔油池废水中筛选分离得到一株能高效降解油脂的芽孢杆菌DK-1,经16S rDNA同源性序列分析,鉴定为解淀粉类芽孢杆菌,并进一步考察了菌株的生物量、油脂去除率、CODCr去除率及乳化活性等性能。实验结果表明,菌体的乳化指数为65%,在初始油脂质量浓度为5 g/L,CODCr为55 000 mg/L左右的模拟高含油有机废水中,该菌株能生长并快速降解油脂,在48 h内油脂去除率为97.3%,CODCr的去除率为91.9%。     

乳糖酸生产菌株的筛选与鉴定

乳糖酸具有良好的功能特性.经富集培养,从土壤样品中分离出了201株菌株,经x-gal平板培养基、伊红美蓝合成培养基和指示平板培养基筛选出29株疑似乳糖酸生产菌株.利用薄层色谱法定性鉴定出5株疑似乳糖酸生产菌株,最终用高效液相色谱法确定出一株优良的乳糖酸生产菌株Y20,其乳糖酸产量为127.65g/L,转化率为85.10％,经生理生化鉴定和16SrDNA分子鉴定,该菌为土生拉乌尔菌.     

乳糖酸生产菌株的筛选与鉴定

乳糖酸具有良好的功能特性。经富集培养,从土壤样品中分离出了201株菌株,经x-gal平板培养基、伊红美蓝合成培养基和指示平板培养基筛选出29株疑似乳糖酸生产菌株。利用薄层色谱法定性鉴定出5株疑似乳糖酸生产菌株,最终用高效液相色谱法确定出一株优良的乳糖酸生产菌株Y20,其乳糖酸产量为127.65g/L,转化率为85.10%,经生理生化鉴定和16SrDNA分子鉴定,该菌为土生拉乌尔菌。      

降解纤维素真菌的分离鉴定及其产酶条件的研究

从腐烂的木头、堆肥及土壤等样品中,通过刚果红染色鉴定和液体发酵培养分离筛选得到2株高产纤维素酶青霉菌株A2和A6,对其产酶条件进行初步优化。结果表明,A2和A6羧甲基纤维素酶活分别为280.14,247.58U;A2最佳产酶条件为接种量15%(V/V),初始pH 5,时间120h,添加一定量Mn2+和Ca2+到培养基中酶活分别升高10.56%和7.95%,加入Fe2+和Hg2+对酶活有一定抑制;A6最佳产酶条件为接种量15%(V/V),初始pH 5,时间96h,添加一定量Mn2+到培养基中酶活升高13.1%,而加入Ca2+、Fe2+和Hg2+对酶活有一定抑制。     

一株葡聚糖酶产生菌的分离选育及鉴定

利用葡聚糖平板初筛,三角摇瓶复筛,从土壤样品中中分离得到一株葡聚糖酶高产菌株P5,发酵酶活力可以达到2.5U/mL。菌株呈长杆状、革兰氏染色阳性、产芽孢;生理生化实验结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌最为相近;16S rDNA基因序列包含1510个碱基对,同源性分析显示该菌株与枯草芽孢杆菌菌株最为相近,最高相似性为99%,基于16S rDNA基因序列的系统发育分析显示,该菌株与枯草芽孢杆菌菌株CD-6及YPM8的亲缘关系最近,根据以上多相分类结果鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。     

一株青霉素钠降解菌的分离与鉴定

从自制的面肥中分离到一株降解青霉素钠的菌株WM1,它能够在以青霉素钠为唯一碳源的无机培养基上生长,采用PCR扩增获得该茵16S rDNA片段,核苷酸序列分析结果表明,该菌株16S rDNA的核苷酸序列与霍氏肠杆菌同源性为97%.     

一株产壳聚糖酶芽孢杆菌的分离及鉴定

采用透明圈法,从黄河三角洲地区的腐败落叶分离出9株产壳聚糖酶的菌株。再经菌株分离纯化、液体发酵复筛及酶活研究,确定其中1株为壳聚糖酶高产菌株,命名为XHT-0903。通过形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定,确定XHT-0903为蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）。其液体发酵酶活力达20 U/mL,具有较好的开发及应用价值。     

生淀粉酶产生菌的筛选和研究

利用透明圈法再经单菌分离纯化从土壤中筛到一株产酶为158U/mL的生淀粉酶产生菌TCCC451031,经16S rDNA鉴定为Paenibacillus属。最适发酵培养基:碳源为2%的玉米粉,最佳氮源为酵母粉与玉米浆混用比例为1∶2,用量为1%。最适发酵条件:35℃、pH值为7.0、转速160r/min,发酵5d酶活达312U/mL。该酶最适作用温度40℃,最适作用pH值为4.2,Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶有一定的激活作用,Cu2+、Mn2+、K+、Fe2+、Ba2+对酶活有抑制作用。     

一株产凝乳酶细菌的分离与鉴定

利用酪蛋白和麸皮培养基从奶牛场土壤中分离出高凝乳活力,低蛋白水解力的细菌.获得22株产凝乳酶细菌,其中菌株BB-23产凝乳酶活力高而蛋白水解活力低,经形态观察、生理生化和16S rRNA鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subalis),该菌株在麸皮培养基发酵72h后产凝乳酶活力达73.80SU/mL,蛋白水解力为16.01U.     

高温碱性果胶酶产生菌的筛选及部分酶学特性研究

从高温堆肥中分离到一株高产碱性果胶酶的菌株DG-3,经形态、生理生化及16SrDNA序列分析将其鉴定为Bacillus licheniformis DG-3,对DG-3菌株所产碱性果胶酶的初步研究表明,该酶适宜温度范围60～70℃,适宜pH为9.8～10.5。温度稳定性实验表明,碱性果胶酶具有较高的耐热性;6mmol/L的Ca2+对碱性果胶酶具有显著的激活作用。在最适作用条件下,发酵液中碱性果胶酶的酶活达42U/mL,在国内尚未见报道。